ICS13.300;11.100 A80 中华人民共和国国家标准 GB/T35520—2017 化学品 胚胎毒性 胚胎干细胞试验 ChemicalsEmbryotoxicityEmbryonic stem cell test 2018-07-01实施 2017-12-29 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 35520—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中国化工经济技术发展中心、常州进出口工业及消费 品安全检测中心、宁波出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：李海山、陈会明、韩辉、崔媛、王晓兵、刘君峰、陈小青、程艳、艾文超、谢文平。 GB/T35520—2017 引言 小鼠胚胎干细胞（Embryonicstemcells，ES）在不同的培养条件下会分化为不同的胚胎组织。因 此，一些研究小组使用小鼠ES细胞进行体外胚胎毒性试验。Laschinski等比较了ES细胞和小鼠纤 维母细胞的细胞毒性，以评估致畸物的潜在胚胎毒性。Heuer等[2-3比较了ES细胞的细胞毒性和分化 抑制。Newall和Beedlest测定了培养7d后，致畸物对ES细胞的细胞毒性和集落形成能力的影响， 这适用于常规测试，因为集落形成这一终点可自动化完成。在所有这些试验中，只有一些胚胎毒性物能 够被正确分类。这可能是由于在ES试验中选择2个终点不足以评估胚胎毒性。 为克服上述ES细胞试验的限制，Spielmann等确定了3个不同的试验终点（半数分化抑制浓度、 D3细胞半数生长抑制浓度和3T3细胞半数生长抑制浓度）。根据这些终点可导出3个变量。所得的 3个变量作为受试物分为3个体内胚胎毒性等级的依据。这种方法有利于给出胚胎组织与成体组织之 间对化合物细胞毒性损伤的敏感性差异。事实上，利用判别分析已将16种受试化学品正确归人已知的 3种体内胚胎毒性等级[5-61。这是第一个不处死妊娠动物而获得体外培养所需胚胎组织的体外胚胎毒 性测试。 向于自发分化。 此外，根据制定的性能标准，欧盟替代方法验证中心（EuropeanCentrefortheValidationofAlter nativeMethods，ECVAM)验证研究表明体外数据和体内数据之间具有较好的相关性（准确性78%）。 据报道，强胚胎毒性化学品的预测性（100%）极好、精确度（81%）良好。据报道，无胚胎毒性物质和胚胎 毒性弱的物质的预测性（分别为72%和70%）和无胚胎毒性物质的精确度（70%）较高（65%）7。 测模型的训练集未包括具有类似细胞毒性模式的化学品。 Ⅱ GB/T35520—2017 化学品、胚胎毒性胚胎干细胞试验 1范围 本标准规定了化学品胚胎毒性胚胎干细胞试验的术语和定义、试验原理，试验方法、质量控制和结 果评价 本标准适用于应用胚胎干细胞试验测试化学品的胚胎毒性。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 半数分化抑制浓度 median inhibition of differentiation ID50 化学品抑制50%ES细胞分化为心肌细胞的浓度 2.2 D3细胞半数生长抑制浓度 medianinhibitionofgrowthofD3 IC50 D3 化学品抑制50%ES细胞系D3生长和活性的浓度。 2.3 3T3细胞半数生长抑制浓度 medianinhibitionofgrowthof3T3 IC50 ST3 化学品抑制50%3T3细胞生长和活性的浓度。 3试验原理 胚胎毒性测试或用妊娠动物进行体内试验，或用培养的胚胎以及取自妊娠动物的胚胎组织、细胞进 行体外试验。不管体内还是体外测试，都得处死妊娠动物81。利用胚胎干细胞体外培养无限增殖与分 化的潜能，提出了一种利用小鼠永生化细胞系的体外胚胎毒性测试，即胚胎干细胞试验[9。 本试验是基于胚胎毒性作用中最重要的指标，即受试物对胚胎组织和成体组织的毒性损伤存在敏 感性差异，这种差异与胚胎分化抑制密切相关。使用两个永生化小鼠细胞系，ES细胞（D3）和纤维母细 胞（3T3细胞）分别表示胚胎组织和成体组织。只有在添加小鼠白血病抑制因子（mLIF）的培养条件下， ES细胞保持在未分化阶段才可进行该试验。去除未分化状态，ES细胞会形成拟胚体（EB），并在适当 条件下分化为主要胚胎组织。 细胞毒性数据表明,ES细胞比成体细胞对毒性药剂更敏感。ES细胞分化抑制和ES细胞与3T3 细胞生长抑制是EST中用于预测化学品潜在胚胎毒性的3个选用的终点。 1