(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211026444.3 (22)申请日 2022.08.25 (71)申请人 北京安图生物工程有限公司 地址 101399 北京市顺 义区北务 镇民泰路 13号院17号楼、 18号楼(科技创新功能 区) (72)发明人 法扬　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 温可睿 (51)Int.Cl. G01N 33/72(2006.01) G01N 1/28(2006.01) (54)发明名称 糖化血红蛋白校准品及其制备方法与应用 (57)摘要 本发明涉及生物医学领域， 尤其涉及糖化血 红蛋白校准品及其制备方法与应用。 本发明对体 外糖化的血红蛋白起到 保护作用， 克服了糖化血 红蛋白易氧化及糖基化的缺陷， 本发 明提供的葡 萄糖氧化酶会与之前未与血红蛋白反应的葡萄 糖迅速发生反应生成δ ‑葡萄糖酸内酯， δ ‑葡萄 糖酸内酯以非酶促反应自身水解为葡萄糖酸， 此 后血红蛋白可利用的葡萄糖极少， 从而保证校准 品糖化血红蛋白浓度不会升高； 本发 明使用塔格 糖作为赋形剂， 其在冻干过程中不会刺伤蛋白， 而且不会被微生物利用， 使糖化血红蛋白在储存 过程中处于稳定状态， 从而提高了校准品的稳定 性； 因此本发明提供的校准品复溶后稳定性高、 准确性好具有良好的工业 生产和临床应用前 景。 权利要求书1页 说明书18页 附图9页 CN 115236344 A 2022.10.25 CN 115236344 A 1.葡萄糖氧化酶和/或塔 格糖在制备糖化血红蛋白校准品中的应用。 2.糖化血红蛋白校准品， 其特征在于， 所述糖化血红蛋白校准品由以下组分制得： 血红 蛋白、 糖基化反应液、 透析 液和血红蛋白稀释液； 所述糖基化反应液包括水、 氯化钠和葡萄糖； 所述透析 液包括磷酸盐缓冲液、 氯化钠和叠氮化钠； 所述血红蛋白稀释液包括甘氨酸缓冲液、 氯化钠、 二硫苏糖醇、 乙二胺四乙酸二钠、 塔 格糖、 叠氮化钠和葡萄糖氧化酶。 3.根据权利要求2所述的糖化血红蛋白校准品， 其特 征在于， 所述血红蛋白糖 基化反应液包括： 水、 6g/L～ 9g/L氯化钠和5 0mM～200mM葡萄糖； 所述透析液包括： 20mM～200mM磷酸盐缓冲液、 6～9g/L氯化钠和0.1wt％～5wt％叠氮 化钠； 所述血红蛋白稀释液包括： 20mM～200mM甘氨酸缓冲液、 6～9g/L氯化钠、 20mM～200mM 二硫苏糖 醇、 0.1mM～10mM乙二胺四乙酸二钠、 2 0mM～200mM塔格糖、 0.1％～5％叠氮化钠和 5％～15％葡萄糖氧化酶。 4.制备权利要求2或3所述的糖化血红蛋白校准品的方法， 其特 征在于， 包括： 步骤1： 将糖基化反应液与血红蛋白混合， 经糖基化反应制得含有糖化血红蛋白的溶 液， 离心除去沉淀， 留取 上清液A； 步骤2： 将所述上清液A经透析去除葡萄糖， 离心取 上清液B； 步骤3： 将所述上清液B用血红蛋白稀释液稀释后经冻干、 复溶制得所述糖化血红蛋白 校准品。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述步骤1中的血红蛋白浓度为每分升反 应液中血红蛋白含量 为1～40克。 6.根据权利 要求4或5所述的方法， 其特征在于， 所述步骤1中糖基化的温度为15℃～45 ℃， 时间为1～10天。 7.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述步骤2中透析包括使用透析液； 所述透 析液和上清液的体积比为10 00:1。 8.根据权利要求 4所述的方法， 其特 征在于： 步骤3中所述冻干包括低温预冻和冷冻干燥的步骤： 所述低温预冻条件 包括： 于‑50℃至‑90℃， 预冻3小时以上将溶 液冷冻成型； 所述冷冻干燥包括： 第一次干燥阶段的升温速度采用3℃～10℃/每小时， 持续20～35 小时； 第二次干燥阶段的升温速度采用20℃～ 25℃/每小时， 持续5～10小时。 