(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221098047 7.5 (22)申请日 2022.08.16 (71)申请人 上海太阳生物技 术有限公司 地址 201108 上海市闵行区金都路3419号 (72)发明人 谢永华　王美龙　郑苗　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 温可睿 (51)Int.Cl. G01N 1/28(2006.01) (54)发明名称 肝素校准品及其制备方法与应用 (57)摘要 本发明涉及生物试剂领域， 尤其涉及肝素校 准品及其制备方法与应用。 本发 明在正常猪血浆 中添加普通肝素或低分子量肝素中的一种、 缓冲 剂及冻干保护剂， 得到肝素校准品， 用于抗Xa测 定试剂的校准。 本发明的肝素校准品对抗Xa试剂 校准后， 即可测试普通肝素的抗Xa活性又可测试 低分子量肝素的抗Xa活性； 本发明的肝素校准品 使用的猪血浆相比人血浆和牛血浆来说来源稳 定广泛， 价格低； 本发明的校准品准确性高、 性能 稳定， 保存时间长， 市售产品稳定性仅有15个月， 而本发明的肝素校准品稳定性可达2年之久， 具 有较广阔的临床应用前 景。 权利要求书1页 说明书7页 附图1页 CN 115356174 A 2022.11.18 CN 115356174 A 1.肝素校准品， 其特 征在于， 其原料包括 肝素、 缓冲剂、 冻干保护剂和血浆： 所述缓冲剂和血浆的体积比为(1～5)： (39 ～45)； 所述缓冲剂包括Tris ‑HCl缓冲液、 Hepes缓冲液和/或磷酸盐缓冲液； 所述冻干保护剂包括山梨醇、 丝氨酸和蔗糖， 其中山梨醇、 丝氨酸和蔗糖的质量比为(5 ～6)： (1～ 2):(3～4)。 2.根据权利要求1所述的肝素 校准品， 其特 征在于： 所述血浆 为含3.2％(w/v)～3.8％(w/v)柠檬酸 三钠的血浆； 所述血浆包括人 血浆、 猪血浆、 牛 血浆或羊血浆。 3.根据权利要求1或2所述的肝素 校准品， 其特 征在于， 所述缓冲液的pH值 为7.0～8.5 。 4.根据权利要求1～3任一项所述的肝素校准品， 其特征在于， 所述血浆与缓冲液的体 积比为(1～3)： (39 ～42)。 5.根据权利 要求1所述的肝素校准品， 其特征在于， 所述冻干保护剂的含量为5％(w/v) ～15％(w/v)。 6.根据权利要求1～5任一项所述的肝素校准品， 其特征在于， 所述肝素包括普通肝素 和/或低分子量 肝素。 7.根据权利要求5所述的肝素校准品， 其特征在于， 所述低分子量肝素的浓度为3个浓 度水平， 所述3个浓度水平的范围分别为： 肝素校准品1： 0.0 0～0.04IU/mL； 肝素校准品2： 0.70～0.90IU/mL； 肝素校准品3： 1.70～ 2.0IU/mL。 8.根据权利要求7所述的肝素校准品， 其特征在于， 所述缓冲液为2M的Tris ‑HCl缓冲 液； 所述缓冲液与血浆的体积比为1:39； 其中冻干保护剂的含量为10％(w/v)， 其中， 山梨 醇、 丝氨酸和蔗糖的质量比为5:2:3 。 9.权利要求1所述肝素校准品的制备方法， 其特征在于， 所述方法包括将肝素、 缓冲剂、 冻干保护剂和血浆混合后冻干 。 10.权利要求1～8任一项所述肝素校准品和/或权利要求9所述制备方法制得的肝素校 准品在校准 肝素或抗Xa测定试剂校准中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115356174 A 2肝素校准品及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物试剂领域， 尤其涉及肝素 校准品及其制备 方法与应用。 背景技术 [0002]凝血因子X是一种依赖维生素K的凝血因子， 处于内源性凝血途径和外源性凝血途 径的共同通路， 经过内源性、 外源性凝血途径激活， 凝血因子X转变为活化的凝血因子X (Xa)。 Xa在Ca2+存在的条件下， 于磷脂膜表面与活化的凝血因子V(Va)形成凝血酶原酶复合 物， 凝血酶原酶复合物激活凝血酶原使之转为具有酶解活性的凝血酶。 凝血酶生成后， 催 化 纤维蛋白原向纤维单体的转变， 最终形成稳定的纤维蛋白凝块， 即凝血 过程完成。 [0003]目前临床 上抗凝治疗使用的抗凝药物多以肝素类抗凝剂为主。 肝素是一种由葡萄 糖胺， L‑艾杜糖醛苷， N ‑乙酰葡萄糖胺和D ‑葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂， 是应用最 广泛的抗凝剂之一。 肝素可增强抗凝血酶(AT ‑III)的生物活性， 同时抑制Xa， 发挥抗凝作 用。 肝素结构中存在抗凝血酶结合序列， 与抗凝血酶结合后导致其构象改变， 从而增加活性 位点的暴露， Xa占据该活性位点形成无凝血活性的抗凝血酶 ‑凝血因子复合物， 因此抑制 Xa， 发挥抗凝作用。 [0004]基于一步发色底物法原理的抗Xa测定试剂盒， 在内源性抗凝血酶存在的条件下， 肝素与抗凝血酶结合， 形成肝素 ‑抗凝血酶复合物， 该复合物抑制Xa， 同时Xa水解其特异性 的发色底物， 释放出发色物质， 通过检测发色底物吸光值可反映出肝素的含量。 基于以上基 础原理， 本发明计划研制一种与抗Xa测 定试剂盒， 发色底物法， 相配套的肝素校准品， 通过 将普通肝素或低分子肝素中的一种与缓冲物质及冻干保护剂一起加入到血浆中， 再将所得 的血浆混合物进行冷冻干燥， 由此获得准确性高、 性能稳定， 保存时间长的肝素校准品， 即 可测试普通肝素的抗Xa活性， 又可测试低分子量肝素的抗Xa活性， 目前国内无这种肝素校 准品， 相关研究公布了一种肝素抗凝检测试剂的校准品及质控品及其制备方法， 其是分别 制备得到普通肝素校准品和低分子量肝素校准品， 然后分别测试相 应种类的肝素， 其稳定 性也仅有15个月， 时间较短。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明要解决的技 术问题在于提供肝素 校准品及其制备 方法与应用。 [0006]本发明提供了肝素 校准品， 其原料包括 肝素、 缓冲剂、 冻干保护剂和血浆： [0007]所述缓冲剂和血浆的体积比为1～5： 39 ～45； [0008]所述缓冲剂包括Tris ‑HCl缓冲液、 Hepes缓冲液和/或磷酸盐缓冲液； 一些实施例 中， 所述缓冲液为2M的Tris ‑HCl缓冲液； 所述 缓冲液与血浆的体积比为1:39， 血浆中Tris终 浓度为50mM， 所述缓冲液的pH值为7.0～8.5； 一些具体实施例中， 所述缓冲液优选pH8.4的 Tris‑HCl缓冲液， 其中Tris在血浆中终浓度为5 0mM。 [0009]本发明所述的肝素 校准品中， 所述冻干保护剂的含量 为5％(w/v)～15％(w/v)。 [0010]一些实施例中， 所述冻干保护剂包括山梨醇、 丝氨酸和蔗糖， 其中山梨醇、 丝氨酸说　明　书 1/7 页 3 CN 115356174 A 3