ICS 65.020 B 62 黑 DB23 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 2539—2019 针叶天蓝绣球组培繁殖技术规程 2019-12-13 发布 黑龙江省市场监督管理局 2020-01-12 实施 发 布 DB23/T 2539—2019 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省科学院提出。 本标准起草单位：黑龙江省科学院自然与生态研究所、五常市桂丹园艺有限公司。 本标准主要起草人：曲彦婷、孟凡娟、马游、唐焕伟、陈菲、李黎、韩辉、熊燕、刘畅、张革燕、 张悦、李虹、张天姝。 I DB23/T 2539—2019 针叶天蓝绣球组培繁殖技术规程 1 范围 本标准规定了针叶天蓝绣球（Phlox subulata L.）组培繁殖的环境与设备消毒、培养基配制、外 植体选择与消毒、外植体接种、继代增殖、壮苗培养、生根培养、培养条件、移栽及生产档案。 本标准适用于针叶天蓝绣球的种苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6001 育苗技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 3 环境与设备消毒 3.1 接种室消毒 接种室消毒按NY/T 2306-2013 中 8.6进行。 3.2 超净工作台消毒 超净工作台消毒按NY/T 2306-2013中 8.5、8.6进行。 3.3 培养室消毒 培养室消毒按NY/T 2306-2013 中 8.7进行。 3.4 接种器具消毒 接种器具按NY/T 2306-2013中8.4进行。 4 培养基配制 4.1 母液配制 培养基母液配制按NY/T 2306-2013 中7.3执行。 4.2 4.2.1 培养基配制 培养基配方 培养基配制成分如下： 1 DB23/T 2539—2019 a) b) c) d) 4.2.2 接种培养基：MS＋NAA0.5 mg/L+6BA1mg/L+蔗糖30g/L＋琼脂粉5g/L，pH值6.0。 继代增殖培养基：MS+ NAA0.5 mg/L+6BA2mg/L+蔗糖30g/L＋琼脂粉5g/L，pH值6.0。 壮苗培养基：MS++蔗糖30g/L＋琼脂粉5g/L，pH值6.0。 生根培养基：1/2MS+IBA1mg/L＋NAA0.5 mg/L +蔗糖30g/L＋琼脂粉5g/L+活性炭3g/L，pH值6.0。 培养基配制方法 培养基配制方法按NY/T 2306-2013中7.4执行。 4.3 培养基灭菌及保存 培养基灭菌及保存方法按 LY/T 1882-2010 中 4.2 进行。 5 外植体选择、消毒与接种 5.1 外植体选择 春季从生长健壮无病虫害的母株上剪当年生的粗壮嫩茎作为外植体，应晴天进行。 5.2 外植体消毒 将外植体置于 500mL 烧杯中，烧杯口套纱网，加 2 滴～4 洗洁精，先用自来水浸泡 8min～10min 后， 再冲洗 30min，倒净水，在超净工作台上用 75%酒精清洗 10s～15s 后取出，浸泡于 0.1%氯化汞溶液中 6min～8min，轻摇，倒掉消毒液后用无菌水冲洗 3 次～5 次，再用无菌滤纸吸干表面的水分备用。 5.3 接种与诱导培养 将消毒后的外植体切成 1cm～2cm 的茎段，每段至少带有 1 个～2 个叶芽，将切好的外植体接种到 诱导培养基中，注明接种物名称和日期，培养 21d～28d，记录诱导情况。 6 继代增殖、壮苗与生根培养 6.1 继代增殖培养 切分诱导分化的不定芽接入继代增殖培养基中，约 8 个/瓶，培养 28d～35d，每个茎段萌发出 5 个～ 8 个不定芽，分割新长出的不定芽，可按需求重复继代。 6.2 壮苗培养 切取继代增殖培养中长 1.0cm 以上的不定芽，转接至壮苗培养基中，约 8 个/瓶，培养 14d～21d。 6.3 生根培养 壮苗培养基中组培苗长到 2.0cm 以上高度时，将小苗转入生根培养基中，约 10 株/瓶，培养 7d～10d， 当小苗基部长出健壮的不定根 3 条以上，大部分苗根长为 0.5cm～2.0cm 时，即可进行移栽。 7 培养条件 无菌培养室白天的温度控制在23±2℃，夜间不低于15℃，相对空气湿度控制在60%～80%，光照强 度为2000Lux～3000Lux，光照时间为12h/d～14h/d，黑暗时间为10h/d～12h/d。 8 移栽 2 DB23/T 2539—2019 8.1 炼苗 将生根培养瓶转移到过渡培养间，半开瓶口1d～2天后，敞开瓶口炼苗2d～3d后可移栽。 8.2 移栽基质的制备 基质选择草炭、珍珠岩和蛭石混合，体积比约为2:2:1，栽植前用0.5%的高锰酸钾溶液浇透消毒24h。 8.3 组培苗移栽 在温室取出生根的小苗，用清水洗净根部培养基，清洗时应避免伤根。将洗净的生根苗移栽至装基 质的128穴盘，移栽后压实小苗周围的基质，浇透水，覆70%遮阳网。 8.4 移栽苗管理 保证温室内幼苗水分供需平衡，育苗水分管理按GB/T 6001执行。移栽5d～7d后，去掉遮阳网，浇 1/2 MS营养液1次，温度22℃～28℃，相对空气湿度60%～80%，温室环境应保持清洁，21d～28d新生根 系长出，将穴盘苗装入营养钵，常规管理即可。 9 生产档案 建立针叶天蓝绣球组织培养繁殖技术档案，包括繁殖培养条件、培养基配制、外植体接种、增殖数 量、种苗驯化移栽及管理等。 3