的 ICS.65.020 DB5206 B 43 铜 仁 市 地 方 标 准 DB 5206/T 101—2018 代替DB 522200/T 116—2011 铜仁市山羊人工授精技术操作规程 Tongren City of Goat artificial insemination technology operating rules 2018-12-06 发布 铜仁市质量技术监督局 发布 2018-12-06 实施 DB 5206/T 101—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的 规则起草。 本标准代替DB 522200/T 116—2011 《铜仁地区山羊人工授精技术操作规程》。本标准 与DB 522200/T 116—2011相比，除编辑性修改外主要差异如下： ——增加了山羊人工授精的意义见3.1； ——修改了假阴道的介绍及安装见5.3； ——修改了山羊采精的技术操作见6.1； ——增加了山羊采精的步骤及注意事项见6.1； ——修改了山羊的采精量见7.1.1； ——增加了山羊精子活力定义见7.2.2； ——修改了山羊精液的密度的定义见7.2.3； ——增加了输精前的工作准备见10.1； ——增加了1次输精有效精子的数量见10.7.3； ——增加了山羊输精后应注意的问题见10.7.4； ——修改了标准中未统一的度量单位。 本标准由铜仁市农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：铜仁市畜牧技术推广站，沿河县、德江县、石阡县、松桃县、印江县、 思南县、碧江区畜牧技术推广站。 本标准主要起草人：冉隆权、毛同辉、李华磊、樊蓉、郑晓刚、任明晋、石建华、黄仁 芳、侯芳、杨礼、覃霖、邓万红、刘亚群、陈丽蓉、刘和、杨桂芬、张前卫、张长军、崔宇 林、姚建军、龙真权。 本标准的历次版本发布情况为： ——DB 522200/T 116-2011 I DB 5206/T 101—2018 铜仁市山羊人工授精技术操作规程 1 范围 本标准规定了山羊人工授精技术的必备条件、采精前的准备、采精、精液品质检查、精液 稀释与保存、母羊发情鉴定、输精、妊娠诊断等。 本标准适用于铜仁市规模养羊场（户）、山羊人工授精站（点）开展山羊人工授精技术操作。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适 用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5458 液氮生物容器 GB 20557 山羊冷冻精液 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 人工授精 是指利用人工的方法采取公羊的精液，经检查和处理后，注入发情母羊的生殖道内，使 其受孕的一种繁殖技术。 3.2 假阴道 模拟母山羊阴道的、用于采精的工具，羊用假阴道具有与母羊阴道相似的结构。 3.3 精子活力 指在 37℃～38℃条件下精液中呈直线前进运动的精子数占总精子数的百分率。 4 必备条件 4.1 从事山羊人工授精操作人员必须身体健康，具有一定文化程度，经县级以上业务主管部 门培训，能基本了解山羊繁殖的基本知识，熟练掌握山羊人工授精技术操作。 2 2 2 2 4.2 种公羊圈舍 2～3 间，每间 5m ～8m ，用水泥砂浆硬化的运动及采精场 20m ～30m 。 4.3 种公羊品种标准与调教 4.3.1 根据品种标准，选择体质结实，结构匀称，生产性能高，生殖器官正常，有明显雄性 1 DB 5206/T 101—2018 特征，精液品质优良特级或一级公羊 2～3 只。 4.3.2 种公羊调教 4.3.2.1 发情母羊引诱法：将公羊放入发情母羊群中，几天后，当公羊爬跨母羊时，让其本 交几次，然后隔开。 4.3.2.2 嗅觉刺激法：将发情母羊的尿液、分泌物或成年公羊的精液涂抹在公羊的鼻子上， 刺激性欲。 4.3.2.3 观摩法：公羊配种或采精时，让其在一旁观摩，直至调教会为止。 4.4 采精室的要求：采精地面平坦，坚实而不光滑，室内不得存放其他杂物，环境相对安静， 2 2 室温保持在 18℃～25℃，面积 12m ～20m 。 4.5 器械、药品、用具 器械、药品、用具见附录 A。 5 采精准备 5.1 台羊的准备 选择健康发情征状明显的母羊作台羊，台羊后躯用 0.1%高锰酸钾液清洗消毒擦净。 5.2 采精和输精器械的清洗与消毒 5.2.1 采精和输精器械器械的清洗 将采精、输精及与精液接触的所有器械用 2％的碳酸氢 钠刷洗，然后用清水冲洗，再用蒸馏水冲洗数次。 5.2.2 其他器械的消毒 假阴道外筒清洗后不用消毒，内胎使用前用 75％的酒精消毒。集 精杯、输精器、试管、玻璃棒等玻璃器皿及铁制输精器、镊子等蒸煮消毒 30min，或置高压 锅内消毒 15min，用前再用生理盐水冲洗数次。凡士林、毛巾、纱布等蒸气灭菌 20min 待用。 5.3 假阴道的制作及安装 假阴道安装假阴道分内外两层，外层是硬塑料圆筒，亦称外壳，长 20cm，直径 4cm，壳 厚约 0.5cm，筒上有一孔，孔上装有橡皮塞，塞上有气嘴。内层为薄橡胶皮筒，亦称内胎， 长 30cm，扁平直径 4cm。