65.020.01 ICS B 05 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1776—2019 马铃薯枯萎病抗性鉴定技术规程 Technical Regulation for Potato Fusarium Wilt Resistance Identification 2019-12-05 发布 内蒙古自治区市场监督管理局 2020-01-05 实施 发 布 DB15/T 1776—2019 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本标准由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。 本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本标准主要起草人：徐利敏、赵远征、贾瑞芳、郭景山、米丽、张俊、谢锐、郝文胜、常峰、韩志 刚、郭斌煜、李振、陈文晋。 I DB15/T 1776—2019 马铃薯枯萎病抗性鉴定技术规程 1 范围 本标准规定马铃薯抗枯萎病的鉴定方法、调查及计算方法和抗病性评价标准。 本标准适用于马铃薯品种（系）对枯萎病抗性水平的鉴定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 马铃薯枯萎病 potato fusarium wilt 由镰刀菌(Fusarium spp.)引起的一种马铃薯土传性真菌病害。 2.2 抗性评价 resistance evaluation 根据采用的技术标准判别植物对待定病害反应程度和抵抗水平的描述。 2.3 病情级别 disease level 人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。 2.4 病情指数 disease index 全面考核发病率和严重程度的综合指标。用发病植株的总病级数与全部调查植株的理论最高总病级 数的比较相对数表示。 2.5 接种体 inoculum 用于接种以引起病害的病原物。 3 鉴定方法 3.1 供试菌株 选择当地马铃薯主产区发病植株上分离鉴定的马铃薯枯萎病菌株（Fusarium oxysporum）。 1 DB15/T 1776—2019 3.2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂粉13 g、用蒸馏水定容至1000 mL，高温湿热灭菌（121 ℃ 30 min）备用。 麦麸培养基：麦麸，加入适量的水，使其刚好成团，装入小罐头瓶，高温湿热灭菌（121 ℃ 30 min）， 冷却到室温备用。 3.3 对照马铃薯品种的选择 选用马铃薯枯萎病高抗品种和高感品种作为接种对照，可用中薯18号和费乌瑞它。 3.4 枯萎病菌抗性的室内鉴定 3.4.1 接种体的制备 在无菌条件下，将在PDA培养基上培养的菌株接种到麦麸培养基上，置于25 ℃培养7 d；然后用无 7 菌水冲洗麦麸，4层灭菌脱脂纱布过滤，滤液制备孢子量达到1.0×10 个/mL的孢子悬浮液。 3.4.2 接种方法 将供试马铃薯品种的种薯（原原种）种植于装有灭菌土的的营养钵（15 cm×15 cm）中，每个品种 种植12盆（其中3盆作为对照），每盆两株，置于25 ℃、50 %湿度条件下生长。在4～6叶期，进行伤根 处理并灌入配制好的100 mL孢子悬浮液，接种无菌水作为对照（CK）。接种后正常管理，30 d后按照枯 萎病病情分级标准（附录A.1）进行调查。 3.5 枯萎病菌抗性的田间鉴定 3.5.1 接种体制备 在无菌条件下，将在PDA培养基上培养的菌株接种到麦麸培养基上，置于25 ℃培养7 d，晾干，孢 8 子量调整为1.0×10 个/g用于接种。 3.5.2 接种方法 每株穴施2 g麦麸培养物进行接种。 3.5.3 田间设计 抗性鉴定在人工接种的条件下进行，每个品种采用随机区组设计，3次重复，每个重复50株，设置 保护行。马铃薯整个生育期采取人工除草，不进行病虫害防治，其它按常规管理。 4 调查及计算方法 在马铃薯盛花期一周后进行调查。按照附录A.2分级标准进行统计。根据公式（1）和（2），计算 病情指数（DI）和计算相对抗病指数（RDI）。 ................................(1) 式中： DI——病情指数； N ——各病级病株数； 2 DB15/T 1776—2019 G ——相应病级； T ——调查植株总数； H ——最高病级。 ....................................(2) 式中： RDI ——相对抗病指数； DI ——各品种病情指数； HDI ——发病最重品种病情指数。 5 抗病性评价 按照表1抗性鉴定标准确定品种抗性水平。 表1 马铃薯品种枯萎病抗性评定标准 抗病型 相对抗病指数 免疫（Immune，I） 1 高抗（High Resistant，HR） 0.99～0.80 中抗（Mid-Resistant，MR） 0.79～0.60 中感（Mid-Sensitive，MS） 0.59～0.40 高感（High Sensitive，HS） 0.39～0.00 ________________________ 3 DB15/T 1776—2019 AA 附 录 A （规范性附录） 马铃薯枯萎病分级标准 A.1 室内马铃薯枯萎病分级标准 根据马铃薯的发病程度，分为0、1、2、3、4、5级共6个级别，其分级标准如下： ——0 级：叶片没有明显枯黄萎蔫，植株生长正常； ——1 级：0～20 %的叶片枯黄萎蔫； ——2 级：21 %～40 %的叶片枯黄萎蔫； ——3 级：41 %～60 %的叶片枯黄萎蔫； ——4 级：61 %～80 %的叶片枯黄萎蔫； ——5 级：81 %以上的叶片枯黄萎蔫。 A.2 田间马铃薯枯萎病分级标准 根据马铃薯的发病程度，分为0、1、2、3、4级共5个级别，其分级标准如下： ——0 级：叶片没有明显枯黄萎蔫，植株生长正常； ——1 级：植株 25 %以下叶片表现褪绿、黄化、萎蔫枯死； ——2 级：26 %～50 %的叶片枯黄萎蔫； ——3 级：51 %～75 %的叶片枯黄萎蔫； ——4 级：76 %以上叶片表现出严重症状、植株枯萎死亡。 ________________________ 4