ICS 11.040.55 C 30 DB61 陕 西 省 地 方 标 准 DB 61/T 1205—2018 全自动核酸提取与反应体系构建系统 Full-automatic nucleic acid extraction and Reaction set-up system 2018 - 11 - 13 发布 陕西省质量技术监督局 2018 - 12 - 13 实施 发 布 DB61/T 1025—2018 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 技术要求 .......................................................................... 3 5 试验方法 .......................................................................... 4 附录 A（规范性附录） 标准大气压下不同温度时纯水的密度 ................................ 8 I DB61/T 1025—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由陕西省食品药品监督管理局提出并归口。 本标准起草单位：陕西省医疗器械质量监督检验院、西安天隆科技有限公司。 本标准主要起草人：蔡虎、苗保刚、李政、田真、彭年才、韩溟、刘立科。 本标准由陕西省医疗器械质量监督检验院负责解释。 本标准首次发布。 单位：陕西省医疗器械质量监督检验院 电话：029-33585319 地址：陕西省西咸新区沣西新城兴咸路中段 邮编：712046 II DB61/T 1025—2018 全自动核酸提取与反应体系构建系统 1 范围 本标准规定了全自动核酸提取与反应体系构建系统的术语和定义、技术要求、试验方法。 本标准适用于全自动核酸提取与反应体系构建，该系统由样本架、试剂架、运动系统、加样系统、 核酸提取模块、核酸检测反应体系构建模块等组成。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4793.1 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求 第1部分：通用要求 GB 4793.6 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求 第6部分：实验室用材料加热设备的特殊要 求 GB 4793.9 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求 第9部分：实验室用分析和其他目的自动和 半自动设备的特殊要求 GB/T 14710 医用电气设备环境要求及试验方法 GB/T 18268.1 测量、控制和实验室用的电设备 电磁兼容性要求 第1部分：通用要求 GB/T 18268.26 测量、控制和实验室用的电设备 电磁兼容性要求 第26部分：特殊要求 体外诊断 (IVD)医疗设备 YY 0648 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求 第2-101部分：体外诊断（IVD）医用设备的 专用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 反应体系构建 reaction set-up 按照特定的步骤和配比，将参与反应的不同试剂组份进行配制混合，构建适用于样品检测的反应体 系的操作过程。 3.2 升温速率 heating rate 升温过程中单位时间内上升的平均温度值。 3.3 温度均匀性 temperature uniformity 1 DB61/T 1025—2018 温度到达设定温度后，加热模块不同位置的温度一致性。 3.4 温度准确度 temperature accuracy 温度到达设定温度后，实际温度测定值与设置温度差值的绝对值。 3.5 温度波动度 temperature fluctuation 温度到达设定温度后，恒温计时持续时间内，温度采集仪器记录的最高温度与最低温度差值的一半。 3.6 移液准确性 pipetting accuracy 仪器移液模块执行移液操作时，实际移取的液体体积与设定体积之间的差值。 3.7 移液精密度 pipetting precision 仪器移液模块执行移液操作时，相同体积进行多次移取时，实际移取的液体体积的一致性。 3.8 反应体系 reaction system 样本经过自动加样、核酸提取、体系构建后，得到的用于后续检测的产物。 3.9 交叉污染率 cross contamination rate of sample detection 在检测过程中，由于强阳性样本的存在，导致阴性样本检测呈现假阳性结果现象的发生机率。 