ICS.65.020 的 B 43 铜 DB5206 仁 市 地 方 标 准 DB 5206/T 100—2018 代替DB 522200/T 115-2011 铜仁市牛冷冻精液 人工授精技术操作规程 Tongren City of the bovine frozen semen for artificial insemination technology operating rules 2018-12-06 发布 铜仁市质量技术监督局 发布 2018-12-06 实施 DB 5206/T 100—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的 规则起草。 本标准代替DB 522200/T 115—2011《铜仁地区牛冷冻精液人工授精技术操作规程》。 本标准与DB 522200/T 115—2011相比除编辑性修改外主要差异如下： ——修改了本规程的范围见 1； ——增加了一条规范性引用文件见2； ——修改了术语与定义的部分内容见3.1、3.2、3.3、3.4； ——增加了术语与定义的一节内容：妊娠诊断见3.5； ——增加了对冷冻精液质量的规定见5.1； ——增加了对冷冻精液运输的规定见5.3； ——删除了原规程中牛的保定规定，修改增加到本规程配种前准备见6.3.4、2011版7。 本标准由铜仁市农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：铜仁市畜牧技术推广站、思南县、印江县、松桃县、石阡县、德江县、 江口县、碧江区、万山区、玉屏县、沿河县畜牧技术推广站。 本标准主要起草人：郑晓刚、任明晋、龙真权、毛同辉、冉隆权、李华磊、樊蓉、石建 华、黄仁芳、侯芳、王华、田茂书、裴国海、邓万红、张前卫、杨昌平、何永杰、王娟、吴 继标、杨蛟、张妮妮。 本标准的历次发布情况为： ——DB 522200/T 115-2011 I DB 5206/T 100—2018 铜仁市牛冷冻精液人工授精技术操作规程 1 范围 本标准规定了牛冷冻精液人工授精技术的术语与定义、人工授精点建设、冷冻精液质量、 贮存和运输、配种前的准备、冷冻精液的提取、冷冻精液的解冻、精液品质检查、母牛发情 鉴定、输精和妊娠诊断。 本标准适用于铜仁市辖区内各养牛场（户）母牛的冷冻精液人工授精技术应用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适 用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4143 牛冷冻精液 GB/T 5458 液氮生物容器 NY/T 1335 牛人工授精技术规程 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 冷冻精液 指利用器械以人工方法采集种公牛精液，通过检查，用稀释液等温稀释、平衡后快速冷 冻，在液氮中保存。冷冻精液包括颗粒冷冻精液、安瓿冷冻精液和细管冷冻精液，本规程中 所指冷冻精液是指细管冷冻精液。 3.2 冷冻精液解冻 细管冷冻精液直接置于 38℃－40℃水浴中，使冷冻精子重新恢复活力的处理方法。 3.3 人工授精 用人工方法采取公牛精液，经检查处理后，用器械输入发情母牛生殖道内，使其受胎的 技术。 3.4 发情鉴定 通过观察或检查母牛外部行为征兆和内部生殖器官变化，判断卵巢卵子发育和排出等活 动情况以此确定母牛发情程度的方法。 