ICS 65.020.20 B 05 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3169—2019 柞蚕蛹虫草生产技术规程 Technical specification for production of cordyceps Militaris in Tussah silkworm 2019 - 08 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2019 - 09 - 30 实施 发 布 DB21/T 3169—2019 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009标准化工作导则起草。 本标准由辽宁省农业农村厅提出并归口。 本标准起草单位：辽宁省海洋水产科学研究院。 本标准主要起草人：李亚洁，孟楠，温志新，都兴范，李学军，米锐，孙永欣，马淑慧，李树英。 本标准发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 辽宁省农业农村厅通讯地址：沈阳市和平区太原北街2号，024—23447862。 辽宁省海洋水产科学研究院通讯地址：大连市沙河口区黑石礁街50号，0411-84671027。 I DB21/T 3169—2019 柞蚕蛹虫草生产技术规程 1 范围 本标准规定了柞蚕蛹虫草生产的术语和定义，产地环境，生产设施，技术要求，采收，包装及储存。 本标准适用于柞蚕蛹虫草生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 23509 食品包装容器及材料 分类 GB/T 33320 食品包装材料和容器用胶粘剂 GB/T 8321 农药合理使用准则 GB/T 12728 食用菌术语 NY/T 391 绿色食品 产地环境技术条件 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 NY/T 1846 食用菌菌种检验规程 NY/T 5099 无公害食品 食用菌栽培基质安全技术要求 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 柞蚕蛹 Chinese Oak Silkworm Pupae 柞蚕幼虫吐丝结茧后形成的与成虫之间的过渡形态，初化的蛹表皮柔软、体色也浅，之后表皮逐渐 硬化体色也变得越来越深，最终成为黄褐色或黑褐色。 3.2 僵蛹 Muscardine pupa 蛹虫草菌（Cordyceps militaris）感染活体柞蚕蛹后硬化的蚕蛹。 3.3 出草 germination 子实体从柞蚕蛹体内长出来的过程。 3.4 柞蚕蛹虫草 Cordyceps militaris 由僵蛹体内长出金黄色或橘红色的棒状子实体与僵蛹形成的复合体。 1 DB21/T 3169—2019 4 产地环境 应选择生态条件良好，远离污染源的生产区域，符合 NY/T 391 的要求。 5 生产设施 5.1 生产车间 应设原料准备室、洗刷室、灭菌室、菌种制备室、接种室、发菌室、培养室、烘干室、包装室、储 存室。培养室有专用的通风口，通风口处需安装过滤风装置，四周及过道安装 40W 的日光灯。 5.2 生产设备 天平、高压灭菌锅、超净工作台或接种箱、恒温振荡器及培养箱、显微镜、空调等。 5.3 培养架 层架要求金属结构,架子高矮、大小、长宽根据生产场地条件决定,通常一个架子设六层, 层距 0.4m，每层摆放 4 个塑料盘子,货架间距人行道 0.8m～1.0m。 5.4 培养盘 应符合 GB/T 23509 和 GB/T 33320 的要求，通常采用耐高温硬质塑料盘，规格为 （30cm～60cm） ×（30cm～35cm）×（6cm～10cm）。 6 技术要求 6.1 菌种的选择 应符合 NY/T 1742 的要求，引进有菌种生产资质的单位的母种或自行分离获得的母种，经培育繁殖 和提纯复壮获得优良菌株用于生产。 6.2 柞蚕蛹的选择 秋季柞蚕蛹作为培养基应符合 NY/T 5099 的规定。柞蚕茧健蛹率> 90％，将柞蚕茧环割，选择无破 损、健康的柞蚕蛹备用。 6.3 水 生产用水应符合GB 5749 生活饮用水卫生标准。 6.4 生产菌种的制备 6.4.1 培养基推荐配方 1 马铃薯 200.0g，蔗糖 20.0g，磷酸二氢钾 3.0g，硫酸镁 1.5g，维生素 B1 0.02g，水 1000ml， pH 值 6.0～7.0。 