3.10 假阳性 false positive 阴性样品被检测判定为阳性的百分比。 3.11 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种对特定DNA或RNA片段在体外进行快速扩 增的方法。 3.12 Ct值 cycle threshold 阈值循环数（Cycle threshold），是实时监测扩增过程中，反应管内荧光信号到达指数扩增时经 历的循环周期数。 3.13 标准差 standard deviation 2 DB61/T 1025—2018 也称均方差，是各数据偏离平均数的距离的平均数，标准差是方差的算术平方根，能反映一个数据 集的离散程度。 3.14 变异系数 coefficient of variation 是标准差与其平均数的比，和标准差一样，都是反映数据离散程度的绝对值。其数据大小不仅受变 量值离散程度的影响，而且还受变量值平均水平大小的影响。 4 技术要求 4.1 核酸提取温度控制 4.1.1 升温速率 从25℃～90℃，升温速率应不小于2.0℃/s。 4.1.2 温度均匀性 不同温度测试点，温度差值应不大于2.5℃。 4.1.3 温度准确度 测定值与设置温度差值绝对值应不大于3℃。 4.1.4 温度波动度 应不大于2.0℃。 4.2 移液准确性及移液精密度 在移液量程范围内，选定高、中、低3个不同的移液水平，进行检测。测定值与设定值的相对偏差、 测定值的变异系数应满足表1要求。 表1 移液准确性及精密度要求 体积范围 ＜100μl 100μl～300μl ＞300μl 相对偏差 ≤8% ≤5% ≤3% 变异系数（CV，%） ≤5% ≤3% ≤2% 4.3 反应体系性能 4.3.1 交叉污染率 阴性样品检测结果的假阳性率≤5%，且假阳性定量结果低于定量检测下限。 4.3.2 精密度 分别对高、中、低3个不同浓度的样品进行重复检测，并对仪器构建的核酸反应体系进行实时荧光 定量PCR扩增，各浓度样本检测结果Ct值的变异系数（CV，%）应不大于3%。 4.3.3 线性 3 DB61/T 1025—2018 对5倍或10倍浓度系列梯度稀释的样品（至少5个梯度）进行检测，并对仪器构建的核酸反应体系进 行实时荧光定量PCR扩增，各浓度样品检测结果Ct值与稀释倍数的线性相关系数r≥0.980。 4.4 环境试验要求 应符合GB/T 14710中适用条款的要求。 4.5 电气安全要求 应符合GB 4793.1、GB 4793.6、GB 4793.9和YY 0648中适用条款的要求。 4.6 电磁兼容要求 应符合GB/T 18268.1、GB/T 18268.26中适用条款的要求。 5 试验方法 5.1 核酸提取温度控制 5.1.1 升温速率 编辑实验程序，将核酸提取温度设置为90℃±10℃，加热持续时间不少于5min，将温度传感器固定 在加热装置的测试点（该测试点应尽量靠近仪器内部传感器）上。开启数据采集仪，确认仪器正常，运 行程序。取25℃±0.5℃范围内任一温度点TA，取90℃±0.5℃范围内任一温度点TB，从TA到达TB经过的时 间记为t，按照公式（1）计算加热装置的升温速率V升，结果应符合本标准4.1.1的要求。 V升  TB  TA ...................................... (1) t 式中： V升 ——升温速率； TB ——90℃±0.5℃范围内任一温度点； TA ——25℃±0.5℃范围内任一温度点。 5.1.2 温度均匀性 编辑实验程序，分别将核酸提取温度设置为50℃±10℃、75℃±10℃、100℃±10℃范围内的任意 温度点，恒温时间15min，将温度传感器固定在加热装置的测试点（测试点应均匀分布在整个加热装置 上，并尽量靠近仪器内部传感器）上。开启数据采集仪，确认仪器正常，运行程序。用数据采集仪记录 加热装置的实际温度变化情况。在温度达到设置温度并稳定2min后，记录加热装置n（n≥12）个测试点 的实际测量温度T i（i=1，2，…n），分别计算Ti “最大值”及“最小值”的温度差值ΔT，结果均应符 合本标准4.1.2的要求。 5.1.3 温度准确度 编辑实验程序，分别将核酸提取温度设置为60℃±10℃、80℃±10℃范围内的任意温度点，恒温时 间不少于5min。将温度传感器固定在加热装置的测试点（该测试点应尽量靠近仪器内部传感器）上。开 启数据采集仪，确认仪器正常，运行程序。用数据采集仪记录加热装置的实际温度变化情况。在温度达 4 DB61/T 1025—2018 到设置温度并稳定2min后，计时2min，每20s记录一次测试点的实际测量温度T i（i=1，2，…6），其平 均值TM与“设定值”的温度差值ΔT，应符合本标准4.1.3的要求。 5.1.4 温度波动度 编辑实验程序，将核酸提取温度设置为80℃±10℃范围内的任意温度点，设恒温时间15min。将温 度传感器固定在加热装置的测试点（测试点应尽量靠近仪器内部传感器）