ICS 65.020.30 B 43 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 5107—2019 羊人工授精技术规程 2019 - 11 - 28 发布 河北省市场监督管理局 2019 - 12 - 28 实施 发 布 DB13/T 5107—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由河北北方学院提出。 本标准起草单位：河北北方学院。 本标准主要起草人：王净、穆秀明、张璧珠、段汝和、陈登峰、叶和平、崔宏宇、范志军、李建 立、王玉亮、郭健、陈四海、张振祥、董建红、翟明成。 I DB13/T 5107—2019 羊人工授精技术规程 1 范围 本标准规定了羊人工授精的前期准备、采精、精液品质检查、鲜精稀释、精液保存与运输、发情 鉴定、输精、人工授精器械的洗涤和存放、生产记录与档案管理等技术要求。 本标准适用于羊的繁殖配种。 2 前期准备 2.1 羊的准备 2.1.1 母羊的准备 2.1.1.1 调整母羊群体结构，将体重、年龄和膘情相近母羊分群。 2.1.1.2 按照营养标准进行饲养管理，使母羊膘情达到中上等水平。 2.1.2 公羊的准备 2.1.2.1 要求公羊体质结实，膘情中上等，精力充沛。 2.1.2.2 对初次参加配种的公羊进行调教。 2.1.2.3 配种前一个月开始采精，检查其精液品质，对公羊定期排精。 2.1.2.4 每天驱赶公羊运动 2 h。 2.2 器材与药品的准备 2.2.1 所需器材与药品 参照附录A准备。 2.2.2 器材的消毒 假阴道内胎、玻璃棒、温度计、金属镊子，需用75 %酒精棉球擦试消毒。集精杯、输精器、纱布、 离心管，需常规高压蒸汽灭菌。 3 采精 3.1 安装假阴道 3.1.1 安装内胎 要求假阴道外壳两端光滑，内胎不漏水。使内胎的光面在内，将内胎放入外壳，并使内胎露出外 壳两端的部份等长，然后将内胎翻转套在外壳上，保证内胎平整、无扭曲，用橡皮圈固定两端。 3.1.2 注水 1 DB13/T 5107—2019 通过注水孔向假阴道内、外壁之间注入50℃～55℃温水，使其能在采精时温度保持38℃～42℃。 水量一般为外壳与内胎间容量的1/2～2/3。 3.1.3 涂润滑剂 用消毒好的玻璃棒，取少许灭菌液体甘油或者凡士林，均匀的涂抹在假阴道内胎的前二分之一处。 3.1.4 安装集精杯 将集精杯插入已涂润滑剂的假阴道的对侧端，并在外面套上保护套。 3.1.5 充气 通过注水孔向假阴道内、外壁之间注入空气，使集精杯对侧的假阴道端口呈“Y”字形。 3.2 采精方法 3.2.1 保定台羊 选择体型中等的发情母羊作为台羊，在采精架内进行保定。 3.2.2 卫生清洁 采精前，台羊的外阴、采精公羊的阴茎包皮用湿毛巾擦拭。 3.2.3 激发公羊性欲 当公羊爬跨台羊时，迅速推开公羊，反复2次后再使其爬跨采精。 3.2.4 采集精液 采精人员蹲于台羊右侧，右手持假阴道；当公羊阴茎勃起并爬跨时，左手迅速轻托包皮将阴茎导 入假阴道；公羊向前耸身时即射精，立即竖起假阴道，取下集精杯，送往精液处理室。 3.3 采精频率 1.5岁左右的公羊，每天采精1次，每周采精3 d；2.5岁以上公羊，每天采精1～2次，每周采精3 d～ 5 d。 4 精液品质检查 精液品质检查在室温条件下（20℃～25℃）进行。 4.1 常规检查 4.1.1 肉眼检查 合格的新鲜精液为：射精量一般为0.8 mL～1.5 mL，颜色呈乳白色，肉眼感观“云雾状”明显。 4.1.2 显微镜检查 4.1.2.1 密度 2 DB13/T 5107—2019 用消毒玻璃棒蘸取原精液1滴，滴在洁净的载玻片上，盖好盖玻片，显微镜放大100倍观察。视野 内精子彼此之间空隙小于一个精子的长度，评为“密”；视野内精子彼此之间的空隙约为一个精子的 长度，评为“中”；视野内精子彼此之间的空隙超过一个精子长度，评为“稀”。 4.1.2.2 活率 用消毒玻璃棒蘸取一滴经生理盐水稀释的精液，滴在洁净的载玻片上，盖好盖玻片，显微镜放大 400倍观察。视野中估算直线前进运动精子所占全部精子的百分数，直线前进运动的精子为100 %者评 为1.0，90 %者为0.9，以此类推。 4.1.2.3 指标要求 显微镜检查精子活率不得低于0.7；精子密度在中等以上。 4.2 定期检查 4.2.1 精子计数 用移液器或者红血球吸管吸取3 %NaCl将精液稀释200倍，取其滴加到血球计数板，盖好盖玻片， 放大到400倍检测精子密度。首先数出四角和正中间的五个方格中的精子数，也就是80个小方格中的精 子数。按照“数上不数下，数左不数右”的原则计数。计算精子数：1 mL原精液内的精子数=5个中方 格数的精子数×5×10×1000×稀释倍数。 4.2.2 精子畸形率 加一滴精液到载玻片偏右侧端，盖玻片一端接触精液并以30℃夹角轻轻向左推，制作精液抹片， 浸入无水酒精固定2 min～3 min后风干，浸入红墨水或者蓝墨水染色15 min，蒸馏水冲洗1 min～2 min 后风干，放大到400倍检测，随机观察200个精子计算各类畸形精子的比例。 