65.080 ICS G 20 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3756—2019 肥料中 10 种植物生长调节剂的高通量快速 筛选 液相色谱-质谱联用法 High-throughout screening of ten growth regulators in fertilizers by liquid chromatography-tandem mass spectometry 2019 - 12 - 05 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 01 - 05 实施 发 布 DB37/T 3756—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 原理 ............................................................................... 1 4 试剂和材料 ......................................................................... 1 5 仪器 ............................................................................... 2 6 分析步骤 ........................................................................... 2 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 样品制备 ....................................................................... 提取 ........................................................................... 测定 ........................................................................... 空白试验 ....................................................................... 结果表述 ....................................................................... 允许差 ......................................................................... 2 2 2 3 4 4 附 录 A （资料性附录） 10 种植物生长调节剂信息一览表 ................................ 5 附 录 B （资料性附录） 标准物质的质谱分析参考参数 .................................. 7 附 录 C （资料性附录） 标准物质的总离子流质谱图和提取离子质谱图 .................... 8 I DB37/T 3756—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省市场监督管理局提出并组织实施。 本标准由山东化工标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、山东省农科院农业质量标准与检测技术研究所、金 正大生态工程集团股份有限公司、中国人民解放军疾病预防控制中心、山东省科学院生物研究所。 本标准主要起草人：朱海荣、张娟、陈子雷、张灿、郭凯、刘爽、于晓菲、刘金凤、赵丽芳、张开 亮、郑树林、苏本玉、孟强、尹畅。 II DB37/T 3756—2019 肥料中 10 种植物生长调节剂的高通量快速筛选 用法 液相色谱-质谱联 警告：本标准有可能涉及到有害物质、危险操作和设备的安全。本标准并未指出所有可能的安全 问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的要求。 1 范围 本标准规定了肥料中10种植物生长调节剂的高通量筛选液相色谱-质谱联用法。 本标准适用于水溶肥料、复混肥料、掺混肥料、配方肥料中10种植物生长调节剂[复硝酚钠（2-硝 基苯酚钠、4-硝基苯酚钠、5硝基邻甲氧基苯酚钠）、萘乙酸、脱落酸、赤霉酸、氯吡脲、烯效唑、多 效唑、2,4-D]的检测。 方法中称样量为1.0 g时，复硝酚钠、萘乙酸、脱落酸、赤霉酸、2,4-D的检出限为0.1 mg/kg。氯 吡脲、烯效唑、多效唑的检出限为0.05 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 3 原理 试样中待测物用甲醇进行超声提取，在选定的工作条件下，用液相色谱-串联质谱仪进行测定，外 标法定量。 4 试剂和材料 本标准中试验用水应符合GB/T 6682中一级用水的规格。 4.1 高纯氮。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 甲醇：色谱纯。 4.4 甲酸：色谱纯。 4.5 甲酸-水溶液（1+1 0000）：移取 0.10 mL 甲酸（4.4）与 1 000 mL 水混匀。 4.6 2-硝基苯酚钠标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.7 4-硝基苯酚钠标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.8 5-硝基邻甲氧基苯酚钠标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.9 萘乙酸标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.10 脱落酸标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 1 DB37/T 3756—2019 4.11 赤霉酸标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.12 氯吡脲标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.13 烯效唑标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.14 多效唑标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.15 2,4-D 标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。10 种植物生长调节剂信息一览表见附录 A 中表 A.1。 4.16 标准储备溶液：称取 0.01g（精确到 0.000 1 g）10 种植物生长调节剂标准品（4.6-4.15）于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容，得到浓度为 1 000 mg/L 的标准储备液，现用现配。 4.17 标准中间液：取上述标准贮备液（4.16），用甲醇（4.3）稀释成浓度为 10 mg/L 的标准中间液。 4.18 标准工作液：用甲醇稀释 10 种植物生长调节剂的标准中间液（4.17），配成 6 个不同浓度的混 合标准溶液，其中的各植物生长调节剂质量浓度分别为 1 μg/L、10 μg/L、25 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L。 5 仪器 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源和数据处理机。 漩涡混合器。 高速离心机：最高转速不低于 6 000 r/min。 分析天平：精度 0.1 mg。 金属试验筛：0.5 mm。 超声波清洗器。 有机相微孔滤膜：0.22 μm。 6 分析步骤 6.1 样品制备 固体样品：将样品粉碎，全部过0.5 mm试验筛，待用。 液体样品混匀后直接称取。 6.2 提取 称取0.1 g～1.0 g试样（精确至0.000 1 g）置于10 mL离心管中，加入8 mL甲醇（4.3），涡旋振 荡1 min，超声提取30 min，以6 000 r/min高速离心10 min，冷却至室温，定容至10 mL，取1 mL上清 液过0.22 μm有机相滤膜，待测。 6.3 测定 6.3.1 液相色谱及质谱操作条件 6.3.1.1 液相色谱操作条件： a) 色谱柱：50 mm×2.1 mm(i.d.)不锈钢柱，内装 C18、1.7 μm 填充物（或具有同等效果的色谱 柱）； b) 柱箱温度：40 ℃； c) 流动相：流动相及梯度洗脱条件见表 1； d) 流速：0.3 mL/min； e) 进样量：10 μL。 2 DB37/T 3756—2019 表1 液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 流动相[甲醇（4.3）]/% 流动相[甲酸溶液(4.5)]/% 0 10 90 3.0 10 90 5.0 60 40 8.0 75 25 9.0 10 90 12.0 10 90 6.3.1.2 质谱操作条件： + a) 电离方式：电喷雾电离，氯吡脲、烯效唑、多效唑采用正离子模式（ESI ），复硝酚钠、萘乙 酸、脱落酸、赤霉酸、2,4-D 采用负离子模式（ESI ）； b) 检测方式：多反应监测模式（MRM）； c) 离子源温度：550 ℃； d) 雾化气：氮气，流速 8 mL/min； e) 气帘气：氮气，流速 25 mL/min； f) 碰撞气：氮气；流速 50 mL/min； g) 毛细管电压：22 V； 其它质谱条件见附录B中表B.1。 上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点对给定的操作参数做适当调整，以期获得最佳效果。 标准物质的总离子流质谱图和提取离子质谱图见附录C。 6.3.2 标准曲线的绘制 分别移取一系列混合标准工作溶液（4.18），按照浓度由低到高的顺序依据仪器条件（6.3.1）进 行测定，以色谱峰峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。 6.3.3 试样测定 6.3.3.1 定性 按6.3.1的仪器条件对标准工作溶液和样品溶液进行测定，如果样品溶液中色谱峰的保留时间与标 准物质色谱峰的保留时间一致；而且样品溶液中监测离子的相对丰度比与相当浓度的标准溶液的监测离 子对的相对丰度比的偏差不超过表2的规定范围，则可判定样品中存在相应的目标成分。 表2 定性测定时相对离子丰度最大允许偏差 相对离子丰度/% ＞50 ＞20～50 ＞10～20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30