ICS 67.080.20 B 31 DB 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1713—2019 “内蒙古大兴安岭黑木耳”菌种 生产技术规程 Technical Regulations for Production of Auricularia auricula Species in Daxing'an Ling Mountains in Inner Mongolia 2019-11-05 发布 内蒙古自治区市场监督管理局 2019-12-05 实施 发 布 DB15/T 1713—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 一级菌种 .......................................................................... 1 3 液态菌种 .......................................................................... 1 4 三级菌种 .......................................................................... 2 I DB15/T 1713—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则编写。 本标准由内蒙古大兴安岭重点国有林管理局提出。 本标准由内蒙古自治区林业标准化技术委员会（SAM/TC 18）归口。 本标准起草单位：中国内蒙古森林工业集团有限责任公司、内蒙古大兴安岭林业科学技术研究所、 内蒙古自治区林业科学研究院、根河市满归森华食用菌种植农民专业合作社、内蒙古克一河林业局、内 蒙古阿里河林业局、阿荣旗卫生和健康委员会、根河市利民食用菌产销专业合作社、内蒙古自治区园艺 研究院、内蒙古自治区标准化院。 本标准主要起草人：赵旭、李杰、李慧、张幼军、王志臣、胡世德、李世繁、韩怀彦、李楠楠、姜 娜、余涛、韩立明、印迪、张娟。 II DB15/T 1713—2019 “内蒙古大兴安岭黑木耳”菌种生产技术规程 1 范围 本标准规定了“内蒙古大兴安岭黑木耳”一级菌种、液态菌种、三级菌种。 本标准适用于“内蒙古大兴安岭黑木耳”各级菌种生产。 2 一级菌种 2.1 常用配方 水1000 ml、麦麸50 g、去皮马铃薯200 g、蛋白胨2 g、维生素B2 10 mg、磷酸二氢钾2 g、葡萄糖 20 g、硫酸镁0.5 g～1 g、琼脂10 g～20 g。 2.2 灭菌 压力升至0.11 MPa～0.13 MPa,稳定25 min～30 min，温度降至80 ℃以下，取出试管摆斜面。 2.3 接种培养 在无菌环境下进行操作，25 ℃恒温暗培养10 d～15 d。 3 液态菌种 3.1 摇瓶制作 3.1.1 常用配方 水1000 ml、麦麸50 g、去皮马铃薯200 g、蛋白胨2 g、维生素B2 10 mg、磷酸二氢钾2 g、葡萄糖 10 g、硫酸镁2 g、赤砂糖15 g、消泡剂1滴。 3.1.2 灭菌 压力升至0.11 MPa～0.13 MPa,稳定25 min～30 min，温度降至90 ℃以下，取出三角瓶。 3.1.3 接种培养 在无菌环境下进行，每100 ml摇瓶中加入2 ㎜～3 ㎜一级菌种块7～10块，120 r/min～150 r/min， 25 ℃恒温暗摇7 d。 3.2 液态菌罐 3.2.1 常用配方（罐容量 600L，接菌数 25000 袋～30000 袋） 菌罐加水2/3，面粉0.67 %、豆粉2650 g、赤砂糖4000 g、消泡剂100 ml、磷酸二氢钾0.1 %、硫酸 镁0.05 %。 