ICS  65.020.01 B 16 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3098—2018 水稻细菌性条斑病抗病性鉴定技术规程 The Identification Technical Specification of Resistance To Rice Bacterial Leaf Streak 文稿版次选择 2018 - 04 - 16 发布 安徽省质量技术监督局 2018 - 05 - 16 实施 发 布 DB34/T 3098—2018 前    言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。 本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全 研究所、芜湖市食品药品检验中心、凤阳县植保站。 本标准主要起草人：李云飞、陈雨、杨雪、姚剑、董菁、华陈意、宗凯、沈言根、高同春、戚仁德、 张爱芳、谷春艳、臧昊昱。 I DB34/T 3098—2018 水稻细菌性条斑病抗病性鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了水稻抗细菌性条斑病田间人工接种的鉴定技术。 本标准适用于水稻品种对水稻细菌性条斑病的抗病性鉴定。 2 水稻细菌性条斑病的基本信息 水稻细菌性条斑病由稻黄单胞菌稻生致病变种(Xanthomonas oryzae pv．oryzicola，Xooc)引起的 一种重要检疫性病害，是我国四大水稻病害之一。 水稻细菌性条斑病菌的基本信息参见附录A。 3 鉴定原理 用双针蘸取菌液，针刺水稻剑叶中间位置，病菌侵入形成病斑，根据病斑的长短，判定品种的抗病 性，分为高抗、中抗、中感和高感 4 个级别。 4 鉴定方法 4.1 鉴定圃 鉴定圃选择在排灌方便，肥力水平中上等，从未发病的田块。 4.2 病原物来源 本省流行的强致病力的菌群C5（参见附录A.9）。 4.3 供试品种的种植 供试品种按当地的季节播种育秧，秧龄期早稻 30 d，中、晚稻 25 d。每个品种插 2 丛，每丛 10 本，株行距 40 cm×50 cm，最多每隔 10 个品种插抗病（IR26 或相应的抗病品种）和感病品种（金刚 30 或相应的感病品种）各 1 个作为对照。 每个品种的鉴定重复 3 次。 4.4 田间管理 鉴定圃施肥水平稍高于一般大田，除细菌性病害无须防治外，其他真菌病害和虫害按正常田块进行 田间管理。 4.5 接种用菌液准备 接种用的菌株选用本省流行的强致病菌群 C5，在胁本哲氏培养基（参见附录B）上，28℃培养 48～ 72 h。 1 DB34/T 3098—2018 8 采用麦法伦比浊法（参见附录C），用无菌水配成 3×10 cfu/mL 菌液。菌液现配现用。 4.6 接种方法 在水稻孕穗期，用双针蘸取菌液，针刺水稻剑叶中间位置，每品种至少接 25 张叶片。 4.7 调查、记载 于早、中稻接种后 20 d，晚稻接种后 25 d 进行病情调查，随机调查 20 张叶片，量取整个病斑 的长度（以双针中最长的病斑为准）并记录（参见附录D），数据统计采用四舍五入法保留到小数点后 一位。 4.8 抗性评价方法 首先按公式（1）计算平均病斑长度，再按表1 的标准对参鉴品种的抗性进行评价。 La = ∑Li M ............................................ (1) 式中： La —— 平均病斑长度； Li —— 单个叶片病斑长度，其中i =1,2,...,M； M —— 调查总叶片数。 表1 病级 4.9 抗性评价标准 平均病斑长度 （mm） 1 ≤5.0 高抗 3 5.1－10.0 中抗 5 10.1－20.0 中感 7 ＞20.0 高感 抗性鉴定有效性的判定 对照感病品种发生为害程度必须达到 7 级，鉴定结果才能认为有效。 5 鉴定报告出具 鉴定报告格式参见附录E。 2 抗性评价标准 DB34/T 3098—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 水稻细菌性条斑病菌基本信息 A.1 中文名 水稻细菌性条斑病菌（稻黄单胞菌稻生致病变种）。 A.2 学名 Xanthomonas oryzae pv．oryzicola（Fang et al.）Swings et al. A.3 病害英文名 rice bacterial leaf streak。 A.4 分布 ——亚洲：孟加拉、柬埔寨、中国、印度、印尼、老挝、马来西亚、缅甸、尼泊尔、巴基斯坦、菲 律宾、泰国、越南； ——非洲：马达加斯加、尼日利亚、塞内加尔； ——大洋州：澳大利亚。 A.5 寄主范围 水稻（Oryza sativa）、虮子草（Leptochloa panicea）、雀稗（Paspalum scrobiculatum）、沼 生菰（Zizania palustris）、结缕草（Zoysia japonica）、稻属（Oryza）、假稻属（Leersia）。 