1 DB 5206/T 100—2018 3.5 妊娠诊断 通过直肠检查确定母牛是否妊娠的技术。 4 人工授精点建设 4.1 人工授精点应建设在交通方便、能繁母牛相对集中的村寨或规模养殖场，并且符合当地 良种牛的推广改良规划的要求。 4.2 从事牛冷冻精液人工输精操作人员必须身体健康，具有一定文化程度，经县级以上畜 牧行政主管部门培训，持证上岗。 4.3 人工授精点设置冻精贮存室，并有必备设施见附录 A。应有配种记录、产犊记录。室 内清洁、干燥，窗明台净。严禁贮放农药、化肥、烤烟等刺激性物品，室内严禁吸烟、饮酒。 室外安装有牛保定架。 5 冷冻精液质量、贮存和运输 5.1 冻精的质量 5.1.1 活力、密度、有效精子数、畸形率、细菌数等质量符合 NY/T 1335 要求。 5.1.2 细管完整，字迹清楚，应有生产单位简称、品种、编号、生产日期。装细管冻精的纱 布干净、标签清楚。 5.1.3 冻精在输精前应进行质量检测。 5.2 冻精贮存 5.2.1 冷冻精液应侵泡在液氮生物容器中贮存，液氮生物容器应符合 GB/T 5458 的规定。 5.2.2 在液氮罐中贮存的冷冻精液必须浸没于液氮中，液氮在不足总容积三分之一时，应及 时补充。 5.2.3 取放冷冻精液时，提筒只允许上提到液氮罐的瓶颈段以下，严禁提出罐外。在罐内脱 离液氮的时间不得超过 10s，必要时须再次浸没后再提取。 5.2.4 在向另一液氮贮存罐内转移冷冻精液时，精液提筒脱离液氮不得超过 5s。 5.2.5 取放冷冻精液后，应及时盖上罐塞，尽量减少开启容器盖塞的次数和时间，以防止异 物落入罐内，减少液氮消耗。 5.2.6 严防不同品种和编号的冷冻精液混杂存放，难以辨识的应予以销毁。 5.2.7 对长期贮存冷冻精液的液氮罐应定期清理和洗刷，如发现液氮消耗显著增加，或容器 外挂霜，应及时更换。 5.3 冻精运输 运输冻精时，应使用专用液氮容器（有保护外套）,添满液氮，固定容器盖，液氮罐不 得倒放及碰撞和强烈震荡。远途运输冻精时，备足液氮，及时补加。 6 配种前的准备 2 DB 5206/T 100—2018 6.1 技术员的准备 技术员应身体健康，采精前剪短指甲并抹平，用肥皂洗手后擦干，穿上洁净工作服。 6.2 消毒药品的准备 消毒药品包括 75%的酒精、0.9%的生理盐水 0.3‰的新洁尔灭、脱脂药棉、高锰酸钾等， 并加以标识。 6.3 器械的清洗与消毒 6.3.1 器械的清洗 将输精所有器械用 2％～3％的碳酸钠或洗涤剂清洗干净，再用清水冲洗 2～3 次。 6.3.2 器械的消毒 输精金属器械、玻璃器皿、细管剪、镊子等蒸煮消毒 15 分钟，用前再用生理盐水冲洗 数次，也可用 75%的酒精棉球由输精枪顶端开始向后擦拭两遍，待酒精挥发完毕后再用生理 盐水洗涤三次放入盘中待用 。 6.3.3 输精器用后及时清洗、消毒。每输配一头母牛，使用一支输精枪，塑料外套管只能 使用一次。 6.3.4 牛的保定 采用站立保定，尾巴向右上方拴系提起。 7 冷冻精液的提取 冻配点提取精液时，应将所提取的品种、牛号、数量等记录完善见附录 B 并核对无误后 妥善保存。提取精液应做到轻拿轻放，严防碰撞。 8 冷冻精液的解冻 8.1 细管冷冻精液可用 38℃左右的温水直接浸泡解冻，时间为 10s-15s。 8.2 解冻后精液温度不得超过外界环境温度，一般应控制在 10℃以下。 8.3 细管冻精解冻后，先检查其质量，有裂纹、封口不严、空管等现象不能用。 8.4 细管冷冻精液应在 1h 内及时输精。 8.5 解冻后精液需作运输时，应置于 4℃-5℃温度下不得超过 8 小时。 