ICS 65.020.01 B 64 黑 DB23 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 2514—2019 蓝靛果组培微插育苗技术规程 2019-12-13 发布 黑龙江省市场监督管理局 2020-01-12 实施 发布 DB23/T 2514—2019 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省市场监督管理局提出。 本标准起草单位：黑龙江伊蓝生物科技有限公司、伊春市九天生物科技有限公司、伊春市丰林县人 才驿站 本标准主要起草人：韦庆和、史福忠、于海鸥、马 军、安晓莉、杨 柳、刘桂森、郝文鹏、许广明、 李云哲、王春英、刘 龙、张 庆、马学文、刘 佳。 I DB23/T 2514—2019 蓝靛果组培微插育苗技术规程 1 范围 本标准规定了蓝靛果（Lonicera caerulea ）组培微插育苗的术语和定义、培养基制备、外植体选 择与处理、诱导分化与继代增殖增壮、扦插、移植抚育和生产档案。 本标准适用于蓝靛果组培微插育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1276 农药安全使用规范 总则 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 组培微插育苗 组培瓶苗经炼苗，去除培养基，截成1 cm～2 cm长的微小插穗，经激素处理，扦插在配制的培养基 上进行生根的苗木繁殖方法。 4 培养基制备 4.1 培养基 诱导分化培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+琼脂7.0 g/L+蔗糖30 g/L，pH值调至5.8； 继代增殖培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+琼脂7.0 g/L+蔗糖30 g/L，pH值调至5.8； 增壮培养基：MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L+琼脂7.0 g/L+蔗糖30 g/L，pH值调至5.8。 4.2 培养基制备 按 LY/T 1882 执行。 4.3 培养基保存 按LY/T 1882执行。 5 外植体选择与处理 5.1 外植体的选择 1 DB23/T 2514—2019 选择生长健壮、无病虫害的优良母株，春季新芽长至1 cm～2 cm时选用叶芽作外植体，休眠期可水 培芽作外植体，也可在新枝长至半木质化时剪取2 cm～4 cm嫩茎作外植体。 5.2 外植体处理 外植体用洗涤剂作表面清洗，流水冲洗 30 min，放入消毒瓶中，消毒瓶用 75%的酒精棉擦拭后放入 超净工作台，打开装有外植体的消毒瓶，倒入 75 %酒精并摇晃，浸泡消毒 5 s～10 s，倒去酒精，用无 菌水冲洗外植体 3 次～4 次；再用 5%次氯酸钠加几滴吐温 20 或吐温 80 浸泡 10 min～12 min，无菌水 冲洗 4 次～5 次，无菌滤纸吸干外植体表面水分，两端各剪去 2 mm 以上，保持茎段长度 0.5 cm～1.0 cm， 接种至诱导分化培养基中。 6 诱导分化与继代增殖增壮 6.1 培养条件 培养室的温度控制在25 ℃±2 ℃，空气相对湿度控制在70 %～80 %，光照强度为27 μmol•m-2• s-1～36 μmol•m-2•s-1，光照时间为12 h/d～14 h/d。 6.2 诱导分化 将培养瓶的封口膜取下，培养瓶口倾斜在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒。用枪式镊子在酒精灯上灼烧 消毒冷却后，将切割好的外植体放入不定芽分化诱导培养基中，每个培养瓶放2个～3个外植体，盖上封 口膜，标注日期。 6.3 增殖培养 外植体经诱导培养后，单株苗剪段，丛生芽分芽，转接至继代增殖培养基中培养。培养 35 d 后再 重复进行继代增殖培养。 6.4 增壮培养 增殖继代培养中部分丛生芽弱，将其接种到增壮培养基中，培养3周后继续继代增殖培养或瓶外生 根扦插。 7 扦插 7.1 炼苗 将瓶苗移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在18 ℃～25 ℃，每天中午在培养瓶周围喷 洒雾水，封口炼苗1 d～3 d，松口炼苗1 d～2 d，开口炼苗2 h～5 h即可扦插。 7.2 作基质床 在温室内作基质床，床宽110 cm，作床高10 cm，步道40 cm。床面上铺5 cm～7 cm厚腐殖土，上面 再铺3 cm～4 cm筛过的细河沙，床面整平，扦插前5 d用0.5%高锰酸钾溶液消毒。 7.3 扦插 将瓶苗取出，剪去培养基，截成1 cm～2 cm长的插穗，在生根液中速浸捞出，用镊子轻轻夹着插穗 按3 cm×2.5 cm的株行距划沟扦插到床面上，深度为插穗长度的1/2～1/3，不能倒插，插后浇透水，用 多菌灵800倍液喷施消毒。 2 DB23/T 2514—2019 7.4 插后管理 扦插后搭设小拱棚覆膜加盖遮阳网，控制温度15 ℃～28 ℃、湿度在70 %rh～90 %rh、光照2500 LX～ 8000 LX。适当通风、喷水，保持插穗叶面湿润。每7 d喷一次杀菌剂，生根后结合杀菌消毒7 d喷一次 0.1%磷酸二氢钾和硫酸铵肥，逐步撤除遮阳网和小拱棚，降低湿度到60 %rh，增加光照。 8 移植抚育 8.1 移植 当扦插苗长至8 cm以上时可移植到室外培育大苗，春、秋两季均可移植。将扦插苗木按培养要求以 10 cm～20 cm×20 cm～30 cm株行距进行移植培育，移植后距地面5 cm处剪去主茎。 8.2 抚育管理 定期浇水、除草、松土，施肥按NY/T 496执行，防病虫，农药使用符合GB/T 8321和NY/T 1276规定。 8.3 出圃 株高≥30 cm，主枝2个以上，根系发达即可出圃。 9 生产档案 档案内容主要包括：材料来源、外植体类型、培养基配制、植物生长调节剂使用、诱导率、污染率、 增殖系数、生根率、保存率和移栽成活率等。 3