A.6 为害症状 病斑在叶尖、叶缘发生，也可在中肋两侧发生，叶鞘发生较少。病斑初呈暗绿色水渍状半透明的小 点，沿叶脉扩大成为宽 1/4～1/3，长 1～4 mm 的水渍状条斑。以后还可继续扩大，颜色由黄褐色转位 橙褐色，但两端仍呈暗绿色，对光观察，条斑呈半透明状。病斑上常泌出许多露珠状蜜黄色菌脓。 严重时，许多条斑融合成为不规则的橙褐色的大斑块，远望呈火烧状。 A.7 分类地位及生理生化特性 水稻细菌性条斑病是由黄单胞菌条斑致病变种（Xanthomonas oryzae pv.oryzicola）病原菌引起。 该 病 原 菌 属 原 核 生 物 界 （ Procaryotae ） 、 变 形 菌 门 （ Proteobacteria ） 、 丙 型 变 形 菌 纲 （Gammaproteobacteria）、黄单胞菌目（Xanthomonadales）、黄单胞菌科（Xanthomonadaceae）、黄 单胞菌属（Xanthomonas）。 3 DB34/T 3098—2018 病原菌菌体单生，短杆状，大小为（1.0 μm～2.0 μm）×（0.3 μm～0.5 μm）；少数成对但不成链 状，不形成芽孢荚膜，极生鞭毛 1 根。革兰氏染色阴性，在 NA 培养基上菌落呈蜜黄色，圆形，边缘 整齐，光滑发亮，有黏性，好气。生理生化特性与白叶枯菌相似，不同之处该菌能施明胶液化，使牛乳 胨化，使阿拉伯糖产酸，对青霉素、葡萄糖反应不敏感，它可产生 3-羧基丁酮，以 L-丙氨酸为唯一碳 源，在 0.2％无维生素酪蛋白水解物上生长，以及对 0.001％ Cu(NO3)2 有抗性，这些特点可与白叶枯 病相区别。该菌与水稻白叶枯病菌的致病性和表现性状虽有很大不同，但其遗传性及生理生化性状又有 很大的相似性。 A.8 传播途径和发病条件 带菌种子、带病稻草是主要初侵染源。病菌在种子内越冬，播后由叶片气孔、伤口侵入，形成中心 病株，病株上分泌带菌的黄色小球，借风雨、露水、灌水、昆虫、人为等因素传播。 病菌借灌溉水、风雨传播距离较远，低洼积水、雨涝以及灌漫灌可引起连片发病。通过种子调运作 远距离传播。 A.9 病菌致病力的分化 病菌不同菌株间有明显的致病力分化，郭亚辉等用 IRBB5、IRBB14、IR24、IRBB4、IRBB21 和金刚 30 将我国的细菌性条斑病菌分为 6 个致病型参见表A.1。 表A.1 小种 中国的水稻条斑病菌小种在 6 个鉴别品种上的病情反应 水稻鉴别品种 IRBB5 IRBB14 IR24 IRBB4 IRBB21 金刚30 C1 R R R R R S C2 R R R R S S C3 R R R S S S C4 R R S R S S C5 R R S S S S C6 R S S S S S 注：R 表示病斑长度≤10 mm；S 表示病斑长度＞10 mm 4 DB34/T 3098—2018 BB 附 录 B （资料性附录） 胁本哲氏培养基制作 B.1 培养基成分 Na2HPO4·12H2O 0.25 g，Ca(NO3)2·4H2O 0.5 g，FeSO4·7 H2O 50 mg，牛肉膏 3 g，蛋白胨 5 g，蔗糖 20 g，琼脂 15 g，水 1000 mL。 B.2 培养基的配置 将上述成分放入水中加热至完全溶化，用稀盐酸或氢氧化钠调整 pH 至 7.2～7.5。121℃高压蒸汽 灭菌 30 min，倒成平板或斜面培养基备用。 5 DB34/T 3098—2018 CC 附 录 C （资料性附录） 细菌数量的测定：麦法伦（McFarland）比浊法 取 10 个试管，标上 1～10 的标号，在第 1 个试管中加入 0.1 mL 的 1％的氯化钡溶液，以下每 管递增 0.1 mL，到第 10 管为 1 mL，然后用 1％的硫酸溶液每管都定容到 10 mL。氯化钡和硫酸反应 生成硫酸钡沉淀，形成混浊。用橡皮塞将试管封闭，这样就形成了一套混浊度不同的标准。将待测的菌 液放入同样的试管中与上述标准管比较（目测或用分光光度计），即可大致知道菌液含量，小心地用无 菌水调整菌液的混浊度，使之达到所要求的细菌数，然后用于接种。 混浊度与细菌数量的大致关系见表C.1。 表C.1 试管 1％氯化钡 1％硫酸 混浊度与细菌数量关系对照表 cfu/mL 8 试管 1％氯化钡 1％硫酸 cfu/mL （mL） （mL） （×108） （mL） （mL） （×10 ） 1 0.1 9.9 3 6 0.6 9.4 18 2 0.2 9.8 6 7 0.7 9.3 21 3 0.3 9.7 9 8 0.8 9.2 24 4 0.4 9.6 12 9 0.9 9.1 27 5 0.5 9.5 15 10 1.0 9.0 30 6 DB34/T 3098—2018 DD 附 录 D （资料性附录） 水稻品种细菌性条斑病抗性鉴定调查记载表 鉴定方法：□人工接种 □自然诱发 鉴定地点： 品种 病斑长度 编号 （mm） 平均病斑 长度 （mm） 抗性 评价 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅰ Ⅱ Ⅲ 鉴定人 年 月 日 复核人 年 月 日 7 D