4.2.3 指标要求 每毫升精液中含精子数应在20亿以上；精子畸形率一般要求不超过14 %。 5 鲜精稀释 5.1 稀释液的选择 可选用处于保质期内的商品稀释液，或无菌脱脂羊奶或牛奶。若无上述稀释液，也可用生理盐水 代替。自配稀释液要求现配现用。 5.2 稀释倍数 根据输精需要和精液品质确定稀释倍数，稀释比例为1：1～1：3。 5.3 稀释方法 稀释液需提前预热，使其温度与精液的温度一致。稀释液沿杯壁缓慢加入到精液中，混合均匀， 防止剧烈震荡。 5.4 活率检查 3 DB13/T 5107—2019 用消毒玻璃棒蘸取一滴经稀释的精液，滴在洁净的载玻片上，盖好盖玻片，显微镜放大400倍观察。 具体检查方法同4.1.2.2。稀释后的精液活率要求达到0.7以上。 6 精液保存与运输 6.1 精液保存 液态稀释精液可进行常温（15℃～25℃）或低温（0℃～5℃）保存。 6.2 精液运输 液态稀释精液运输时，应避光，防剧烈震荡，防污染，防止温度急剧变化。 6.3 注意事项 液态稀释精液远程运输需低温（0℃～5℃）保存，运输时间不宜超过72 h；近程运输的液态稀释 精液常温保存即可，运输时间不超过24 h。 7 发情鉴定 7.1 鉴定时间 每日早、晚各进行一次。 7.2 鉴定方法 采用试情法。将系有试情布的公羊，放入待鉴定的母羊群中。当观察到主动与试情公羊接近并接 受公羊爬跨的母羊，即为发情母羊。 8 输精 8.1 母羊保定 将发情母羊固定在输精架内， 或由助手用两腿夹住母羊头部并且用双手提起母羊后肢将母羊保定。 用温水清洗外阴部，再用生理盐水棉球擦拭。 8.2 阴道输精 先将消毒的开膣器轻插入阴道，缓慢打开；再轻旋开膣器，寻找子宫颈口，将输精器尖端插入子 宫颈口内0.5 cm～1 cm处，注入精液；接着取出输精器，拔出开膣器；然后轻拍母羊臀部，防止精液倒 流；最后将输精器和开膣器用75 %酒精棉球由前向后擦拭消毒，待酒精干燥后，用生理盐水棉球擦拭， 继续为下一只母羊输精。 8.3 阴道炎处理 输精时若发现母羊阴道感染，应先用生理盐水冲洗阴道，再进行输精。输精后阴道内放入青霉素 和链霉素粉各0.1 g左右。 8.4 输精剂量 4 DB13/T 5107—2019 原精液0.05 mL～0.1 mL，稀释精液0.1 mL～0.2 mL。初配母羊可进行阴道输精，输精剂量加倍。绵 羊一次输精剂量的有效精子数为7000万个以上，山羊为5000万个以上。 8.5 输精次数 母羊于发情后12 h～24 h内进行第一次输精，间隔8 h～12 h进行第二次输精，再间隔8 h～12 h进行 第三次输精。 9 人工授精器械的洗涤和存放 9.1 器械的洗涤 人工授精所用器械在每次使用后，需用洗涤剂洗刷干净，再经清水和蒸馏水各冲洗一次。 9.2 器械的存放 保持清洁、干燥，存放于消毒柜内。 10 生产记录与档案管理 10.1 生产记录 做好公羊精液品质检查及利用情况记录（附录B.1），做好母羊配种记录（附录B.2），并及时整 理分析并归档。 10.2 档案管理 生产档案保存年限一般为3年。档案保管做到防水、防潮、防虫蛀、防霉变、防遗失、防火。 5 DB13/T 5107—2019 附 录 A （规范性附录） 羊人工授精所需的主要器材与药品 羊人工授精所需的主要器材与药品见表 A.1。 表 A.1 羊人工授精所需的主要器材与药品 序号 名称 规格 单位 数量 1 显微镜 100 倍 400 倍 台 2 2 假阴道外壳 -- 个 5 3 假阴道内胎 -- 条 10 4 假阴道塞子（带气嘴） -- 个 5 5 集精杯 -- 个 10 6 开膣器 -- 支 10 7 输精器 羊用 支 10 8 移液器 1 mL 10μ L 支 各1 9 消毒柜 -- 个 1 10 医用直头剪刀 -- 把 2 11 恒温箱 -- 台 1 12 高压灭菌消毒器 -- 台 1 冰箱 -- 台 1 恒温水浴锅 -- 个 1 15 搪瓷盘 20 cm×30 cm、40 cm×50 cm 个 各2 16 红血球吸管 -- 支 2 17 血球计数板 -- 块 2 18 注射器 支 各 20 19 纱布 -- 包 2 20 脱脂棉 -- 包 2 21 离心管 5 mL、10 mL 包 各1 22 载玻片 -- 盒 2 23 盖玻片 -- 盒 4 24 温度计 100℃ 支 5 25 玻璃棒 0.2 cm、0.5 cm 根 各 10 26 试情布 30 cm×40 cm 块 10 27 无水酒精 500 mL 瓶 1 28 75 %酒精 500 mL 瓶 10 红、蓝墨水 -- 瓶 各2 液体甘油 -- mL 500 31 白凡士林 -- kg 1 32 3 %氯化钠 -- mL 500 13 14 29 30 6 类别 器材 药品 1 mL 5 mL DB13/T 5107—2019 表 A.1 羊人工授精所需的主要器材与药品（续） 序号 名称 规格 单位 数量 33 生理盐水 500 mL 瓶 20 34 无菌脱脂牛奶 -- mL 250 无菌脱脂羊奶 -- mL