ICS 65.020.01 B 05 DB41 河 南 省 地 方 标 准 DB41/T 1926—2019 高油酸花生四级种子质量标准 2019 - 11 - 21 发布 河南省市场监督管理局 2020 - 02 - 21 实施 发 布 DB41/T 1926—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由河南省农业农村厅提出并归口。 本标准起草单位：河南省农业科学院经济作物研究所。 本标准主要起草人：郝西、臧秀旺、刘娟、张俊、郑峥、郭秀璞、汤丰收、高伟、徐静、张忠信、 孙子淇、苗利娟、杜红、张香萍、王桂芳、崔亚男、张曼。 I DB41/T 1926—2019 高油酸花生四级种子质量标准 1 范围 本标准规定了高油酸花生四级种子质量的术语和定义、质量要求、检验方法与检验规则。 本标准适用于河南省高油酸花生四级种子质量的评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 扦样 GB/T 3543.3 农作物种子检验规程 净度分析 GB/T 3543.4 农作物种子检验规程 发芽试验 GB/T 3543.5 农作物种子检验规程 真实性和品种纯度鉴定 GB/T 3543.6 农作物种子检验规程 水分测定 GB 5009.168 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定 GB 20464 农作物种子标签通则 NY/T 2237 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南 花生 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 高油酸花生 种子脂肪中油酸含量≥75%的花生。 3.2 种子纯度 品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示。 3.3 种子净度 在一定量的种子中，正常种子的重量占总重量（包含正常种子之外的杂质）的百分比。 3.4 四级种子 在种子生产中，以育种家种子为种源，运用重复繁殖技术路线，按世代顺序繁殖的育种家种子、原 原种、原种和大田用种的种子。 3.5 育种家种子 育种家育成的最初种子。具有该品种特异性、一致性和遗传稳定性。用白色标签作标记。 1 DB41/T 1926—2019 3.6 原原种 由育种家种子直接繁殖的种子。具有该品种特异性、一致性和遗传稳定性。用白色标签作标记。 3.7 原种 由原原种直接繁殖的种子。具有该品种特异性、一致性和遗传稳定性。用紫色标签作标记。 3.8 大田用种 由原种繁殖用于大田生产的种子。具有该品种特异性、一致性和遗传稳定性。用蓝色标签作标记。 4 质量要求 高油酸花生种子质量指标应符合表 1 的要求。 表1 高油酸花生种子质量指标 项目 育种家种子 原原种 原种 大田用种 油酸/% ≥ 75.0 75.0 75.0 75.0 纯度/% ≥ 100 100 99.6 99.4 净度/% ≥ 99.5 99.5 99.5 99.3 杂质/% ≤ 0.5 0.5 0.5 0.7 其他作物种子/% ≤ 0 0 0 0 杂草种子/（粒/kg） ≤ 0 0 0 1 有毒 (害)杂草种子/（粒/kg）≤ 0 0 0 0 发芽率/% ≥ 80.0 80.0 80.0 80.0 水分/% ≤ 10.0 10.0 10.0 10.0 5 检测方法 5.1 真实性和品种纯度 5.1.1 表型鉴定 5.1.1.1 田间鉴定 按品种地上部性状的典型性和荚果性状的典型性进行鉴定。鉴定方法按NY/T 2237的规定执行。 5.1.1.2 油酸含量测定 按GB 5009.168的规定执行；油酸含量指标应符合该品种本质特征。 5.1.2 分子标记 采用固定数目的单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）引物，通过与标准样 品比较或与SNP指纹数据比对平台比对的方式，对品种真实性进行验证或身份鉴定。检测方法按附录A 执行。 2 DB41/T 1926—2019 5.2 净度和杂质 按GB/T 3543.3的规定执行。 5.3 发芽试验 按GB/T 3543.4的规定执行。 5.4 水分 按GB/T 3543.6的规定执行。 5.5 其他作物、杂草种子和有毒（害）杂草种子数目 按GB/T 3543.3的规定执行。 6 检验规则 6.1 扦样 按GB/T 3543.2的规定执行。 6.2 质量判定 按GB 20464的规定执行。 3 DB41/T 1926—2019 AA 附 录 A （规范性附录） 花生品种真实性分子标记鉴定方法 A.1 引物合成 利用已遴选的 14 个核心 SNP 引物和 36 个扩展 SNP 引物作为品种真实性验证和身份鉴定的检测引物， 构建已知品种的 SNP 指纹数据比对平台。 根据真实性验证或身份鉴定的要求，采用序贯式方法，选定 SNP 引物。 SNP 引物采用 ULTRPAGE 的方式进行纯化，将 Primer_Allele FAM（36 umol/μ L） 、Primer_Allele HEX （36 umol/μ L） 、Primer_Common（90 umol/μ L）三种引物溶解后按体积比 1:1:1 混匀为 KASP 引物 Mix。 A.2 脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid，DNA）提取 在种子生产基地随机取样，供检样品为叶片或种子，采用混合样品检测（至少含有 30 个个体的材 料） ，先单独提取 DNA，再取等量 DNA 混合。 DNA 提取方法应保证提取的 DNA 数量和质量符合 PCR 扩增的要求，DNA 无降解，溶液的紫外光吸光 度 OD260 与 OD280 的比值宜介于 1.8～2.0。 DNA 提取可选 CTAB 法或试剂盒法。 A.3 PCR扩增 SNP 反应可以在 96 等不同规格孔板进行，体系的总体积可相应采用 10 μ L 或 5 μ L，在板上设无 模板对照。 A.4 SNP基因分型 将 PCR 扩增产物用能检测荧光信号的检测平台 （如可以检测 FAM 和 HEX 波长荧光的酶标仪 FLUOstar Omega 及实时定量 PCR 仪）进行读板，并根据荧光量比值进行 SNP 分型。 A.5 结果计算与表示 统计位点差异记录的结果，计算差异位点数，核实差异位点的引物编号。 检测结果用供检样品和标准样品比较的位点差异数表示，检测结果的容许差距不大于 2 个位点。对 于在容许差距范围内且提出有异议的样品，可以按照 GB/T 3543.5 的规定进行田间小区种植鉴定。 _________________________________ 4