ICS  71.100.70 Y 42 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3109—2018 湿巾中 4 种异噻唑啉酮防腐剂的测定 高效液相色谱法 Determination of 4 isothiazolinones in wet wipes by High Performance Liquid Chromatography 文稿版次选择 2018 - 04 - 16 发布 安徽省质量技术监督局 2018 - 05 - 16 实施 发 布 DB34/T 3109—2018 前    言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省产品质量监督检验研究院提出。 本标准起草单位：安徽省产品质量监督检验研究院、安徽拓维检测服务有限公司。 本标准主要起草人：姚帮本、郭佳佳、丁燕、包磊、汪华、丁媛丽、韩枫、潘剑婷、祝红蕾、庞敏、 倪峥、李建华。 I DB34/T 3109—2018 湿巾中 4 种异噻唑啉酮防腐剂的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了湿巾中 4 种异噻唑啉酮防腐剂的测定方法。 本标准适用于湿巾中 4 种异噻唑啉酮防腐剂 MIT、CMIT、BIT、OIT(详见附录A)含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样经甲醇超声提取、离心、过滤后，使用 C18 为填料的不锈钢柱和紫外检测器，对试样中的 4 种 防腐剂进行高效液相色谱分离。根据保留时间定性，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，用水为 GB/T 6682 中一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 磷酸二氢钠：优级纯。 4.3 磷酸。 4.4 标准品见附录 A。 4.4.1 防腐剂 MIT：2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮标准品：纯度≥98％； 4.4.2 防腐剂 CMIT：5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮标准品：纯度≥98％； 4.4.3 防腐剂 BIT：1,2-苯并异噻唑啉-3-酮标准品：纯度≥99％； 4.4.4 防腐剂 OIT：2-辛基-4-异噻唑啉-3-酮标准品：纯度≥98％。 4.5 标准混合储备溶液：分别称取含四种防腐剂标准品 0.1 g(精确至 0.0001 g)，用甲醇溶解后，定 容至 100 mL，配制成 1000 μg/mL 的标准储备液，溶液于 4 ℃的冰箱中避光保存，有效期 3 个月。 4.6 标准工作混合溶液：用微量注射器分别吸取 10 μL，20 μL，50 μL，100 μL，200 μL 的标准混合 储备溶液(4.5)置于 5 个 10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释、定容，充分摇匀，获得浓度分别为 1 μg/mL、2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL 的标准工作混合溶液。此溶液应现用现配。 5 5.1 5.2 仪器 高效液相色谱仪：配紫外检测器。 色谱工作站。 1 DB34/T 3109—2018 色谱柱：150 mm×4.6 mm(ID)不锈钢柱，内装 C18 填充物，粒径 5 μm，或柱效相当的色谱柱。 超声波清洗仪。 离心机：转速 5000 r/min。 漩涡混合仪。 有机系滤膜：孔径 0.45 μm。 微量进样器：100 μL。 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 6 分析步骤 6.1 试样溶液的制备 将湿巾试样剪成约 5 mm×5 mm大小的碎片，混合均匀后，称取试样 1 g（精确至 0.01 g）置于 50 mL 聚丙烯离心管中，准确加入 25.0 mL 甲醇，涡旋振荡 2 min，45℃下超声萃取 15 min 后，于离心 机上以 5000 r/min 离心 5 min。取 5.0 mL 上清液 45℃ 氮吹至近干，将残渣用 1.00 mL 甲醇溶解， 经 0.45 μm 滤膜过滤，滤液作为待测试液；可视试样中防腐剂含量作相应稀释后，进行分析。 同时做空白试验。 6.2 高效液相色谱操作条件 6.2.1 流动相：A 相，甲醇；B 相，0.05 mol/L 磷酸二氢钠缓冲液，并用磷酸调 pH 至 3.0。梯度洗脱： 见表 1。 表1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 流动相A 流动相B /min /％ /％ 0 40 60 1.90 90 10 6.00 90 10 7.50 70 30 9.00 40 60 6.2.2 检测波长：275 nm。 6.2.3 柱温：35 ℃。 6.2.4 进样量：10 μL。 6.2.5 流速：0.8 mL/min。 上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点对给定的操作参数作适当调整，以期获得最佳效果； 典型的 4 种防腐剂混合标样高效液相色谱图见附录B。 6.3 标准工作曲线的制备 取标准混合工作溶液(4.6)，从低浓度至高浓度分别注入高效液相色谱仪，以各组分浓度为横坐标， 相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 6.4 2 测定 DB34/T 3109—2018 将所得测试液(6.1)在上述色谱条件下进行测定，记录色谱图，根据保留时间定性，峰面积定量。 试液中待测组分的响应值应在标准曲线线性范围内。 6.5 结果计算 试样中各组分含量按式(1)计算： X  式中： X —— Ci —— C0 —— m —— V —— K —— (C i  C 0 ) × V × K ............................... (1) m 试样中各组分含量，mg/kg； 试样中防腐剂峰面积对应的浓度，μg/mL； 空白试样中防腐剂的浓度，μg/mL； 试样质量，g； 试样定容体积，mL； 稀释倍数。 注：计算结果保留三位有效数字。 7 其他 7.1 检出限 湿巾中四种防腐剂的检出限均为 2 mg/kg。 7.2 准确度 本方法在 5～100 mg/kg 添加浓度范围内，用空白添加标准校正，四种防腐剂的回收率范围为 80％～105％，相对标准偏差小于 3％。 7.3 重复性 平行测定两次，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10％。 3 DB34/T 3109—2018 AA 附 录 A （规范性附录） 四种防腐剂种类 表A.1 四种防腐剂种类 序号 防腐剂中文名称 防腐剂英文名称 英文简称 CAS 登记号 1 2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮 2-Methyl-4-isothiazolin-3-one MIT 2682-20-4 2 5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮 5-Chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-one CMIT 26172-55-4 3 1,2-苯并异噻唑啉-3-酮 1,2-Benzisothiazolin-3-one BIT 2634-33-5 4 2-辛基-4-异噻唑啉-3-酮 2-Octyl-4-isothiazolin-3-one OIT 26530-20-1 4 DB34/T 3109—2018 BB 附 录 B （资料性附录） 四种防腐剂混合标样液相色谱图 四种防腐剂混合标样液相色谱图见图B.1。 图B.1 四种防腐剂混合标样的高效液相色谱图 _________________________________ 5