ICS 71.100.70 Y 42 DB 37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3761—2019 化妆品中 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇的测 定 高效液相色谱法 Determination of 2-Bromo-2-nitropropan-1,3-diol in cosmetics—High performance liquid chromatography 2019 - 12 - 05 发布 山东省市场监督管理局 2020 - 01 - 05 实施 发 布 DB 37/T 3761—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由山东省市场监督管理局提出、归口并组织实施。 本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、山东众合天成检验有限公司。 本标准主要起草人：侯广月、周莉莉、杜营、杨帆、卞英芳、王一村、刘丽洁、李大为、许士明、 汪英英、刘金霞、徐正、武笑颖、李娜、刘忠强、曹世源、邹惠玲、苏本玉、李倩。 I DB 37/T 3761—2019 化妆品中 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于液态、半固态等乳霜类和部分膏霜类化妆品中2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇的测定。 本标准的方法检出限为0.01 g/kg，定量限为0.03 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 用甲醇水溶液提取试样中的2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇，用配有紫外或二极管阵列检测器的高效液 相色谱仪测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 甲醇：色谱纯。 4.1.2 乙酸铵。 4.1.3 正己烷：色谱纯。 4.1.4 氯化钠。 4.2 试剂配制 4.2.1 乙酸铵溶液（0.02 mol/L）：称取 1.54 g 乙酸铵，加入适量水溶解，用水定容至 1 000 mL， 经 0.22 μm 水相微孔滤膜过滤后备用。 4.2.2 甲醇水溶液（84 %，体积比）：量取 84 mL 甲醇，加水 16 mL，充分混匀。 4.2.3 水饱和正己烷：取 200 mL 正己烷于 250 mL 分液漏斗中，加入少量水，剧烈振荡，静置分层后， 弃去下层水层即得。 4.3 标准品 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇（CAS号：52-51-7），纯度不低于99.0 %。 1 DB 37/T 3761—2019 4.4 标准溶液配制 4.4.1 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇标准储备溶液（1.0 mg/mL）：准确称取 0.025 g（精确至 0.1 mg） 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇标准品，用甲醇（4.1.1）溶解并定容至 25 mL，配制成浓度为 1.0 mg/mL 的 标准储备液，2 ℃～8 ℃冷藏保存，有效期 3 个月。 4.4.2 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇标准工作溶液：将 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇标准储备液（4.4.1） 用甲醇水溶液 （4.2.2）依次稀释成 0.4 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、 20.0 μg/mL、50.0 μg/mL、100.0 μg/mL 的系列标准溶液。使用前配制。 4.5 材料 4.5.1 有机相微孔滤膜：0.22 μm。 4.5.2 塑料离心管：50 mL。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 分析天平：感量分别为 0.1 mg 和 0.01 g。 超声波清洗器。 涡旋混合器。 离心机：转速不低于 6 000 r/min。 分液漏斗：250 mL。 6 分析步骤 6.1 试样提取 6.1.1 液态化妆品 称取试样1.0 g（精确至0.1 mg），置于50 mL具塞离心管中，准确加入25.00 mL甲醇水溶液（4.2.2）， 涡旋混合均匀，超声提取25 min，6 000 r/min 离心5 min，取上清液经有机相微孔滤膜（4.5.1）过滤 后上机测定。 6.1.2 乳类、膏霜类化妆品 称取试样1.0 g（精确至0.1 mg）和2 g氯化钠，置于50 mL具塞离心管中，准确加入25.00 mL甲醇 水溶液（4.2.2），涡旋混合均匀，超声提取25 min，6 000 r/min 离心5 min，取上清液经有机相微孔 滤膜（4.5.1）过滤后上机测定；若离心后上清液仍浑浊，以6.1.3进行试样提取。 6.1.3 部分膏霜类化妆品 称取试样1.0 g（精确至0.1 mg）和2 g氯化钠，置于50 mL具塞离心管中，准确加入25.00 mL甲醇 水溶液（4.2.2），涡旋混合均匀，超声提取25 min。加入10 mL水饱和的正己烷（4.2.3），涡旋，离 心，用吸管将上层正己烷絮凝状固体仔细吸净弃去。在下层溶液中再加入10 mL水饱和的正己烷（4.2.3）， 涡旋，离心，弃去上层正己烷。6 000 r/min 离心5 min，取上清液经有机相微孔滤膜（4.5.1）过滤后 上机测定。 2 DB 37/T 3761—2019 6.2 仪器参考条件 6.2.1 色谱柱：T3 柱，250 mm×4.6 mm(i.d.)，5 μm，或性能相当者。 6.2.2 流动相：甲醇+0.02 mol/L 乙酸铵溶液=30+70（体积比）。 6.2.3 流速：1.0 mL/min。 6.2.4 柱温：35 ℃。 6.2.5 进样体积：10 μL。 6.2.6 检测波长：二极管阵列检测器扫描波长设为 200 nm～500 nm，紫外检测器设为 230 nm。 6.3 标准曲线的制作 将标准工作溶液（4.4.2）按色谱条件（6.2）进行测定，以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标， 以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇标准溶液的典型色谱图参见附录A。 6.4 试样溶液的测定 将试样溶液（6.1）按色谱条件（6.2）进行测定，外标法定量。试样溶液中被测物的响应值均应在 标准曲线的线性范围内，超出线性范围则应使用流动相（6.2.2）稀释后再进行分析。 7 分析结果的表述 试样中2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇的含量按式（1）计算： X  c V  n .............................................................................. (1) 1000  m 式中： X ——试样中2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇的含量，单位为克每千克（g/kg）； c ——由标准曲线得到的试样溶液中2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇浓度，单位为微克每毫升 （μg/mL）； V ——试样提取溶液的体积，单位为毫升（mL）； n ——试样的稀释倍数； m ——试样质量，单位为克（g）； 1000——由mg/kg转换为g/kg的换算因子。 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 3 DB 37/T 3761—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇标准溶液的典型色谱图 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇标准溶液的典型色谱图见图A.1。 5.499 0.010 0.008 AU 0.006 0.004 0.002 0.000 -0.002 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 分钟 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00 图A.1 2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇标准溶液的典型色谱图 _________________________________ 4