ICS 65.120 B 46 备案号：53561-2017 内 蒙 DB15 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1164—2017 饲草中中性洗涤纤维瘤胃液体外 30 小时降 解率的测定 A method to assess 30-h ruminal in vitro neutral detergent fiber degradability of the forage 2017-02-25 发布 内蒙古自治区质量技术监督局 2017-05-25 实施 发 布 DB15/T 1164—2017 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 试剂 .............................................................................. 1 5 仪器和设备 ........................................................................ 2 6 试样 .............................................................................. 2 7 分析步骤 .......................................................................... 2 8 测定结果的计算 .................................................................... 3 I DB15/T 1164—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本标准由内蒙古自治区农牧业厅归口。 本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本标准主要起草人：孙海洲、金鹿、桑丹、李胜利、张春华、张崇志、凌树礼、任晓萍、珊丹、艳 城、谷英、刘志友、斯登丹巴、王美秀。 II DB15/T 1164—2017 饲草中中性洗涤纤维瘤胃液体外 30 小时降解率的测定 1 范围 本标准规定了饲草中中性洗涤纤维瘤胃液体外30小时降解率的测定方法。 本标准适用于单一饲草、混合饲草和青贮饲料。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3358.1 统计学词汇及符号 第1部分：一般统计术语与用于概率的术语 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维(NDF)的测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 中性洗涤纤维 Neutral Detergent Fiber 用中性洗涤剂去除饲草中的脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等成分后，残留的不溶解物质的总称。 3.2 中性洗涤纤维体外降解率 The Degradability of Neutral Detergent Fiber In Vitro 瘤胃液体外降解的饲草中中性洗涤纤维含量占饲草原样中中性洗涤纤维含量的百分比。 3.3 相对相差 Relative Difference 重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值。 4 试剂 4.1 如无特别说明，所用试剂均为分析纯。 4.2 本标准所用水，一律指 GB/T 6682 中三级水。 4.3 丙酮（100 %）。 1 DB15/T 1164—2017 4.4 缓冲液 A：将 10.00 g K2HPO4、0.50 g MgSO4·7H2O、0.50 g NaCl、0.10 g CaCl2·2H2O 和 0.50 g 尿素加入到 1000 ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容。 4.5 缓冲液 B：将 15.00 g Na2CO3 和 1.00 g Na2S·9H2O 加入到 1000 ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容。 4.6 3 %十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液：称取 18.60 g 乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O） 和 6.80 g 四硼酸钠（Na2P4O7·10H2O）加入到 100 mL 烧杯中，加少量水加热溶解后，再加入 30.00 g 十二烷基硫酸钠(C12H25NaSO4)和 20 mL 乙二醇乙醚。称取 4.65 g 无水磷酸氢二钠（Na2HPO4），置于另一 烧杯中，加少量水，微微加热溶解后倒入第一个烧杯中，稀释至 1000 mL。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 5.10 实验室用样品粉碎机或研钵。 瘤胃液取样器（长 30 cm 内径 12.70 mm PPR 管）。 分析天平（分度值 0.0001 g）。 烘干箱（室温～300 ℃）。 磁力搅拌器（转速为 100 r/min～1400 r/min）。 纤维袋（ANKOM F57，25 μ m 孔隙）。 封口机。 体外模拟培养箱（ANKOM DAISY Ⅱ型，美国）。 纤维分析仪（ANKOM 220P，美国）。 量筒（100 mL 和 1000 mL）。 6 试样 6.1 取样 按 GB/T 14699.1 进行采样。 6.2 制备 样品根据 GB/T 20195 制备，置于烘箱内于 65 ℃烘干，研磨，过 1 mm 筛。 7 分析步骤 7.1 瘤胃液的制备 选择健康、体重接近的 3 头装有永久性瘤胃瘘管的供体羊(牛)，单独饲养。在晨饲前经瘤胃瘘管利 用瘤胃液取样器采集 3 头供试羊（牛）的瘤胃液 1500 mL～2000 mL,转入预热至 39 ℃的保温容器中, 混合均匀后经 4 层纱布过滤,同时通入 CO2 气体，然后量取试验所需体积的瘤胃液备用。 7.2 体外消化步骤 7.2.1 消化 称取0.5000 g样品放置于纤维袋中，平行样封口后平铺放置于体外模拟培养箱中消化罐的分隔板两 侧。取两个容器分别加入266 mL缓冲液B和1330 mL缓冲液A，于39 ℃条件下调节其pH达到6.80。于每个 消化罐中加入1600 mL混合缓冲溶液后放置于体外模拟培养箱中，打开加热和转动开关，使消化罐的温 2 DB15/T 1164—2017 度在20 min～30 min内达到平衡。取出消化罐加入提前预处理好的400 mL瘤胃液，持续通入CO2然后盖 紧盖子，置于体外模拟培养箱中连续培养30 h。 7.2.2 洗涤 培养完毕后取出消化罐倒掉液体，再将纤维袋取出，用流动的自来水冲洗干净。 7.2.3 干燥 将纤维袋置于105 ℃烘箱中烘干6 h，放入干燥器中冷却30 min后，称重。然后再烘干30 min，再 冷却称重，直至两次称重之差小于0.0020 g为恒重。 7.3 中性洗涤纤维含量的测定 原样样品和残渣样品中中性洗涤纤维含量按照GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维(NDF)的测定进行。 8 测定结果的计算 8.1 样品中中性洗涤纤维含量以质量分数(%)表示，按式（1）计算。 Y =（W3-W2）/W1×100 ……………………………（1） 式中： Y ——代表样品中中性洗涤纤维的含量，单位为百分比 (%)； W1 ——样品的重量，单位为克（g）； W2 ——纤维袋的重量，单位为克（g）； W3 ——洗涤后样品和纤维袋的重量，单位为克（g）。 8.2 样品中中性洗涤纤维体外降解率以质量分数（%）表示，按式（2）计算。 Z=（W4-W5）/W4×100 ……………………………（2） 式中： Z ——代表样品在30 h 时间点的中性洗涤纤维瘤胃液体外降解率，单位为百分比 (%)； W4 ——代表原样样品中中性洗涤纤维的重量，单位为克（g）； W5 ——代表经过30 h体外降解后残渣样品中中性洗涤纤维的重量，单位为克（g）。 8.3 取两次测定结果的算数平均值，计算结果保留 2 位小数点。 8.4 根据 GB/T 3358.1，在重复条件下同一样品同时两次平行测定所得结果相对相差≤10 %。 _________________________________ 3