ICS 65.020 B 61 黑 DB23 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 2536—2019 橡胶草组织培养育苗技术规程 2019-12-13 发布 黑龙江省市场监督管理局 2020-01-12 实施 发 布 DB23/T 2536—2019 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省科学院提出。 本标准起草单位：黑龙江省科学院自然与生态研究所。 本标准主要起草人：陈菲、曾祥俊、曲彦婷、李黎、沈光、韩辉、熊燕、张悦、唐焕伟、杨轶华、 李虹、曲线、孙波。 I DB23/T XXXX—XXXX 橡胶草组织培养育苗技术规程 1 范围 本标准规定了橡胶草（Taraxacum kok-saghyz Rodin.）组织培养育苗技术的环境与设备消毒、培 养基制备、外植体诱导、继代增殖、生根培养、炼苗移栽、生产档案。 本标准适用于橡胶草组织培养育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 3 3.1 环境与设备消毒 接种室消毒 接种室消毒按NY/T 2306-2013 中 8.6进行。 3.2 超净工作台消毒 超净工作台消毒按 NY/T 2306-2013 中 8.5、8.6 进行。 3.3 培养室消毒 培养室消毒按NY/T 2306-2013 中 8.7进行。 3.4 接种器具消毒 接种器具按NY/T 2306-2013中8.4进行。 4 4.1 培养基制备 母液配制 培养基母液配制按 LY/T 1882-2010 中 4.1 进行。 4.2 培养基配制 1 DB23/T XXXX—XXXX 4.2.1 培养基配方 培养基配制成分如下： a) 诱导培养基：MS+6-BA 2.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5g/L，pH值5.8； b) 继代增殖培养基：MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5g/L，pH值5.8； c) 生根培养基：1/2MS+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5g/L，pH值5.8。 4.2.2 培养基配制方法 培养基配制方法按LY/T 1882-2010中 4.2.1 进行。 4.3 培养基灭菌 培养基灭菌按LY/T 1882-2010中 4.2.2 进行。 4.4 培养基保存 培养基保存按LY/T 1882-2010中 4.2.3 进行。 5 外植体诱导 5.1 外植体的选择 从生长健壮无病虫害的母株上选取5cm～6cm长的幼嫩叶片作为外植体。 5.2 外植体消毒处理 将外植体置于烧杯中，用洗洁精溶液洗涤，然后用自来水冲2h～4h，在超净工作台上用75%酒精浸 泡消毒30s，倒掉酒精，用无菌水冲洗3次～4次；再用0.1%氯化汞溶液浸泡6min，期间不断摇动，倒净 氯化汞溶液，用无菌水冲洗6次～7次，放在接种盘内用无菌滤纸吸干表面水分。 5.3 外植体接种与诱导培养 将消毒处理后的外植体切成长1cm～2cm，接种在诱导培养基上进行初代诱导培养。 操作时，先将培养瓶的瓶盖取下，再将培养瓶的瓶口倾斜靠近酒精灯火焰，用镊子将外植体接种到 诱导培养基上，将培养瓶瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧后封好瓶口。接种完成后，在培养瓶上标注接种 物名称和日期，培养20d～25d。 6 继代增殖 外植体经诱导培养生成愈伤组织后，分化产生不定芽，将不定芽不断转接到增殖培养基中进行培养， 20d～25d 为 1 代，进行多次继代。 7 生根培养 将继代后的组培苗接种在生根培养基中诱导生根，培养 25d～30d，当组培苗基部长出健壮的不定 根 3 条~5 条，根长为 2cm～3cm 时，即可出瓶移栽。 8 培养条件 培养室白天的温度控制在25±2℃，夜间不低于15℃，相对空气湿度控制在70%～80%，光照强度为 2000 Lux～3000 Lux，光照时间为12 h/d～14h/d。 2 DB23/T XXXX—XXXX 9 炼苗移栽 9.1 炼苗 将培养瓶转移到过渡培养室中，自然光照下炼苗2d～3d，然后打开瓶盖，再炼苗2d～3d，温度控制 在22～25℃。 9.2 移栽 从培养瓶中取出生根的小苗，用清水洗净根部的培养基，清洗培养基时动作要轻，避免伤根，将洗 净的生根苗移栽至装有珍珠岩的穴盘中，每穴1株，移栽后要把苗周围的基质压实，然后浇透水。 9.3 苗期管理 将移栽后的组培苗放到温室中，保证幼苗水分供需平衡，育苗水分管理按照 GB/T 6001 进行。移栽 初期应进行遮阴，5d～7d 后发现幼苗有生长趋势，可以逐渐降低湿度，加强光照。温室环境应保持清 洁，温度控制在 22℃～25℃，空气湿度保持在 70%～80%，光照强度为 2000 Lux～2500 Lux。 10 生产档案 建立橡胶草组织培养育苗技术档案，包括环境和设备消毒、培养基制备、外植体诱导、继代增殖、 生根培养、炼苗移栽等。 3