ICS 65.120 B 25 备案号 : 23330－2008 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/ 445—2008 科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程 Technical Guideline for Certification of Lespedeza hedy saroides（Pall.）Kitag. cv. Keerqin 2008 -08-20发布 2008 -10-01实施 内蒙古自治区质量技术监督局 发布 DB15 DB15/ 445—2008 I 前 言 本标准的第 2、第4章为强制性的 ，其余为推荐性的 。 本标准由 中国农业科学院草原研究所和中国 农业大学提出 ，中国农业科学院草原研究所 负责解释 。 本标准由 中国农业科学院草原研究所 、中国农业大学 和内蒙古林西县草原工作站 负责起草 。 本标准主要起草人 ：孙启忠、韩建国、王赟文、玉柱、赵淑芬、乔玉梅。 DB15/ 445—2008 1 科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程 1 范围 本标准给出了科尔沁尖叶胡枝子的品种名和来源 ，规定了植物学认定 、幼苗认定 、物候 期认定和 DNA认定方法 。 本标准适用于科尔沁尖叶胡枝子的认定 。 2 品种名 2.1 中文名 科尔沁尖叶胡枝子 2.2 学名 Lespedeza hedysaroides （Pall.）Kitag. cv. Keerqin 3 品种来源 科尔沁尖叶胡枝子 是由中国农业科学 院草原研究所 、中国农业大学和内蒙古林西县草原 工作站等单位 ，采用一次混合选择法 ，从内蒙古林西县野生尖叶胡枝子 (Lespedeza hedysaroides （Pall.）Kitag.)群体中选出优良单株 ，经过多年人工栽培驯化而成 。2006年12 月经全国草品种审定委员会审定登记为栽培品种 （品种登记号 ：325） 。品种原产地内蒙古林 西县，原种由中国农业科学院草原研究所保存 。 4 植物学认定 4.1 株型 多年生草本状半灌木 ，直立，株型呈帚状 ，成熟株高 85cm～100c m。 4.2 根系 直根系，为表层聚积型 ，主要分布在 20cm土层内。 4.3 枝条 1年生枝条基部粗 0.5mm以下。2年及 2年生以上主枝基部粗 1.3mm～3.5mm，分枝为 2～7个；主枝中下部侧枝较多 ，为15～58个，长度 25 cm～48cm，与主枝呈 25°～35°夹角。 4.4 叶片 羽状 3出复叶，个别植株羽状 4～5出复叶，托叶刺芒 状，叶片条状长圆形 ，小而密，开 花前叶色呈黄绿色 ，花后稍暗 。顶生小叶较大 ，椭圆状或长矩圆状披针形 ，长20mm～25mm， 宽6mm～7mm。叶脉伸出呈短刺尖 ，主叶脉凹陷 。 4.5 花序 总状花序腋生 ，长于叶片 ，每花序 3～5小花，小花较小 ，部分小花直接生于叶腋处 。 总花梗和小花梗较短 。花冠蝶形白色 ，旗瓣中央和龙骨瓣顶端为紫色 。萼浅杯状 ，披针形， 顶端渐尖 ，较萼筒长 。 DB15/ 445—2008 2 4.6 果实 荚果包于萼内 ，倒卵形或椭圆形 ，先端有宿存花柱 ，腹缝线略长于背缝线 ，伏生白柔毛 ， 内含种子 1粒。种子椭圆形或卵形 ，黄色、紫色或具紫色 、淡紫色斑纹，千粒重 1.57g～1.84g。 5 幼苗认定 子叶出土后呈长椭圆形 、绿色、肉质，生长缓慢 ；真叶4～5片后生长加快 ，叶片黄绿 色。当年基部不分枝 ，主枝上分生侧枝较多 ，株高 30 cm～40cm。 6 物候期认定 在原产地 5月下旬播种 ，6月初出苗 ，20d左右苗齐 ，6月下旬至 7月上旬进入分枝期 ， 8月上旬现蕾 ，中下旬少量开花 ，8月下旬至 9月上旬有少量植株结实 ，9月中旬少数种子 成熟。翌年，5月初开始萌动 、下旬返青 ，6月中下旬开始现蕾 ，7月下旬至 8月上旬为开 花期，8月下旬至 9月初为结实期 ，9月中下旬种子成熟 。生育期115d~120 d。 7 DNA认定 7.1 实验仪器 PCR扩增仪；电泳仪；紫外分光光度计 ；多通道分子成像系统 。 7.2 取样与保存 在开花期分单株采集嫩叶 ，样品置于液氮中 ，于实验室 -20℃保存。 7.3 DNA 提取 用DNA提取试剂盒提取总 DNA，0.8%琼脂糖凝胶电泳检测 DNA质量。 7.4 ISSR 反应体系及程序 7.4.1 ISSR反应体系 总体积 20µL，含有约 40ng基因组 DNA，0.2 µmol/L引物，10µL 2×Taq PCR MasterMix[0.1 U µ/LTaq Polymerase ，500µM dNTP each ，20mM Tris -HCl(pH8.3) ，100 mM KCl，3 mM MgC1 2)]，用ddH 2O补充体积至 20µL。 6.4.2 PCR扩增程序 94℃充分变性 5min，然后进行 35个循环：94℃变性 30 s，50℃或52℃(根据引物而定 )退 火45s，72℃延伸 1.5 min，最后 72℃延伸 7 min，4℃终止反应 （表1）。 PCR产物在 0.8％琼脂 糖凝胶上电泳分离 ，核酸染料染色显带 ，多通道分子成像系统成像并观察 。