ICS 65.020 B 01 山 DB37 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3498—2019 谷类作物籽粒植酸含量测定方法 Determination of phytic acid in cereal grains 2019 - 01 - 29 发布 山东省市场监督管理局 2019 - 03 - 01 实施 发 布 DB37/T 3498—2019 目  次 前言..................................................................................................................................................................... II 1 范围................................................................................................................................................................... 1 2 规范性引用文件............................................................................................................................................... 1 3 原理................................................................................................................................................................... 1 4 试剂和材料....................................................................................................................................................... 1 5 仪器设备........................................................................................................................................................... 1 6 试样制备........................................................................................................................................................... 2 7 分析步骤........................................................................................................................................................... 2 7.1 试样提取................................................................................................................................................... 2 7.2 标准曲线制作........................................................................................................................................... 2 7.3 试样测定................................................................................................................................................... 2 8 分析结果的表述............................................................................................................................................... 2 9 精密度............................................................................................................................................................... 3 I DB37/T 3498—2019 前  言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省农业科学院玉米研究所、山东省农业科学院作物研究所、山东省农业科学 院农业质量标准与检测技术研究所。 本标准主要起草人：薛艳芳、李宗新、张慧、高英波、钱欣、刘开昌、齐世军、张丙春、夏海勇、 王竹。 II DB37/T 3498—2019 谷类作物籽粒植酸含量测定方法 1 范围 本标准规定了谷类作物籽粒包括全籽粒粉、胚、胚乳、种皮等组织中植酸含量的测定方法。 本标准适用于谷类作物籽粒中植酸含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 硫酸铁铵与双吡啶-巯基乙酸溶液反应生成一种粉红色的物质，在波长519 nm 处吸光度最强。当植 酸存在时，铁与磷酸酯结合，故而不能与双吡啶-巯基乙酸溶液反应，致使粉红色消退，吸光度的下降 与植酸的浓度成反比，进而通过测定显色反应的吸光度值，计算试样植酸含量。 4 试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯或以上的试剂，水为GB/T 6682规定的三级水。 4.1 盐酸（HCl）。 4.2 硫酸铁铵[FeNH4(SO4)2·12H2O]。 4.3 双吡啶（C10H8N2，优级纯）。 4.4 巯基乙酸（C2H4O2S，优级纯）。 4.5 植酸钾标准品（C6H16K2O24P6，CAS 号：129832-03-7），纯度 99 %。 4.6 盐酸溶液（0.2 mol/L）：量取 17.2 mL 盐酸，用水定容至 1 000 mL。 4.7 盐酸溶液（2 mol/L）：量取 17.2 mL 盐酸，用水定容至 100 mL。 4.8 硫酸铁铵溶液（0.02 %）：称取 0.20 g 硫酸铁铵溶于 100 mL 2 mol/L 盐酸溶液（4.7）溶解， 用水定容至 1 000 mL。 4.9 双吡啶-巯基乙酸溶液（1 %）：称取 10.00 g 双吡啶，加 10 mL 巯基乙酸湿润、溶解，用水定容 至 1 000 mL，摇匀。4 ℃贮存，有效期 2 个月。 4.10 植酸钾标准溶液（1.30 mg/mL）：准确称取 0.13 g（确定至 0.0001 g）植酸钾（4.5），溶解后 定容至 100 mL。 5 仪器设备 5.1 可见分光光度计：带 519 nm。 1 DB37/T 3498—2019 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g。 离心机：200 r/min。 振荡器。 水浴锅。 粉碎机。 6 试样制备 取经充分混匀的代表性样品不少于500 g，通风处自然风干或50 ℃烘干后，用粉碎机粉碎，过40 目筛，混匀后储于塑料瓶或玻璃瓶保存备用。 7 分析步骤 7.1 试样提取 称取经50 ℃烘箱内烘5 h～8 h的全籽粒粉0.05 g～0.1 g、胚或种皮0.02 g～0.03 g或纯胚乳粉0.2 g～0.3 g，均精确至0.0001 g，于50 mL塑料瓶中，分别加入0.2 mol/L盐酸溶液10 mL（4.6），加盖旋 紧后的塑料瓶室温振荡提取2 h，转速200 r/min，或不振荡4 ℃静置过夜。 7.2 标准曲线制作 依次准确移取标准溶液（4.10）0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL、0.9 mL和1.0 mL于10支15 mL试管中，依次分别加入0.2 mol/L盐酸溶液（4.6）至10 mL，配制成含 有植酸磷3.3 ug/mL、6.6 ug/mL、9.9 ug/mL、13.2 ug/mL、16.5 ug/mL、19.8 ug/mL、23.1 ug/mL、 26.4 ug/mL、29.7 ug/mL和33.0 ug/mL的标准系列溶液。混匀后，分别移取0.5 mL上清液，加1 mL 0.02 % 硫酸铁铵溶液（4.8），置于试管架上入沸水浴保温30 min，取出后以流动水冷却至室温，分别加2 mL 1 % 双吡啶-巯基乙酸溶液（4.9），混匀后，立即倒入1 cm比色皿中，于519 nm波长下测定吸光度，用水作 为参比溶液，以吸光度为纵坐标，植酸磷含量为横坐标，制作标准曲线。 7.3 试样测定 标准系列溶液测定完成后，分别移取0.5 mL试样提取上清液（7.1），按照上述操作步骤（7.2）加 入反应溶液，于519 nm波长下测定吸光度，并通过标准曲线计算出试液中植酸磷含量。 8 分析结果的表述 试样中植酸含量按公式（1）计算： X c  3.5  10  1000 .............................................................(1) 0.5  m  0.282  1000 1000 式中： ——试样中植酸含量，单位为毫克每克