65.020.20 ICS B 16 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1646-2019 向日葵抗菌核病（茎基腐） 室内鉴定技术规程 Technical Regulation For Indoor Identification Of Sunflower Resistance To White Rot (Crown Rot) 2019-05-20 发布 内蒙古自治区市场监督管理局 2019 -08-20 发 布 实施 DB15/T 1646—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古农业大学提出。 本标准由内蒙自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。 本标准起草单位：内蒙古农业大学。 本标准主要起草人：张之为、赵君、张键、贾瑞芳、王玉杰。 I DB15/T 1646—2019 向日葵抗菌核病（茎基腐）室内鉴定技术规程 1 范围 本规程规定了室内条件下向日葵抗（耐）菌核病的鉴定技术规程。 本标准适用于向日葵品种（系）对菌核病抗性水平的鉴定。 2 接种菌株选择 采 用 从 内 蒙 古 向 日 葵 主 栽 区 地 块 中 发 病 株 上 分 离 纯 化 并 鉴 定 的 核 盘 菌 菌 株 （ Sclerotinia sclerotiorum），致病力处于中等水平。 3 培养基配制 马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g、琼脂粉 13 g、用蒸馏水定容至1000 mL。 Minimal-medium （MM）培养基: NaOH 1 g、DL-malic acid 3 g、NH4NO3 2 g、MgSO4•7H2O 0.1 g、 Bacto-agar 39 g、用蒸馏水定容至1000mL。 4 病原菌培养 将保存在甘油中的核盘菌菌丝体接种在PDA平板上，置于22 ℃培养箱中活化培养。待菌落形成后， 在菌落边缘打取直径为4 mm菌丝块接于新的PDA培养基中央进行培养。2 d～3 d后，打取菌落边缘的菌 丝块接种到MM培养基进行培养。待菌落长到培养皿直径的 80 % 时，用打孔器在菌落边缘打取菌丝块（直 径4 mm），用于接种。 5 对照品种选择 分别以高抗菌核病的品种法国1号和高感品种新葵杂5号作为接种的对照。 6 鉴定材料准备 将向日葵种子播种在装有无菌土的营养钵（13 cm×13 cm）中，每个品种播种5钵，每钵播种5粒， 置于25 ℃,16 h光照/8 h黑暗条件下，待幼苗生长到6～8片真叶时，用于离体叶片和茎秆接种的鉴定。 7 抗性鉴定 7.1 同时采用离体叶片和茎秆接种法进行品种抗性鉴定，取一致性结果作为抗性水平的最终鉴定结果。 1 DB15/T 1646—2019 7.2 离体叶片接种法 取3～4片向日葵叶片，用水冲洗干净，滤纸吸干叶片的多余水分。将叶片背面朝上均匀的放在铺有 滤纸的磁盘内，将菌块的菌丝面朝下接种在叶片主脉的右侧，在叶脉的左侧接种未接菌的MM培养基块作 为接种对照。每个品种接种5个叶片，每个叶片接种1个菌丝块，3次重复。用保鲜膜封住磁盘，于22 ℃ 光照培养箱中观测病斑形成。当感病品种病斑直径达到2.0 cm，抗病品种病斑直径达到0.5 cm后，用十 字交叉法测定叶片病斑直径，计算平均值。按照表1的分级标准确定供试向日葵品种对菌核病的抗性水 平。 表1 向日葵离体叶片对菌核病抗性水平的鉴定标准 抗性型 病斑大小范围 X (cm) 免疫 X=0.00 抗病 0.0<X≤0.5 耐病 0.5<X≤2.0 感病 X >2.0 7.3 茎杆接种法 从向日葵幼苗根茎交界处向上截取6 cm向日葵的茎秆。每个品种截取10个茎段，其中7个用于接种 核盘菌菌丝块，3个用于接种未接菌的MM培养基作为对照。用湿棉花包裹茎秆两端的截面进行保湿，接 种后的茎段置于22 ℃光照培养箱中。当感病品种病斑长度达到1.1 cm，抗病品种病斑长度达到0.4 cm 后，开始统计病斑大小，计算平均值，按照表2的分级标准确定供试向日葵品种对菌核病的抗性水平。 表2 向日葵茎秆对菌核病抗性水平的鉴定标准 抗性型 病斑大小范围 X (cm) 免疫 X=0.00 抗病 0.0<X≤0.5 耐病 0.5<X≤1.0 感病 X >1.0 2 DB15/T 1646—2019 AA 附 录 A （规范性附录） 向日葵菌核病调查表 表A.1 向日葵菌核病调查表（叶片） 接种 天后开始调查 向日葵品种 病斑直径/cm 表 A.2 向日葵菌核病调查表（茎秆） 接种 天后开始调查 向日葵品种 病斑长度/cm 3