ICS 65.020.20 B 05 DB1301 石 家 庄 市 农 业 地 方 标 准 DB 1301/T 328—2019 甘薯茎尖组织培养及脱毒试管苗 快繁技术规程 文稿版次选择 2019 - 11 - 18 发布 石家庄市市场监督管理局 2020 - 01 - 18 实施 发 布 DB1301/T 328—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由石家庄市农业农村局提出并归口。 本标准起草单位：石家庄卓农农业科技中心、石家庄市农业技术推广中心、河北嘉丰种业有限公司。 本标准主要起草人：谷增辉、孙志军、张辉、高倩、宋小颖、许刚、刘鑫翠、王颖、赵海龙、黄剑 冲、刘娜、马亚、赵蒙蒙。 I DB1301/T 328—2019 甘薯茎尖组织培养及脱毒试管苗 快繁技术规程 1 范围 本标准规定了甘薯脱毒试管苗、茎尖组织培养、甘薯脱毒试管苗组培室快繁、甘薯脱毒试管苗保护 地快繁的内容和技术要求。 本标准适用于石家庄地区甘薯茎尖组织培养及脱毒试管苗的快繁。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 28142—2011 吡虫啉可湿性粉剂 HG/T 3290—2016 多菌灵可湿性粉剂 HG/T 5120—2016 啶虫脒微乳剂 NY/T 402—2016 脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程 NY/T 1200—2006 甘薯脱毒种薯 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 脱毒试管苗 由茎尖分生组织培养获得的未受甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）、甘薯潜隐病毒（SPLV）、甘薯G病毒 （SPVG）、甘薯褪绿斑病毒（SPCFV）、甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）和甘薯双生病毒（Sweepoviruses） 侵染的试管苗。 [改写NY/T 402—2016，定义2.1] 4 甘薯茎尖脱毒技术 4.1 薯块热处理 田间选取具有该品种典型特征植株结构的薯块,用恒温水浴锅将水加热到57 ℃，把薯块置于温水中 浸泡3 min，然后将温度降至（51±1）℃温水中浸泡30 min,在浸泡过程中不断翻动薯块，使其受热均 匀。 4.2 外植体的获取 1 DB1301/T 328—2019 薯块热处理后，再用50% 多菌灵可湿性粉剂（符合HG/T 3290—2016相关要求）800倍药液浸泡消毒 15 min，在25 ℃～30 ℃ 无菌条件下盆栽催芽。当薯苗长至6片～8片叶时，切下顶部约2 cm～3 cm长 的芽段。 4.3 外植体消毒 消毒前芽段先用自来水冲洗10 min，在无菌条件下，用75%酒精消毒30 s，再将芽段置入0.1%氯化 汞溶液灭菌5 min～10 min，无菌水冲洗3～5遍，用灭过菌的滤纸吸干水分，备用。 4.4 茎尖的剥离和培养 4.4.1 操作前准备 在芽段消毒前，所有器具用75%酒精均匀擦拭消毒，打开超净操作台鼓风机开启紫外灯20 min，工 作人员用肥皂仔细清洗手臂，更换已消毒的工作服、工作鞋、工作帽，用75% 酒精严格擦拭双手或戴无 菌手套，关闭紫外灯20 min后进行操作。 4.4.2 茎尖的剥离 在超净工作台上，将芽段在40倍解剖镜下，用解剖针剥取长度0.2 mm～0.3 mm、带1～2个叶原基的 生长点。 4.4.3 茎尖苗的培养 4.4.3.1 茎尖分生组织培养基 MS（基础培养基）每升添加6-苄基腺嘌呤（6-BA）0.10 mg、萘乙酸（NAA）0.05 mg、赤霉素（GA3） 0.2 mg、蔗糖30 g、琼脂6.5 g。 4.4.3.2 接种 将剥离的生长点接种于茎尖分生组织培养基中。 4.4.3.3 培养条件 在温度25 ℃～28 ℃条件下暗培养7 d，然后在温度25 ℃～28 ℃、光强2 000 lx光照16 h/d条件 下进行茎尖苗培养，30 d～40 d后，茎尖成苗。 4.5 茎尖苗病毒检测 按照NY/T 402—2016采用硝酸纤维素膜酶联免疫吸附测定（NCM-ELISA）检测法和指示植物检测法 进行病毒检测,获取脱毒试管苗。 5 脱毒试管苗快繁技术 5.1 组培室快繁 5.1.1 生根培养基 1/2MS（基础培养基） 每升添加萘乙酸（NAA）0.20 mg、蔗糖30 g、琼脂6.5 g。 5.1.2 接种 2 DB1301/T 328—2019 将脱毒苗一叶一节切段接种于生根培养基中。 5.1.3 培养条件 同4.4.3.3光培养阶段，25 d后进入下一轮扩繁，循环数代至定植。 5.2 保护地栽培快繁技术 5.2.1 保护地选择 3月15日前选择带60目的防虫网温室繁殖，3月15日后选择带60目的防虫网塑料大棚繁殖。 5.2.2 整地施肥 每亩施尿素15 kg、磷酸二铵20 kg～25 kg、硫酸钾18 kg～20 kg，深翻、整细、耙平。 5.2.3 基质选择 用消毒处理的营养土与珍珠岩（2:1）混匀10 cm厚作为基质。 5.2.4 定植前准备 当保护地缓冲室温度能保持在15 ℃～32 ℃(以25 ℃～28 ℃为最适温度)时，将试管苗放入其中， 2 d～3 d后打开瓶口，5 d～7 d试管苗长出瓶口后，洗去试管苗根部培养基。 5.2.5 试管苗定植 保护地5 cm地温稳定至15 ℃ 以上（以25 ℃为最适温度）时，按株行距8 cm×15 cm 、深度2 cm～ 3 cm进行定植。 5.2.6 管理 温湿度控制:移栽后苗床浇透水，当气温上升至30 ℃以上时，需覆盖遮阳网以保持棚内温度25 ℃～ 35 ℃，湿度保持在70%～80%。 5.2.7 虫害防治 5.2.7.1 物理防治 按每平方米挂1个粘蚜板。 5.2.7.2 化学防治 3%啶虫脒微乳剂（符合HG/T 5120—2016相关要求）1 500倍液或10% 吡虫啉可湿性粉剂（符合GB/T 28142—2011相关要求）2 000倍药液每亩用量15 kg～20 kg喷雾。 _________________________________ 3 DB1301/T 328—2019 石家庄市农业地方标准 甘薯茎尖组织培养及脱毒试管苗快繁技术规程 DB1301/T　３２８—2019 河北省标准化研究院编辑、校对 石家庄市工农路 368 号（0311-67501107） 网站：WWW.BZSB.INFO 2019 年１１月第一版