ICS  65.120 B 46 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3191—2018 饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定 高效液相色谱法 Determination of Tiamulin Fumarate in feed High performance liquid chromatography method 文稿版次选择 2018 - 08 - 08 发布 安徽省质量技术监督局 2018 - 09 - 08 实施 发 布 DB34/T 3191—2018 前    言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、宁国市金鼎家庭农场、宁国市金东坊农业开展有限公司、 合肥市动物卫生监督所、阜阳市动物卫生监督所、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽省水产技术 推广总站。 本标准起草人：吴昊、刘发全、李东风、宋亚伟、吴兵、方芳、郭恒心、徐月清、龙中原、胡群芳、 张利亚、郑新勇、钱昌银、程扬、郑举、潘孝成、孙德祥、何为俊、王群、汪百才、石翠芳。 I DB34/T 3191—2018 饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中延胡索酸泰妙菌素含量测定。 本标准定量限为 1.0 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 原理 试样中的延胡索酸泰妙菌素经甲醇溶液超声提取，过滤后经色谱柱分离，用高效液相紫外检测器检 测，外标法定量。 4 试剂和材料 除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，用水符合 GB/T 6682 中一级用水的规定。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 碳酸铵。 4.4 高氯酸。 4.5 高氯酸水溶液：取高氯酸 8.5 mL，加水至 100 mL。 4.6 碳酸铵缓冲液溶液：取碳酸铵 10 g，加水 800 mL 使溶解，加高氯酸水溶液（4.6）24 mL，加水 至 1000 mL。 4.7 流动相：碳酸铵缓冲液溶液+甲醇+乙腈，按体积比 49∶28∶23（V/V/V）。 4.8 延胡索酸泰妙菌素标准品：纯度≥98.0％。 4.9 延胡索酸泰妙菌素标准溶液的制备 4.9.1 延胡索酸泰妙菌素标准溶液贮备液：精确称取 20 mg 延胡索酸泰妙菌素标准品(精确至 0.01 mg) 于 200 mL 容量瓶中，用流动相（4.8）超声溶解，冷却，此溶液浓度为 100 μg/mL。置于 4℃冰箱中保 存，有效期 60 天。 4.9.2 延胡索酸泰妙菌素标准工作溶液：分别吸取贮备液（4.10.1）1 mL、2 mL、5 mL、10 mL、20 mL 于 100 mL 容量瓶中，用流动相溶液（4.8）定容，标准工作溶液系列浓度分别为 1 μg/mL、2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL。 1 DB34/T 3191—2018 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 6 高效液相色谱仪（配紫外检测器）。 分析天平：感量 0.1 mg、0.01 mg。 离心机：≥3000 r/min。 超声波仪。 分析筛：孔径 0.42 mm。 粉碎机。 微孔滤膜：孔径 0.45 μm 尼龙滤膜。 试样的制备 按 GB/T 14699.1 的规定采样，选取饲料样品 500ｇ 以上，四分法缩减至 100ｇ，磨碎，全部通 过分析筛(5.5)，充分混匀，装入磨口瓶中备用。 7 分析步骤 7.1 提取 7.1.1 称取试样适量（配合饲料 5.0 g、浓缩饲料 3.0 g、预混合饲料 1.0 g），精确至 0.001g，置于 50 mL 容量瓶中，用甲醇溶液（4.2）准确定容，置于超声波仪（5.4）超声提取 30 min。 7.1.2 将试样提取液（7.1.1）转移至离心管，3000 r/min，离心 10 min，取离心上清液用 0.45 μm 尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定。 7.2 测定 7.2.1 高效液相色谱条件 ——色谱柱：C18 型柱，长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 μm，或相当性能 C18 柱； ——检测波长：212 nm； ——流动相：碳酸铵缓冲液溶液+甲醇+乙腈，按体积比 49∶28∶23（V/V/V）； ——流速：1.0 mL/min； ——柱温：25℃； ——进样体积：20 μL。 7.2.2 上机测定 延胡索酸泰妙菌素标准工作溶液和试液（上机液）分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以 峰面积进行计算。参见附录A。 7.3 结果的计算与表述 7.3.1 计算公式 结果按公式(1)计算： 2 DB34/T 3191—2018 ............................... (1) 式中： X —— C —— m —— V —— f —— 7.3.2 试样中延胡索酸泰妙菌素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 试液色谱峰对应的延胡索酸泰妙菌素浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； 试样质量，单位为克（g）； 定容体积，单位为毫升（mL）； 稀释倍数。 结果表示 平行测定结果用算术平均值表示，计算结果保留 3 位有效数字。 8 精密度 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于 10％。 3 DB34/T 3191—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 延胡索酸泰妙菌素标准图谱 图A.1 延胡索酸泰妙菌素标准溶液色谱图 _________________________________ 4