1 DB15/T 1713—2019 3.2.2 制作过程 按下列步骤完成： a) 菌罐内注水 2/3，加温至 40 ℃时适当放出水与培养基一起用搅拌机搅拌均匀； b) 水温到 90 ℃后倒入搅拌均匀的培养基、消泡剂，菌罐盖封紧，加热至 121 ℃～123 ℃后保持 50 min； c) 菌罐夹层里注入凉水降温，罐内温度降到 28 ℃时开始接菌，接菌前房间应净化杀菌； d) 菌罐的注料口处用酒精棉圈套好点燃棉圈，在燃烧状态下快速倒入两瓶三角瓶菌种，封闭注料 口熄灭火焰； e) 菌罐温度 24 ℃～26 ℃，洁净培养 4 d～6 d； f) 每天观察菌球的生长状态是否正常，正常的继续培养，不正常的终止培养。 4 三级菌种 4.1 常用配方 柞桦木屑79 %、麦麸16 %、豆粉3 %、白灰1 %、石膏1 %。 4.2 制作 培养基选料和配制上应把握好以下各点： a) 边搅拌边加水，搅拌均匀后含水量 60～62 %，PH 值在 7.5～8.5，装袋灭菌； b) 菌包要装实，上下松紧一致，料面平整无散料，袋料紧贴，料袋无褶皱。 4.3 灭菌 高温蒸汽灭菌要求： a) 常压蒸汽灭菌：温度 100 ℃保持 8 h～10 h，焖锅 2 h～3 h；移入冷却室冷却； b) 高压灭菌：温度 121 ℃～123 ℃保持 2.5 h～3 h；自然降温至 80 ℃以下，出锅冷却。 4.4 接菌 4.4.1 基本要求 基本要求包含如下内容： a) 接菌室的基本要求：接菌室设在灭菌室与培养室之间，高 2.5 m，接菌室外设缓冲间，供工作 人员换衣帽鞋等；接菌室墙壁、屋顶、地面平整、光滑、密封，便于彻底消毒，接菌室与缓冲 室上方各装一只 30 W 的紫外线灯，接种前后照射 30 min～60 min； b) 接种人员卫生要求：工作人员取得健康合格证后方可上岗；进入接菌室时应穿戴整洁的工作服， 帽、鞋、戴胶套，不得化妆、佩戴饰品、喷洒香水。 4.4.2 接菌前准备 按以下步骤完成： a) 接菌室清扫卫生后，将菌种、消毒棉、丁腈手套、海绵塞、接种工具等所用物品全部拿入室内， 打开紫外线灯后人员退出； b) 1 h 后，关闭紫外线灯，打开排气设备 10 min 后，工作人员进行接菌。 2 DB15/T 1713—2019 4.4.3 接菌 按以下步骤完成： a) 先用酒精浸泡后的消毒棉擦拭接菌枪头，在酒精灯火焰上均匀烧片刻，开始接菌，每段菌袋注 入液态菌量准确控制在 15 ml～20 ml； b) 在接菌过程中，每完成一筐，应在酒精灯火焰上消毒接菌枪，避免菌枪被杂菌污染； c) 接菌枪枪头探进袋底，准确注入 15 ml～20 ml 液态菌后，快速收回，塞好棉塞，操作人员做 到相互配合、动作连贯。 4.5 培养环境要求 应符合以下要求： a) 接菌后的三级菌袋要迅速移入培养车间，车间上、下方设有通风口、换气窗； b) 三级菌袋整齐的摆放在培养架上，保证菌袋间通气均匀； c) 培养初期菌袋间温度控制在 25 ℃～28 ℃； d) 培养中期（11 d～20 d）袋温应该控制在 23 ℃； e) 培养后期（菌丝长满 2/3 袋）袋温应该控制在 20 ℃左右； f) 培养过程中，发现有杂菌感染的菌袋应取出，另行处理； g) 每天上午打开换气窗通风 30 min，保证发菌均匀； h) 三级菌袋培养过程中，保证黑暗保温、定时通风。 4.6 优质菌种判定 判定应符合以下标准： a) 菌丝洁白无杂菌，棉塞纸盖均无霉点，菌丝长满袋后，表面分泌茶色液滴，有少数原基形成， 可视为正常； b) 打开海绵塞有黑木耳独特的香味，无霉味和酸臭味； c) 从菌袋中随机挖取一块菌种，成块而有韧性，不松散； d) 菌种块接于新的培养基上，在 25 ℃下培养 24 h～28 h 菌种块萌发正常。 _________________________________ 3