ICS 65.080 G 20 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3758—2019 肥料中复硝酚钠的测定 高效液相色谱法 Determination of sodium nitrophenolate in fertilizers by high performance liquid chromatography 2019 - 12 - 05 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 01 - 05 实施 发 布 DB37/T 3758—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 原理 ............................................................................... 1 4 试剂和材料 ......................................................................... 1 5 仪器与设备 ......................................................................... 1 6 分析步骤 ........................................................................... 2 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 样品制备 ....................................................................... 提取 ........................................................................... 测定 ........................................................................... 空白实验 ....................................................................... 分析结果表述 ................................................................... 允许差 ......................................................................... 2 2 2 2 3 3 附 录 A （资料性附录） 复硝酚钠等的英文名称、分子式、分子量、CAS 号、结构式 ......... 4 附 录 B （资料性附录） 复硝酚钠的标准物质液相色谱图 ................................ 5 I DB37/T 3758—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省市场监督管理局提出并至组织实施。 本标准由山东化工标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、山东省科学院生态研究所、德州市农科院、山东农 大肥业科技有限公司。 本标准主要起草人：刘晖、齐云、马强、张娟、杨中锋、朱海荣、田静、刘倩倩、于燕萍、徐楠、 尹畅、刘金凤、王景超、邹惠玲、苏本玉、丁方军。 II DB37/T 3758—2019 肥料中复硝酚钠的测定 高效液相色谱法 警告：本标准有可能涉及到有害物质、危险操作和设备的安全。本标准并未指出所有可能的安全 问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的要求。 1 范围 本标准规定了肥料中复硝酚钠的高效液相色谱法。 本标准适用于水溶肥料、复混肥料、掺混肥料、配方肥料中复硝酚钠的检测。 称样量为1.0 g时，方法中复硝酚钠检出限为3 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 3 原理 试样中复硝酚钠用甲醇进行超声提取，以甲醇-甲酸溶液为流动相，在选定的工作条件下，用高效 液相色谱仪（配有二极管阵列检测器）进行测定，外标法定量。 4 试剂和材料 本标准中试验用水应符合GB/T 6682中一级用水的规格。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 甲酸：分析纯。 4.3 甲酸-水溶液(1+1 000)：移取 1.0 mL 甲酸（4.2）与 1 000 mL 水混匀。 4.4 2-硝基苯酚钠标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.5 4-硝基苯酚钠标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %。 4.6 5-硝基邻甲氧基苯酚钠标准品：已知质量分数，ω≥98.0 %，2-硝基苯酚钠、4-硝基苯酚钠、5硝基邻甲氧基苯酚钠信息一览表见附录 A 中表 A.1。 4.7 复硝酚钠标准溶液：称取 2-硝基苯酚钠、4-硝基苯酚钠、5-硝基邻甲氧基苯酚钠标准品，用甲醇 (4.1)配制成各个标准物质浓度为 1 000 mg/L 的混合标准溶液，现用现配。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器和色谱数据处理机。 5.2 微量注射器：50 μL。 1 DB37/T 3758—2019 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 漩涡混合器。 高速离心机：最高转速不低于 6 000 r/min。 超声波清洗器。 分析天平：精度 0.1 mg。 金属试验筛：0.5 mm。 有机相微孔滤膜：0.22 μm。 6 分析步骤 6.1 样品制备 固体样品：将样品粉碎，全部过0.5 mm试验筛，待用。 液体样品混匀后直接称取。 6.2 提取 称取0.1 g～1.0 g试样（精确至0.000 1 g）置于10 mL离心管中，加入8 mL甲醇（4.1），涡旋振 荡1 min，超声提取30 min后，以6 000 r/min高速离心10 min，冷却至室温，定容至10 mL，取1 mL上 清液过0.22 μm有机相滤膜，待测。 6.3 测定 6.3.1 液相色谱操作条件 推荐的液相色谱条件如下: a) 色谱柱：250 mm×4.6 mm(i.d.)不锈钢柱，内装 Atlantis T3、5.0 μm 填充物（或具有同等 效果的色谱柱）； b) 流动相：ψ[甲醇（4.1）:甲酸溶液（4.3）]=55:45，经滤膜过滤，并进行脱气； c) 流速：0.8 mL/min； d) 柱温：30 ℃； e) 检测波长：254 nm； f) 进样体积：10 μL。 上述操作参数是典型的，可根据不同仪器特点对给定的操作参数做适当调整，以期获得最佳效果。 典型的复硝酚钠标准溶液液相色谱图见附录B中图B.1。 6.3.2 标准曲线的绘制 分别移取复硝酚钠标准溶液（4.7）0.01 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL和1.00 mL至 10 mL容量瓶中，甲醇（4.1）定容，配制浓度为1 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、80 mg/L和100 mg/L 的复硝酚钠标准工作溶液。按色谱条件（6.3.1）进行测定，以色谱峰峰面积为纵坐标，对应的溶液浓 度为横坐标作图，绘制工作曲线。 6.3.3 试样测定 取适量待测溶液（6.2），按照色谱条件（6.3.1）进行测定，外标法定量。待测物含量高的试样可 取适量试样溶液用甲醇稀释后进行测定。同时进行平行试验。 6.4 空白实验 2 DB37/T 3758—2019 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 6.5 分析结果表述 试样中5-硝基邻甲氧基苯酚钠、4-硝基苯酚钠或2-硝基苯酚钠的含量Xi以质量分数（%）表示，结 果按式（1）计算： Xi  c c   V i 0 1000 m  Di  100 .............................. (1) 式中： ci ——由标准曲线查得试样溶液中5-硝基邻甲氧基苯酚钠、4-硝基苯酚钠或2-硝基苯酚钠的浓度， 单位为毫克每升（mg/L）； c0 ——由标准曲线查得空白溶液中5-硝基邻甲氧基苯酚钠、4-硝基苯酚钠或2-硝基苯酚钠的浓度， 单位为毫克每升（mg/L）； V ——样品的定容体积，单位为升（L）； Di ——样品稀释倍数； m ——样品质量，单位为克（g）。 计算结果保留两位有效数字，取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。 注1：复硝酚钠含量以 5-硝基邻甲氧基苯酚钠、4-硝基苯酚钠和 2-硝基苯酚钠的含量总和计。 6.6 允许差 在重复性条件下获得的两次平行测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10 %。 3 DB37/T 3758—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 复硝酚钠等的英文名称、分子式、分子量、CAS 号、结构式 复硝酚钠等的基本信息见表A.1。 表A.1 复硝酚钠等的英文名称、分子式、分子量、CAS 号、结构式 序号 中文名称 英文名称 分子式 分子量 CAS 号 结构式 1 复硝酚钠 Sodium nitrophenolate / / / / 2 2-硝基苯酚钠 C6H4 NNaO3 161.09 824-39-5 3 4-硝基苯酚钠 C6H4 NNaO3 161.09 824-78-2 C7H6NNaO4 191.12 77-06-5 4 2-Nitrophenol Sodium Salt 4-Nitrophenol Sodium Salt 5-硝基邻甲氧 5-Nitroguaiacol Sodium 基苯酚钠 Salt 4 DB37/T 3758—2019 BB 附 录 B （资料性附录） 复硝酚钠的标准物质液相色谱图 复硝酚钠的标准物质液相色谱图见图B.1。 图B.1 复硝酚钠的标准物质液相色谱图 _____________