65.020.20 ICS B 16 DB 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB 15/T 1647—2019 向日葵品种抗列当室内鉴定技术规程 Technical Regulation For Indoor Identification Of Sunflower Resistance To Sunflower Column 2019-05-20 发布 内蒙古自治区市场监督管理局 2019-08-20 实施 发 布 DB15/T 1647—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古农业大学提出。 本标准由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。 本标准起草单位：内蒙古农业大学。 本标准主要起草人：张键、赵君、张之为、石胜华、柳慧卿。 I DB15/T 1647—2019 向日葵品种抗列当室内鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了室内条件下向日葵列当抗性鉴定的方法和抗性评价的标准。 本标准适用于室内条件下向日葵抗列当水平的鉴定。 2 列当生理小种选择 选择能代表内蒙古不同向日葵种植区域列当的优势生理小种类型。 3 对照品种选择 选择生产上常年高感列当（生理小种E、F、G）的向日葵品种LD5009。 4 列当种子清选和消毒 将田间采集的向日葵列当种子过筛网（直径为0.18 mm）去除杂质后置于1.5mL离心管中。加入1 mL 蒸馏水进行震荡清洗。12000 r/min离心10 min，弃上清液，加入1 mL 0.1%的次氯酸钠溶液充分震荡， 12000 r/min，离心10 min，弃上清液后向沉淀物中加入1 mL 75%的乙醇，12000 r/min离心10 min，弃 上清液，加入无菌水冲洗 3 次，将表面消毒后的列当种子平铺于滤纸上进行干燥。用毛笔收集干燥的 种子置于1.5 mL离心管中备用。 5 向日葵根系分泌物收集 收集LD5009的根系分泌物。将鹅卵石用清水冲洗3次（确保其上面没有杂质和泥沙）后放入铝饭盒 中，与250 mL的广口瓶一起高温灭菌。然后，在灭菌的广口瓶中放入 2/3 体积的灭菌的鹅卵石。把已 经催芽的向日葵幼苗接种在广口瓶中，用脱脂棉固定好根系后加入灭菌水将向日葵根系全部淹没。培养 三周后，通过过滤灭菌搜集向日葵根系的分泌物，分装在50 mL离心管中放入4 ℃冷藏柜中保存。 6 列当种子预处理 将经过消毒处理的2 mg向日葵列当种子均匀的平铺在直径9 cm的培养皿中的滤纸上。并用准备好的 向日葵根系分泌物完全湿润滤纸。用封口膜封好培养皿，23 ℃～28 ℃黑暗的条件下放置7 d～10 d， 用于接种。 1 DB15/T 1647—2019 7 鉴定材料准备 选饱满的种子放于9 cm的培养皿中，用75 %的乙醇和0.1 %的次氯酸钠进行表面消毒处理。将消毒 处理后的向日葵种子浸泡在无菌水中2 h，取出浸泡后的种子防御培养皿，并用湿纱布上进行保湿。保 湿期间每天向毛巾上喷水一次。待向日葵种子出芽后（5 d左右）即可用于列当种子的接种处理。 8 接种列当 把脱脂棉均匀的平铺在13 cm×13 cm的塑料方皿中，在上面覆盖一层滤纸，用蒸馏水将方皿中的脱 脂棉和滤纸浸湿后待用。将预先培养的向日葵幼苗放入方皿中（2 株/皿），每个品种7 皿，3 次重复。 用少量湿润的脱脂棉将幼苗的根系盖上，并在脱脂棉上面覆盖上一层湿润的滤纸。将方皿直立竖放在光 照培养箱中（25 ℃，光照 16h/黑暗 8h，相对湿度为50%）。13 d～15 d后，将上面预处理好的4 mg 向日葵列当种子随同滤纸一并移入有向日葵幼苗的方皿中，用封口膜将方皿封好后放置在光照培养箱中。 每两天加蒸馏水一次。 9 寄生瘤节统计 接种4周后用肉眼观察列当寄生瘤节的形成，并按照附录的的调查表记录方皿中的瘤节数。 10 抗性鉴定级别的划分 接种4周后根据向日葵列当瘤节数按照下表评定品种的抗性级别。 表1 向日葵品种抗性级别的划分标准 2 级别 抗性类型 英文缩写 瘤节数 1 免疫 I X=0 2 高抗 HR 0＜X≤ 10.0 3 中抗 R 10.0 ＜X≤ 25.0 4 中感 T 25.0 ＜X≤ 50.0 5 高感 S X＞50.0 DB15/T 1647—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 向日葵列当瘤节数调查表 表A.1 向日葵列当瘤节数调查表 接种 天后开始调查 向日葵品种 寄生瘤节数 _________________________________ 3