9.根据权利要求4～8任一项所述的方法， 其特征在于， 所述血红蛋白稀释液稀释的浓 度包括4.8％、 6.8％、 8.8％、 10.8％和13.8％。 10.校准糖化血红蛋白的检测仪器或程序的方法， 其特征在于， 包括使用权利要求2或3 所述的糖化血 红蛋白校准品和/或使用权利要求4～8任一项 所述的方法制得的糖化血 红蛋 白校准品对诊断程序和/或仪器进行 标准化或校准。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115236344 A 2糖化血红蛋白校准品及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学 领域， 尤其涉及糖化血红蛋白校准品及其制备 方法与应用。 背景技术 [0002]糖化蛋白质中， 例如， 血液中的糖化血红蛋白(HblAc)， 由于反映了生物中血糖值 的过去的情况， 因此被作为糖尿病诊断和治疗等的重要指标。 [0003]糖化血红蛋白(HblAc)是血红蛋白的一种形式， 其被测量主要用以鉴定一段时间 内患者的液体测试样品(例如， 通过实例的方式， 患者的全血样品)中存在的平均葡萄糖浓 度。 糖化血红蛋白通过由血红蛋白暴露于血浆葡萄糖而产生的非酶促机制形成。 随着葡萄 糖的平均量 随时间增加， 糖化血红蛋白的百分比也增加。 这种关系允许糖化血红蛋白充当 在血红蛋白样本收集前(通常)两至三个月的时段内， 患者的平均血液葡萄糖水平的标志 物。 对于没有糖尿病的个体， 糖化血红蛋白的正常范围小于总血红蛋白计数的约5.6％。 大 于总血红蛋白水平计数的5.6％和小于总血红蛋白计数的6.4％的糖化血红蛋白水平表明 糖尿病风险增加， 而大于总血红蛋白计数的约6.4％的糖化血红蛋白水平表明糖尿病风险 增加， 而大于总血 红蛋白计数的6.4％的糖化血 红蛋白水平表明存在糖尿病。 由于由糖尿病 的存在引起的并发症的严重程度， 临床上期望将患有这种疾病的患者中的糖化血 红蛋白水 平管控至小于总血 红蛋白计数的约7％。 与空腹血浆葡萄糖水平或口服葡萄糖超负载相比， 使用糖化血 红蛋白作为糖尿病和前驱糖尿病的诊断标准提供了几个优点， 包括： (i)更好的 总体血糖暴露指数； (ii)增加结构稳定性； 和(iii)由例如膳食状态和 /或急性压力引起的 变异性较小。 [0004]糖化血红蛋白是一种蛋白分子， 其中血红蛋白的β ‑亚基的N‑末端缬氨酸残基已被 血液葡萄糖修饰。 校准物是具有已知浓度的标准或参考材料， 其用于标准化或校准诊断程 序和/或仪器。 使用对照材 料来确保诊断测定程序和/或仪器适当地 运行。 [0005]校准物和/或校准材料通常以预定义的时间间隔运行， 并且当诊断测定仪器中存 在变化和/或改变时， 诸如在仪器服务期间， 当试剂批次变化时， 或者每当从诊断测定获得 的结果看起来有问题和/或超出临床范围时。 通过分析校准物和/或校准材料且然后 将从测 试样品获得的观察值与所述校准品和/或校准材料的已知值进 行比较， 可以监测和/或计算 诊断测定鉴定目标分析物的性能。 已知值由校准物和/或校准材料的可接受值的范围和/或 上限和/或下限代表。 当从进 行至少一种诊断测定产生的， 从患者的液体测试样品获得的值 落在控制限值内时， 使用者可以确信从分析方法和/或诊断测定获得 的结果正确 地发挥功 能。 然而， 当观察到的结果落在控制限值外时， 应当提醒使用者获得的分析结果可能不准 确。 在制备校准物、 校准材料和对照时， 此类校准物、 校准材料和对照在组成上应当尽可能 接近于所测定的样本， 因为它们用于监测诊断程序和/或仪器的可靠性并使不正确测试结 果的报告最少。 [0006]目前市售的校准品中， 几乎都忽 略了对于体外糖化的血红蛋白的保护作用， 而由 于糖化血 红蛋白存在会导致易氧化及进一步糖基化的缺陷， 市场上现有的校准品复溶后稳说　明　书 1/18 页 3 CN 115236344 A 3