ICS 65.080 G 20 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3760—2019 肥料中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的 测定 高效液相色谱法 Determination of abscisic acid,1-naphthaleneacetic acid,forchlorfenuron and uniconazole in fertilizers by high performance liquid chromatography 2019 - 12 - 05 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 01 - 05 实施 发 布 DB37/T 3760—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 原理 ............................................................................... 1 4 试剂和材料 ......................................................................... 1 5 仪器 ............................................................................... 1 6 分析步骤 ........................................................................... 2 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 样品制备 ....................................................................... 样品提取 ....................................................................... 测定 ........................................................................... 空白实验 ....................................................................... 分析结果表述 ................................................................... 允许差 ......................................................................... 2 2 2 3 3 3 附 录 A （资料性附录） 脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的英文名称、分子式、分子量、CAS 号、 结构式 ............................................................................... 4 附 录 B （资料性附录） 脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的标准物质液相色谱图 .......... 5 I DB37/T 3760—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省市场监督管理局提出并组织实施。 本标准由山东化工标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、金正大生态工程集团股份有限公司、中国人民解放 军疾病控制中心、山东农业大学。 本标准主要起草人：刘晖、张娟、朱海荣、张灿、商姗姗、赵丽芳、王景超、郑树林、徐楠、尹畅、 刘金凤、孙文丹、刘鹏飞、邹惠玲、于军、苏本玉、杨越超。 II DB37/T 3760—2019 肥料中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的测定 高效液相色谱法 警告：本标准有可能涉及到有害物质、危险操作和设备的安全。本标准并未指出所有可能的安全问 题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的要求。 1 范围 本标准规定了肥料中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的高效液相色谱法。 本标准适用于水溶肥料、复混肥料、掺混肥料、配方肥料中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的检 测。 称样量为1.0 g时，方法中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的检出限为3 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 3 原理 试样中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑用甲醇进行超声提取，以甲醇-0.1 %甲酸水为流动相，在 选定的工作条件下，用高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器）测定，外标法定量。 4 试剂和材料 本标准中试验用水应符合GB/T 6682中一级用水的规格。 甲醇：色谱纯。 甲酸：分析纯。 甲酸-水溶液(1+1 000)：移取 1.0 mL 甲酸（4.2）与 1 000 mL 水混匀。 脱落酸标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 萘乙酸标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 氯吡脲标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 烯效唑标准品：已知质量分数，≥98.0 %；脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑信息一览表见附录 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 A。 4.8 脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑混合标准溶液：称取脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑标准品， 精确至 0.000 1 g，用甲醇（4.1）配制成浓度为 1 000 mg/L 的混合标准溶液，现用现配。 5 仪器 1 DB37/T 3760—2019 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器和色谱数据处理机。 微量注射器：50 μL。 漩涡混合器。 高速离心机：最高转速不低于 6 000 r/min。 分析天平：精度 0.1 mg。 超声波清洗器。 金属试验筛：0.5 mm。 有机相微孔滤膜：0.22 μm。 6 分析步骤 6.1 样品制备 固体样品：将样品粉碎，全部过0.5 mm试验筛，待用。 液体样品混匀后直接称取。 6.2 样品提取 称取0.1 g～1.0 g样品（精确至0.000 1 g），置于10 mL离心管中，加入8 mL甲醇，涡旋振荡1 min， 超声提取30 min，然后以6 000 r/min离心10 min，定容至10 mL，取上清液1 mL过0.22 μm有机相滤膜， 待测。 6.3 测定 6.3.1 液相色谱操作条件 推荐的液相色谱条件如下： a) 色谱柱：250 mm×4.6 mm(i.d.)不锈钢柱，内装 C18、 5.0 μm 填充物（或具有同等效果的色 谱柱）； b) 流动相：流动相及梯度洗脱条件见表 1； c) 流速：1.0 mL/min； d) 柱温：30 ℃； e) 检测波长：氯吡脲、烯效唑和脱落酸的最佳检测波长为 258 nm，萘乙酸最佳检测波长为 280 nm； f) 进样体积：10 μL。 上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点对给定的操作参数做适当调整，以期获得最佳效果。 典型的脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑标准溶液液相色谱图见附录B中图B.1。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间/min 流动相[甲醇(4.1)]/% 流动相[甲酸溶液(4.3)]/% 0 30 70 7.0 45 55 13.0 55 45 18.0 80 20 2 DB37/T 3760—2019 表 1 流动相及梯度洗脱条件（续） 时间/min 流动相[甲醇(4.1)]/% 流动相[甲酸溶液(4.3)]/% 26.0 90 10 26.1 30 70 33.0 30 70 6.3.2 标准曲线的绘制 分别移取脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑混合标准溶液（4.8）0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL、1.00 mL和2.00 mL至10 mL容量瓶中，甲醇（4.1）定容，配制成浓度为10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、 80 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的混合标准工作溶液。按照色谱条件（6.3.1）浓度由低到高的顺序进行 测定，以色谱峰峰面积为纵坐标，对应的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。 6.3.3 试样测定 取适量待测溶液（6.2），按照色谱条件（6.3.1）进行测定，外标法定量。待测物含量高的试样可 取适量试样溶液用甲醇稀释后进行测定。同时进行平行试验。 6.4 空白实验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 6.5 分析结果表述 试样中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲或烯效唑的含量Xi以质量分数（%）表示，结果按式（1）计算： Xi  c c   V i 0 1000 m  Di  100 .............................. (1) 式中： ci ——由标准曲线查得试样溶液中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲或烯效唑的浓度，单位为毫克每升 （mg/L）； c0 ——由标准曲线查得空白溶液中脱落酸、萘乙酸、氯吡脲或烯效唑的浓度，单位为毫克每升 （mg/L）； V ——样品的定容体积，单位为升（L）； m ——样品质量，单位为克（g）； Di ——样品稀释倍数。 计算结果保留两位有效数字，取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。 6.6 允许差 在重复性条件下获得的两次平行测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10 %。 3 DB37/T 3760—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的英文名称、分子式、分子量、CAS 号、结构式 脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的英文名称、分子式、分子量、CAS号、结构式见表A.1。 表A.1 脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑的英文名称、分子式、分子量、CAS 号、结构式 序号 中文