ICS 11.220 CCS B 41 DB51 四川省 地方标准 DB51/T 3303—2025 鹅星状病毒病诊断与防控技术规范 2025 - 09 - 15发布 2025 - 10 - 15实施 四川省市场监督管理局 发布 DB51/T 3303 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............. 1 5 实验室生物安全措施 ................................ ................................ . 1 6 临床诊断 ................................ ................................ ........... 2 7 实验室诊断 ................................ ................................ ......... 2 8 鹅星状病毒病综合判定 ................................ ............................... 3 9 防控措施 ................................ ................................ ........... 3 附录A（规范性） RNA提取及反转录 ................................ ..................... 5 附录B（规范性） 鹅星状病毒 RT-PCR检测 ................................ ................ 6 附录C（规范性） 鹅星状病毒 RT-qPCR检测 ................................ ............... 8 参考文献 ................................ ................................ ............. 10 DB51/T 3303 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由四川省农业农村厅提出、归口 、解释并组织实施 。 本文件起草单位：西南民族大学。 本文件主要起草人： 张焕容、杨发龙、张凯、陈果。 DB51/T 3303 —2025 1 鹅星状病毒病诊断与防控技术规范 1 范围 本文件规定了鹅星状病毒病的临床诊断、实验室诊断和防控措施，包括流行特征、临床症状、剖检 病变、分子生物学诊断、病毒分离鉴定等诊断依据，以及预防措施 、疫情处置等防控技术。 本文件适用于鹅星状病毒病的诊断、预防和控制。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T 45093 水禽新型星状病毒病诊断技术 NY/T 541 兽医诊断样本采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 鹅星状病毒病 goose astrovirus disease 又称“鹅痛风”，是由鹅星状病毒（ Goose Astrovirus, GoAstV ）感染雏鹅引发的一种病毒性传染病。 该病毒主要感染 1周~3周龄雏鹅，病鹅主要表现为跛行、全身多组织器官表面广泛性尿酸盐沉积。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 Ct值：循环阈值（ Cycle Threshold ） cDNA：互补DNA（Complementary DNA ） GoAstV：鹅星状病毒（ Goose Astrovirus ） LMH：鸡肝癌细胞系（ Chicken Hepat oma Cell Line ） PBS：磷酸盐缓冲液（ Phosphate Buffered Saline Buffer ） RNA：核糖核酸（ Ribonucleic Acid ） RT-PCR：反转录 -聚合酶链式反应（ Reverse Transcription -Polymerase Chain Reaction ） RT-qPCR：实时荧光定量反转录 PCR（Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR ） TAE：三羟甲基氨基甲烷 -乙酸-乙二胺四乙酸 缓冲液(Tris-acetic acid -EDTA Buffer) 5 实验室生物安全措施 实验操作应在生物安全二级及以上实验室进行，按照 GB 19489 的规定执行。 DB51/T 3303 —2025 2 6 临床诊断 流行特征 6.1 病鹅、隐性带毒鹅、带毒种蛋是主要传染源，自然感染潜伏期 3 d左右，既可垂直传播，也可水平 传播，1月龄以内各品种鹅均易感， 最早可在 3日龄发病， 以 5日龄～20日龄最为常见， 发病率为 60%～90%， 死亡率为 30%～50%，严重时可达 60%。 临床症状 6.2 病鹅精神沉郁，食欲减退或废绝，消瘦，翅下垂，关节肿大，双腿瘫痪倒地，排白色稀便，泄殖腔 周围稀便污染。 剖检病变 6.3 患病鹅心、肝、脾、肺、肾、胃肠道等器官表面，各关节周围及关节腔内，甚至血管周围，可见白 色尿酸盐沉积。 临床诊断结果判定 6.4 同时符合 6.1、6.2和6.3可判定为鹅星状病毒病疑似病例。 7 实验室诊断 器材 7.1 同GB/T 45093 。 样品采集与处理 7.2 按照NY/T 541要求， 采集病鹅的泄殖腔棉拭子， 或采集死亡鹅及濒死鹅的肝、 脾、 肾等实质性器官。 棉拭子采集后立即置于含有 RNA保存液的离心管中， -20℃或以下保存；实质器官样品取 5 g～10 g，置于 RNA保存液中， -20℃或以下保存。所有样品应在 48 h内完成运输。随后，按照附录 A或使用等效的商业 试剂盒提取 RNA，并反转录合成 cDNA。 RT-PCR检测 7.3 以7.2的cDNA为模板，采用附录 B规定的方法检测。 RT-qPCR检测 7.4 以7.2的cDNA为模板，采用附录 C规定的方法检测。 病毒分离培养 7.5 7.5.1 病毒分离样品的处理 取10 g～20 g在7.2或7.3中检测为阳性的病死鹅肝、脾、肾等组织样品剪碎，与无菌生理盐水按 1:5 （W/V)比例混合并磨碎，反复冻融三 次，8 000 r/m 、4℃离心15 min后取上清， 0.22 µm滤膜过滤除菌 后备用。 7.5.2 细胞分离病毒 DB51/T 3303 —2025 3 7.5.2.1 LMH细胞准备 当LMH细胞培养至 80%汇合度后，备用于病毒分离。 7.5.2.2 病毒分离培养 吸弃细胞培养液，用无菌 PBS洗涤细胞 3次后，将 7.5.1处理好的样品 1 mL接种到25 cm2细胞瓶的单 层细胞上， 在 CO2培养箱中 37℃感作， 期间每间隔约 15 min水平轻轻晃动细胞瓶， 感作 1 h后弃去接种液， 添加细胞维持培养液，在 CO2培养箱继续培养。连续培养 5 d，每天观察细胞状态；待细胞液变黄， -80℃ 反复冻融 3次，经5000 r/m 离心10 min，取上清，其中 300 μL用于提取 RNA并反转录成 cDNA后作为模板， 用7.2或7.3的方法检测，其余上清置 -80℃保存。 7.5.3 鹅胚分离病毒 7.5.3.1 鹅胚准备 将鹅星状病毒抗原抗体双阴性的非免疫鹅胚置于孵化器中 37℃下孵育至 11日龄～13日龄， 用于病毒 分离。 7.5.3.2 鹅胚接种 取7.5.1中处理的样品液每胚 0.5 mL接种鹅胚尿囊腔，同时设生理盐水接种对照胚，置于孵化器中 37℃下孵育并每天观察鹅