2 葡萄糖 25.0g，蛋白胨 10.0g，酵母膏 1.0g，磷酸二氢钾 3.0g，硫酸镁 1.5g，维生素 B1 0.02g， 水 1000ml，pH 值 6.0～7.0。 6.4.2 培养基配制 2 DB21/T 3169—2019 3 配方 1 土豆去皮 200 g，切成 1cm 小块，放入锅中加水文火煮沸 30 min 后 4 层纱布过滤。在滤 液中加入蔗糖 20 g，磷酸二氢钾 3.0g，硫酸镁 1.5g，VB1 0.02g 加水至 1000mL，pH 值 6.0～7.0，用 三角瓶分装(固体培养基加琼脂 18g)，在 121℃下灭菌 40min，备用。配方 2 称取各组成成分依次溶 于 1000mL 水中，按配方 1 方法分装灭菌。 6.4.3 菌种的制备 母种在 10℃～15℃、相对湿度 60% 的环境下可存放一个月， 4℃ 条件下可保存一年左右。用接 种铲从母种斜面中切取 1cm² 菌面(可稍带培养基)放入液体菌种培养瓶中，迅速用聚丙烯塑料薄膜和乳 胶圈封扎瓶口，接种后在 18℃～22℃ 温度条件下，培养 5 d～7d，培养 4d 取样对菌种进行分析检测, 按照 NY/T 1846 进行，均符合要求的为合格菌种。将液体菌种用无菌水按 1:5 比例稀释成接种用菌液。 6.5 接种 6.5.1 接种前准备 接种室、培养室和相关容器必须提前彻底消毒，使用药剂符合 GB/T 8321 要求，选用高效、低毒、 低残留药剂，严格按照说明使用，也可以使用紫外灯、臭氧进行室内消毒。将柞蚕蛹用清水冲洗干净， 再经 70％ 浓度的酒精浸泡 2min 进行消毒，置于无菌托盘中淋干后立即接种。 6.5.2 接种方法 用微量注射器每个柞蚕蛹接种 200μL～400μL 菌液，在蚕蛹翅下或腹部节间膜处，与蛹体平行进 针(向头部方向)，均匀放入培养盘中。 6.6 菌丝培养管理 接种后的柞蚕蛹送入培养室黑暗培养，温度控制在 17℃～20℃，室内湿度 60%～65%，通风换 气保持空气新鲜，5d 后每天 2 次观察清理病坏的柞蚕蛹，7d 后相对湿度调整到 65%～70%，随机检 查蛹体，确认菌丝布满整个蛹体，12d～15d 后全部硬化成僵蛹。 6.7 出草管理 6.7.1 保湿 用无菌水冲洗僵蛹数遍，放置在备好的无菌培养盘中，用聚乙烯薄膜将培养盘封口，薄膜留有透气 孔。每天在培养架通道内用加湿器喷雾 1 次，培养室相对湿度控制在 70%。 6.7.2 子实体原基培养 接种 20d 左右当蛹体表面长出白色菌丝，进行见光培养，白天以自然散射光为主，傍晚用日光灯 补助照明 3h～4h，白天温度控制在 18℃～22℃，夜间降到 15℃～17℃，相对湿度保持在 75％，每天 上午通风 1 次，时间为 30min，再经过 3d～5d 的培养，长出黄色的小突起即形成了子实体原基。 6.8 子实体培养管理 25d 后进入子实体培养阶段，温度应为 16℃～20℃，湿度 75%～80%，打开光照设备，光照强度 在 500lx～800lx, 光照时间每天 14h～18h ，逐渐加大室内空气的流通和交换，每天通风换气2次，每 次 30 min。 7 采收 3 DB21/T 3169—2019 7.1 采收标准 当子实体长到 5cm～8cm 时，子实体头部膨大饱满，及时采收。 7.2 采收与干燥方法 采收时用镊子连蛹带草一起从盘中提出, 经过整理, 放入不锈钢盘中,采取50℃～60℃烘干或冷冻 干燥等方法处理。 8 包装与储存 8.1 包装 将干燥后的柞蚕蛹虫草摆放在塑料盒中为宜，以免挤压，用薄膜袋密封后，称重包好。 8.2 储存 包装好的柞蚕蛹虫草应置于冷柜或冷库低温储存，温度适于 0℃～4℃。 9 生产记录 应对每批生产建立独立、完整的生产记录档案，保留生产过程中各个环节的有效记录，以证实所有 的农事操作遵循本指导性技术文件规定。记录应当保留两年以上。具体参见附录 A。 4 DB21/T 3169—2019 附 录 A (资料性附录) 生产记录表格 表A 生产情况记录表 单位名称： 负责人： 电话： 菌种来源： 种植区域地点： 种植规模（盘）： 接种时间： 出草时间： 采收时间： 2 采收标准： 产量（kg/m ）： 具体农事操作记录 日期 负责人： 生产活动内容 投入品内容 使用量 使用设备 制表人： ___________ 操作人 技术负责人 制表日期： __ 5