ICS 65.020.30 B 43 DB1301 石 家 庄 市 农 业 地 方 标 准 DB 1301/T 306—2019 种公鸡精液技术规范 2019 - 09 - 16 发布 石家庄市市场监督管理局 2019 - 11 - 16 实施 发 布 DB1301/T 306—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由石家庄市农业农村局提出。 本标准起草单位：河北良人牧业有限公司、石家庄市畜牧技术推广站、石家庄市畜牧兽医学会。 本标准主要起草人：褚素乔、谢艳华、云慧卿、桂蕴、倪惠勇、薛素琴、李海霞、孟莉、谢雨辰、 郭伟婷、侯秀贤、李明江、刘文科、李剑、郭景凯。 I DB1301/T 306—2019 种公鸡精液技术规范 1 范围 本标准规定了种公鸡精液质量品质标准、检测项目和方法等内容。 本标准适用于种公鸡精液质量的评定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 原精液 采集后未经稀释的精液。 2.2 精子密度 单位体积精液中的精子数。 2.3 精子活力 在37℃环境下，呈直线前进运动的精子数占总精子数的百分率。 2.4 精子畸形率 畸形精子占总精子数的百分率。 2.5 有效精子数 每只公鸡1次采集的原精液中呈直线前进运动的精子总数。 3 检测项目及检测方法 3.1 检测项目 外观、精液量、精子活力、精子密度、精子畸形率。 3.2 原精液品质标准 种公鸡原精液品质标准见表1。 表1 原精液品质标准 项目 外观 精液量（ml） 精子活力（%） ） 指标 呈乳白色，不透明的乳状液体，无血液、粪尿等杂质 ≥0.25 ≥60 1 DB1301/T 306—2019 表 1(续) 原精液品质标准 项目 指标 精子密度(（亿个/ml） ≥60 有效精子数（亿个） ≥10 精子畸形率（%） ≤10 3.3 检测方法 3.3.1 精液检查前准备工作 3.3.1.1 室内温度控制在 22℃～25℃，避免太阳光直射或紫外线灯照射。 3.3.1.2 显微镜载物台恒温板应预热至 37℃。 3.3.2 外观 采用目测法检测。 3.3.3 精液量 用2.0ml的吸量管吸取集精管中精液，准确读数，检测精液量。 3.3.4 精子密度 3.3.4.1 概述 采用血细胞计数板法测定。 3.3.4.2 主要器材 血球计数板、血盖片、微量移液器（10µl～100µl）、10ml试管、计数器、显微镜、3.0%氯化钠溶 液。 3.3.4.3 原精液稀释处理 用移液器准确吸取25ul原精液，使用3.0%的氯化钠溶液与其混匀，调整稀释精液量到10ml，轻轻转 动，混匀，使之成为400倍稀释精液。 3.3.4.4 检测方法 将准备好的血球计数板用血盖片将计数室盖好，用移液器吸取稀释好的精液，滴一滴于血盖片边缘， 使精液自行流入计数室，均匀充满，不允许有气泡或厚度过大，然后在显微镜下找到计数室观察计数。 计数时，在方框内选取四个角和中央五个计数室进行精子计数。压在计数室边线上的精子，计数时计头 不计尾、计左不计右、计上不计下。 3.3.4.5 计算 五个计数室的精子依次用计数器记录，得出总数，再用以下公式计算精子密度，见公式（1）。 3 精子密度（亿个/ml）=5个方格中精子总数×5（即25个中方格的总精子数）×10（1mm 内的精子数） ×1000（每ml精液的精子数）×400（精液稀释倍数） 4 即：精子密度（亿个/ml）=5个方格中精子总数×5×10 ×精液稀释倍数 ............. (1) 2 DB1301/T 306—2019 3.3.5 精子活力 3.3.5.1 主要器材 显微镜、恒温水浴锅、10ml试管、载玻片、盖玻片、恒温载物台、滴管。 3.3.5.2 原精液稀释处理 将采集的新鲜原精液吸取25ul加入10ml试管中，沿试管壁缓慢加入等温的0.9%氯化钠溶液，调整稀 释精液量到10ml，然后轻轻转动，混匀，使之成为400倍稀释精液。 