ICS65.020.20 CCSB61 35 福建省地方标准 DB35/T2256—2025 海峡两岸共通建兰组培苗生产技术规程 Cross-straitintegrateddevelopment—Technicalregulationsforproductionof tissue-culturedseedlingsofCymbidiumensifolium 2025-06-10发布 2025-09-10实施 福建省市场监督管理局  发布DB35/T2256—2025 I目次 前言..................................................................................II 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3术语和定义..........................................................................1 4培养基配制..........................................................................1 5无菌操作............................................................................3 6外植体..............................................................................3 7诱导培养............................................................................4 8继代培养............................................................................4 9生根培养............................................................................4 10炼苗...............................................................................5 11组培苗质量.........................................................................5 12生产档案...........................................................................5 附录A（资料性）MS基本培养基成分及母液配制...........................................6 参考文献...............................................................................7DB35/T 2256 —2025 II前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由福建省林业局提出并归口。本文件起草单位：福建省林业科技试验中心、台湾国兰联合协会、福建省农业科学院作物研究所、 三明市清龙生态兰花有限公司、南靖麒浩花卉有限公司、厦门市气象服务中心。 本文件主要起草人：朱尾银、高小坤、祁小波、汤珺琳、王玉雯、程习梅、谢鸿猛（台湾地区）、 李秀娟、陈翔、罗文熠、钟淮钦、郑静、赖张龙、赵旻骏、林阳期（台湾地区）、徐建球、朱育端、吴鹏程、张毅智、蓝家富、张德胥（台湾地区）、吕志鹏、汪浩鑫、陈明渊、施晓芬。DB35/T 2256 —2025 1海峡两岸共通 建兰组培苗生产技术规程 1范 围 本文件规定了建兰（ Cymbidiumensifolium ）组培苗的培养基配制、无菌操作、外植体、诱导培养、 继代培养、生根培养、炼苗、组培苗质量和生产档案等内容。 本文件适用于建兰组培苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 2306—2013 花卉种苗组培快繁技术规程LY/T 2289 林木种苗生产经营档案 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 根状茎 rhizome在建兰组培苗繁育过程中，利用外植体诱导形成的横向生长的变态茎。 注：俗称“龙根”。 3.2 僵苗 zombie seedlings在建兰组培苗繁育过程中，停滞生长的根状茎、芽或苗。 3.3 母瓶 mother bottle在建兰组培苗繁育过程中，装有建兰母种的培养瓶。 4 培养基配制4.1 培养基配方 4.1.1 基本培养基 基本培养基MS配方见附录A。 4.1.2 诱导培养基DB35/T2256—2025 21/2MS＋6-BA5.0mg·L-1＋NAA0.2mg·L-1＋活性炭0.2g·L-1～0.5g·L-1。添加蛋白胨2.0g·L-1～3.0g·L-1， 琼脂粉5.5g·L-1～6.5g·L-1或卡拉胶7.0g·L-1～8.0g·L-1，白糖20g·L-1～30g·L-1，pH5.6～5.8。 4.1.3继代培养基 1/2MS＋6-BA2.0mg·L-1～5.0mg·L-1＋NAA0.2mg·L-1～1.0mg·L-1＋活性炭0.2g·L-1～0.5g·L-1。添加 物同4.1.2。 4.1.4生根培养基 l/2MS＋6-BA0.1mg·L-1～0.5mg·L-1＋NAA0.5mg·L-1＋IBA0.5mg·L-1＋活性炭1.0g·L-1～2.5g·L-1。 添加物同4.1.2。 4.2母液配制 4.2.1药品纯度 配制母液用的大量元素、铁盐等药品宜为化学纯（CP），微量元素、有机物宜为分析纯（AR），植 物生长调节剂宜为生化纯（BR）。 4.2.2配制方法 母液配制浓度见附录A，注意事项如下： a)每种大量元素单独配制成母液； b)铁盐的配制，应将FeSO4·7H2O、Na2·EDTA（乙二胺四乙酸二钠）分别溶解后，再充分混合； c)微量元素的配制，应将每种化合物溶解后，再充分混合； d)有机物的配制方法同4.2.2c)； e)6-苄氨基嘌呤（6-BA）的配制，先用少量1.0mol·L-1氢氧化钠（NaOH）充分溶解，再加入去 离子水定容，宜配成浓度为0.1mg·mL-1或1.0mg·mL-1的溶液； f)萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）的配制，先用少量95％乙醇充分溶解，再加入去离子水定 容，宜配成浓度为0.1mg·mL-1或1.0mg·mL-1的溶液。 4.2.3配制用水 6-BA、NAA、IBA等植物生长调节剂配制应使用去离子水，培养基配制宜使用蒸馏水、纯净水。 4.2.4容器和标签 配制好的母液应装在玻璃或塑料容器中，并加贴标签，标明母液名称、浓度和配制时间。 4.2.5储藏 大量元素母液应常温保存，铁盐母液、微量元素母液应常温避光保存，有机物和植物生长调节剂母 液应3℃～5℃冷藏。 4.3培养基配制 4.3.1初制DB35/T2256—2025 3搅拌容器中先放入培养基总体积50％的自来水，按照培养基配方，分别量取每种母液，称取卡拉胶 或琼脂粉、蛋白胨、活性炭、白糖加入搅拌容器中，边添加边搅拌直至全部溶解。 4.3.2定容 将培养基定容至培养基总体积，用1.0mol·L-1的盐酸或1.0mol·L-1氢氧化钠调节pH5.6～5.8。 4.3.3分装 边搅拌培养基边分装到培养瓶中并盖紧瓶盖，培养基厚度宜为2cm。培养瓶宜为底径90mm、高140mm、 口径60mm。 4.3.4灭菌 分装后的培养基采用高压蒸汽灭菌锅进行湿热灭菌，蒸汽压力0.11MPa～0.14MPa，温度121℃～ 126℃，灭菌时长20min。 5无菌操作 5.1准备工作 5.1.1物品灭菌 接种用的镊子、手术刀柄、盘子以及小毛巾分别用棉布包裹扎紧，放到高压蒸汽灭菌锅进行灭菌， 灭菌条件同4.3.4，灭菌时长30min。 5.1.2接种前准备 接种环境按NY/T2306—2013中10.1.1～10.1.4处理，接种人员按NY/T2306—2013中的10.1.5操作。 5.1.3母瓶和培养基准备 母瓶和装培养基的培养瓶表面用75％乙醇溶液或0.1％新洁尔灭溶液进行擦拭消毒后，置于超净工 作台边备用。 5.2接种无菌操作要求 每接完一瓶培养材料更换1个垫盘，刀片、剪刀、镊子等接种器械用75％乙醇溶液喷湿，再用无菌 纱布擦净后，插到300℃左右的接种器械灭菌器中灭菌15s以上，拔出放在架子上，待工具冷却后再继 续使用。 6外植体 6.1外植体采集 选择生长健壮、无病虫害的建兰植株作为母株，从假鳞茎处截取2cm～5cm高的新芽作为外植体。 取材时间为3月至5月