ICS 65.120 B 46 备案号：53562-2017 内 蒙 DB 15 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1165—2017 饲用玉米及青贮玉米淀粉瘤胃液体外 7 小 时降解率的测定 A method to assess in vitro 7-h ruminal starch degradability of the corn grains and corn silage 2017-02-25 发布 内蒙古自治区质量技术监督局 2017-05-25 实施 发 布 DB15/T 1165—2017 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ................................................................................ 1 2 规范性引用文件 ...................................................................... 1 3 术语和定义 .......................................................................... 1 4 试剂 ................................................................................ 1 5 仪器和设备 .......................................................................... 1 6 试样 ................................................................................ 2 7 分析步骤 ............................................................................ 2 8 测定结果的计算 ...................................................................... 3 2 DB15/T 1165—2017 I DB15/T 1165—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本标准由内蒙古自治区农牧业厅归口。 本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本标准主要起草人：孙海洲、金鹿、桑丹、李胜利、张春华、张崇志、凌树礼、任晓萍、珊丹、艳 城、谷英、刘志友、斯登丹巴、王美秀。 II DB15/T 1165—2017 饲用玉米及青贮玉米淀粉瘤胃液体外 7 小时降解率的测定 1 范围 本标准规定了饲用玉米及青贮玉米淀粉瘤胃液体外7小时降解率的测定方法。 本标准适用于饲用玉米籽粒及青贮玉米。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 AOAC 法 996.11 /AACC 法 76.13 饲料中淀粉含量的测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 淀粉体外降解率 The Degradability of Starch in Vitro 瘤胃液体外降解的样品中淀粉含量占原样中淀粉含量的百分比。 3.2 相对相差 Relative Difference 重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值。 4 试剂 4.1 如无特别说明，所用试剂均为分析纯。 4.2 本标准所用水，一律指 GB/T 6682 中三级水。 4.3 缓冲液 A：将 10.00 g K2HPO4、0.50 g MgSO4·7H2O、0.50 g NaCl、0.10 g CaCl2·2H2O 和 0.50 g 尿素加入到 1000ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容。 4.4 缓冲液 B：将 15.00 g Na2CO3 和 1.00 g Na2S·9H2O 加入到 1000ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容。 1 DB15/T 1165—2017 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 5.10 5.11 5.12 实验室用样品粉碎机或研钵。 瘤胃液取样器（长 30 cm 内径 12.70 mm PPR 管）。 分析天平（分度值 0.0001 g）。 烘干箱（室温～300℃）。 磁力搅拌器（转速为 100 r/min～1400 r/min）。 纤维袋（ANKOM F57，25 μm 孔隙）。 封口机。 纤维分析仪（ANKOM 220P，美国）。 体外模拟培养箱（ANKOM DAISY Ⅱ型，美国）。 量筒（100 ml 和 1000 ml）。 离心机（最大相对离心力 4500×g）。 紫外可见分光光度计（波长范围:190 nm ~1100 nm）。 6 试样 6.1 取样 按GB/T 14699.1进行采样。 6.2 制备 样品根据GB/T 20195制备，置于烘箱内于65℃烘干，研磨，过1mm筛。 7 分析步骤 7.1 瘤胃液的制备 选择健康、体重接近的3头装有永久性瘤胃瘘管的供体羊（牛），单独饲养。在晨饲前经瘤胃瘘管 利用瘤胃液取样器采集3头供试羊（牛）的瘤胃液1500 mL~2000 mL,转入预热至39℃的保温容器中,混合 均匀后经4层纱布过滤,同时通入CO2气体，然后量取试验所需量的瘤胃液备用。 7.2 体外消化步骤 7.2.1 消化 称取 0.5000 g 样品放置于纤维袋中，平行样封口后平铺放置于体外模拟培养箱中消化罐的分隔板 两侧。取两个容器分别加入266 mL缓冲液B和1330 mL缓冲液A，39℃条件下调节其pH达到6.80。在每个 消化罐中加入1600 mL 混合缓冲液后放置于体外模拟培养箱中，打开加热和转动开关，使消化罐的温度 在20 min~30 min内达到平衡。取出消化罐加入提前预处理好的400 mL瘤胃液，持续通入CO2然后盖紧盖 子，置于体外模拟培养箱中连续培养7h。 7.2.2 洗涤 培养完毕后取出消化罐倒掉液体，再将纤维袋取出，用流动的自来水冲洗干净。 2 DB15/T 1165—2017 7.2.3 干燥 将纤维袋置于105℃烘干箱中烘6h，放入干燥器中冷却30 min后，称重。然后再烘30 min，再冷却 称重，直至两次称量之差小于0.0020 g 为恒重。 7.3 淀粉含量的测定 原样样品和残渣样品中淀粉含量按照AOAC 法 996.11 /AACC 法 76.13进行。 8 测定结果的计算 8.1 样品中淀粉的降解率以百分比(%)表示，按式（1）计算。 Y= (W1－W2)/W1 × 100 ……………………………………(1) 式中： Y—样品在 7h 时间点的淀粉瘤胃液体外降解率，单位为百分比 (%) ； W1—原样中淀粉的含量，单位为克（g）； W2—7h时间点降解残渣中淀粉含量，单位为克（g）。 8.2 测定的结果用平行测定的算术平均值表示，保留小数后两位。 8.3 同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果相对相差≤10%。 _________________________________ 3