3.3.5.3 检测方法 取稀释好的中层精液15ul～25ul，在有37℃恒温载物台的（200倍～400倍）显微镜下检查。每份精 液检测两次，每个样片观察三个视野，记录视野中呈直线前进运动的精子数。 3.3.5.4 计算 计算视野中呈直线前进运动的精子数占总精子数的百分率，求平均值。若两个样片计数结果误差超 过5%，则应重检。 3.3.6 原精液中的有效精子数 有效精子数为精液量、精子密度、精子活力三者的乘积，按公式（2）计算。 n = a  b  c ....................................... (2) 式中： n——有效精子数，单位为亿个； a——精液量，单位为ml； b——精子密度，单位为亿个/ml； c——精子活力，单位为%。 3.3.7 精子畸形率 3.3.7.1 概述 采用姬姆萨染色法检测。 3.3.7.2 主要器材 显微镜、载玻片、血球分类计数器、微量移液器、蒸馏水、姬姆萨染料、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、 甲醛、甲醇、甘油，所用试剂为分析纯。 3.3.7.3 制片 取一滴3.3.5.2原精液稀释处理得到的稀释精液于载玻片一端，用另一边缘光滑的载玻片与有样品 的载玻片呈35。夹角，将样品均匀地涂布于载玻片上，自然风干（约5min），每个样品制作两个抹片。 在已风干的抹片上滴1.0～2.0ml中性福尔马林固定液，固定15min后用水冲去固定液，吹干或自然风干。 3.3.7.4 染色 将固定好后的抹片反扣在带有平槽的有机玻璃面上，把姬母萨染液滴于槽和抹片之间，让其充满平 槽并使抹片接触染液，染色1.5h后用水冲去染液，晾干待检。 3 DB1301/T 306—2019 3.3.7.5 镜检 将制备好的抹片在显微镜（400倍～600倍）下观察，畸形精子包括尾部盘绕、断尾、无尾、盘绕头、 钩状头、小头、破裂头、钝头、膨胀头、气球头、丝状中段等。观察两个抹片，每个抹片观察左、中、 右三个视野中不少于200个精子，记录其中属于畸形精子的数量。 3.3.7.6 计算 计算畸形精子数占总精子数的百分率，取两片的平均值。两片的变异系数不得大于20%，若超过应 重新制片。 3.4 品质检测登记 填写种公鸡精液品质检测登记表，登记表见附录A。 3.5 检测档案管理 检测结果建立档案，保存期2年。 3.6 检测规则 3.6.1 种公鸡在使用前必须进行逐只检测，以后每月抽检一次。每次抽检量不少于 30 只公鸡。 3.6.2 发现异常时（如受精率突然降低时），立即进行精液检查。 3.6.3 对于检出的不合格公鸡要分开或者标记饲养，每周至少采精 2～3 次，但不使用其精液。连续 3 次检测不合格则淘汰。 3.6.4 在种鸡场生产中，可采用精子密度测定仪快速检测精子密度、活力、畸形率。须按照本标准中 3.3.4、3.3.5、3.3.7 规定的检测方法定期校正。 4 DB1301/T 306—2019 AA 附 录 A （规范性附录） 种公鸡精液品质检测登记表 表A.1 种公鸡精液品质检测登记表 采精 时间 种公 品种 日龄 采精员 鸡编 号 外 观 精液 精子密度 精子 有效精 量 （亿个 活力 子数 （ml） /ml） （%） （亿个） 精子 畸形 检验 率 员 备注 （%） 5 DB1301/T 306—2019 参 考 文 献 [1] [2] [3] [4] GB 4143-2008 牛冷冻精液 GB/T 25172-2010 猪常温精液生产与保存技术规范 DB 13/T 683-2005 蛋种鸡人工授精技术规范 刘龙，海鹏，孙黍珍，宁中华.影响蛋种鸡人工授精效率的因素.中国家禽.2010年第16期 _________________________________ 6 ＤＢ１３０１／Ｔ　３０６—２０１９ 石家庄市农业地方标准 种公鸡精液技术规范 ＤＢ１３０１／Ｔ　３０６—２０１９ ２０１９年１０月第一版　　２０１９年１０月第一次印刷 版权专有　侵权必究