9 精液品质检查 9.1 精液质量应符合 GB 4143 的要求。 9.2 检查精子活力用的显微镜载物台应保持 35℃-38℃。 9.3 在显微镜视野下，呈直线前进运动的精子数占全部精子数的百分率来评定精子活力。 100%的精子呈直线运动者评为 1.0，90%的精子呈直线运动者评为 0.9，以此类推。 9.4 冻精解冻后精子活力应达 0.3 以上（1200 万有效精子）方可输精。 10 母牛发情鉴定 3 DB 5206/T 100—2018 10.1 发情鉴定 采用“一问二看三查”的外部观察和直肠触摸卵泡相结合方法，以直肠检查卵泡发育程 度为主要依据。 10.1.1 询问畜主：了解母牛年龄、胎次、食欲情况、发情行为表现、开始时间、是否与公 牛交配。 10.1.2 观察母牛发情表现：一看阴唇肿胀程度，二看粘液色泽分泌量、粘稠情况，三看阴 唇粘膜色泽变化，以便确定输配时间。 10.1.3 三是直肠检查方法：直肠触摸子宫、卵巢，判断其长短、粗细、质地。顺序是：手 戴乳胶手套，涂以滑润剂，五指并拢伸入肛门，清除宿粪后，手掌伸平，掌心向下，在骨盆 底的正中有一长而稍扁的棒状物为子宫颈。顺着子宫颈向前伸进，可摸到子宫角间沟，沟的 两旁各有一条向前弯曲的圆筒状物，是左右子宫角，沿着子宫角大弯向下侧面摸，可摸到扁 圆、柔软而有弹性的卵巢。用手指触摸卵巢表面的卵泡发育程度，以确定是否输精。最佳输 配时间是母牛发情中期末和发情后期。 10.2 发情初期 母牛鸣叫不安，食欲开始减退，想爬跨它牛，但拒绝公牛爬跨，外阴轻微红肿，阴道粘 膜充血，流出稀薄透明液体。直肠检查子宫变软，卵巢有一侧增大，在卵巢上有卵泡，无弹 性。此期维持 10h 左右，不能输精。 10.3 发情中期 母牛极度不安，食欲停止，性欲旺盛，求配心切，爬跨它牛，外阴部明显肿胀，流出粘 液增多。直肠检查子宫松软，卵泡体积增大，直径 1.0cm-1.5cm，突出于卵巢表面，弹性强， 有波动感。此期约维持 8h-12h，输精偏早。 10.4 发情末期 母牛性欲减退，不再爬跨它牛，由不安转为安静，外阴部肿胀减退，粘液变稠，呈黄白 色。直肠检查子宫颈变松软，卵泡壁变薄，波动很明显，呈熟葡萄状，有一触即破感觉。此 期约维持 8h-10h，为最佳输精时期。 11 输精 11.1 母牛需经发情鉴定和健康检查后才能予以输精。 11.2 母牛在输精前外阴部应先用清水清洗，然后用新洁尔灭或 0.1%高锰酸钾溶液消毒，待 干燥后再用生理盐水擦拭。 11.3 发情母牛每次输入 1 支将解冻后的细管冻精，冻精剪去顶部封口（切不可错把细管的 棉塞端剪去）后插入输精枪(将输精枪的钢芯插入细管的棉塞端口内)，套上塑料外套管备用。 11.4 采用直肠把握子宫颈深部输精法。 11.5 输精员左手戴长臂一次性手套，用水沾湿，手呈锥形，手心向上伸入直肠内掏出宿粪， 清洗消毒外阴部、擦干，然后再手心向上伸入直肠后手心转下，寻找子宫颈，并握住子宫颈 的外口端，同时臂肘向下轻压，使阴门开裂。 4 DB 5206/T 100—2018 11.6 右手将准备好的输精枪插入阴道，先自阴门向前向上与水平线呈 45 度角插入约 5cm-10cm（避开尿道口），再改向前平插，两手相互配合，使输精枪尖端对准子宫颈口，缓 缓导入子宫颈部内，然后注入精液。 11.7 输精应做到轻入、慢注、缓出、适深、适时。发情母牛一个情期输精两次的，其间隔 时间为 8h—12h。 11.8 输精母牛须作好记录，各项记录真实准确见附录 C。 11.9 输精后畜主必须在下一个情期（一般在输精后