安装假阴道之前，首先检查所用的内胎有无损坏和砂眼，确认完整 无损后先放入开水中浸泡 3～5min。新内胎或长期未用的内胎，必须洗净消毒后方可使用； 工作人员要剪短并磨平指甲，以免划破内胎，再用酒精棉球消毒双手。安装时，先将内胎装 入外壳，内胎光滑面朝里，粗糙面朝外壳，露出外壳的两头要求等长，然后将内胎的一端翻 套在外壳上，同样的方法套好另一端，注意不要使内胎发生扭转，也不要拉得太直太紧，做 到松紧适度，内胎平展。两端再分别套上橡皮圈固定。用酒精棉球由内向外彻底消毒内胎， 待酒精挥发后再用生理盐水擦拭。在假阴道一端安装消毒过的集精瓶。安装好假阴道后，左 手握住假阴道的中部，右手用烧杯将温水（水温 50～55℃）从外壳的灌水孔注入，水量约 为外壳与内胎间容积的 1/2～1/3（竖立假阴道，水位达灌水孔即可），再装上带活塞的气 嘴，并将活塞关好。随后，用消毒过的玻璃棒取少许凡士林，由内向外在内胎表面均匀涂抹 一薄层，涂抹深度以假阴道长度的 1/2 为宜。最后，从气嘴吹气，用消毒过的温度计插入假 2 DB 5206/T 101—2018 阴道内检查温度，以采精时 40～42℃为宜。温度适宜后吹气加压，使假阴道口呈三角形， 松紧适度，能以装入公羊的阴茎为宜。 5.4 其它准备 5.4.1 操作人员剪短指甲并磨光，肥皂洗手，冲洗干净后擦干，戴上乳胶手套，涂上滑石粉 ，穿上工作服。 5.4.2 采精公羊的准备 用 0.1%高锰酸钾溶液清洗外生殖器及周围并擦干净，若阴茎包皮 孔有长毛先剪短。 6 采精 6.1 采精时间 一般为早上进食前或进食后 1h 采精，盛夏中午不采，冬季清晨不采。 6.2 采精人员右手握住假阴道后端，固定好集精杯(瓶)，并将气嘴活塞朝下，蹲在台羊右后 侧，让假阴道靠近母羊的臀部，在公羊跨上母羊背侧的同时，将假阴道与地面保持 35～40° 角迅速将公羊的阴茎引入假阴道内，当公羊后躯急速用力向前一冲时，即已射精，此时，顺 公羊动作向后移下假阴道，并迅速将假阴道竖起，集精杯一端向下，然后打开活塞上的气嘴， 放出空气，取下集精杯，用盖盖好送精液处理室待检。 6.3 种公羊利用 8～12 月龄调教配种，成年公羊一般每周采精 3～4 次，日采精 1～2 次，必 要时每 d 采 3～6 次，二次采精间隔 2h。采精应在喂完料、运动 1h 后进行。连续采精 5～6d 应休息 1d。公羊的利用年限为 4～5 年。 采精步骤及注意事项：牵引公羊到采精现场后，人为控制其几 min 后再让其爬跨台羊， 这样不仅可以增强公羊的性反射，也可提高射精量和精液品质。采精步骤如下：①采精人员 右手紧握假阴道，用食指、中指夹好集精瓶，使假阴道气嘴活塞朝下，蹲在台羊的右后侧。 ②待公羊爬跨台羊且阴茎伸出时，采精人员用左手轻拨公羊包皮（勿触龟头），将阴茎导入 假阴道（假阴道应与地面呈 35°）。③若假阴道内的温度、压力和润滑感适宜，公羊很快 就会射精。当公羊后躯急速向前一冲，表明已经射精。此时，顺公羊动作向后及时取下假阴 道，并迅速将假阴道竖立，安装有集精瓶的一端向下。④打开活塞上的气嘴，放出空气，取 下集精瓶，用盖盖好并保温（37℃水浴），待检查。 7 精液品质检查 7.1 精液的外观检查 7.1.1 精液量 成年公羊射精量，一般每次为 0.5mL～1．5mL，每 mL 精子总数约为 20 亿。 公羊的射精量一般为 0.5～2mL，平均为 1mL 左右,每 mL 精液中精子数量为 20 亿～50 亿个。 7.1.2 色泽 正常精液呈乳白色或淡黄色，浓厚而不透明；红色、褐色、绿色的精液为不 正常。 7.1.3 气味 正常精液无异味或略带腥味，腐臭等异味精液为不正常。 3 DB 5206/T 101—2018 7.2 显微镜检查 7.2.1 精液检查操作的基本原则 采得的精液要迅速置于 30℃左右的恒温水浴中或保温瓶 中；精液的检查要保持室温在 18℃～30℃和显微镜周围温度 37℃～38℃下进行；检查精液 时要求动作迅速；取样要有代表性，要求从全部并轻轻振摇的精液中取样；操作过程中不应 使精液品质受到损害和其他异物的影响。 7.2.2 精子活力：是指精液中直线运动的精子所占比例。一般采用五级评分的办法：全部精 子做直线运动，则评为五级（1）；80%左右的精子做直线运动，评为四级（0.8～0.9）；60% 左右的精子做直线运动，评为三级（0.6～0.7）；40%左右的精子做直线运动，评为二级（0.4～ 0.5）；20%左右的精子做直线运动，评为一级（0.3 以下）。在人工授精中，鲜精的活力低 于四级，一般不能用于输精。直线前进运动的精子占 90%,则活力为 0.9; 直线前进运动的精 子占 80%,则活力为 0.8; 以此类推, 活力低于 0.6 精液不能存放和稀释。 7.2.3 精液的密度：通常与精子活力同时检查。在 200～600 倍的显微镜下观察，精子密度 一般分为密、中、稀三级。如精子密布整个视野，精子之间无空隙，即为“密”；精子之间 有明显的空隙，距离为 1～2 个精子的长度，即为“中”；如果视野中只有少数精子，精子 之间的空隙超过 2 个以上精子的长度，即为“稀”。在视野中没有看到精子的，用“无”标 记。一般用于输精的精液，其精子密度至少是“中”级。 7.2.4 酸碱度（pH 值） 8 正常精液呈中性或弱碱性, 平均 PH 值为 6.6～7.5。 精液稀释与保存 8.1 精液稀释液配方 8