(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211129714.3 (22)申请日 2022.09.16 (71)申请人 黔东南苗族侗族自治州民族医药研 究院(黔东南苗族侗族自治州苗医 苗药研究院) 地址 556000 贵州省黔 东南苗族侗族自治 州凯里市金井路6号 (72)发明人 郭伟伟　王进喜　李乐琛　龙冬艳　 (74)专利代理 机构 北京和联顺知识产权代理有 限公司 1 1621 专利代理师 王欢 (51)Int.Cl. G01N 21/31(2006.01) G01N 21/75(2006.01) G01N 1/28(2006.01)G01N 1/38(2006.01) (54)发明名称 基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究 方法 (57)摘要 本发明公开了基于睡莲根茎提取物的药物 抗氧化性研究方法， 包括以下步骤： 步骤1： DPPH 自由基清除率的评价， 具体包括以下步骤： S1.1， 药物的配置； S1.2， 药物的检测， 对DPPH自由基清 除能力进行检测； 步骤2： 总抗氧化能力(T ‑AOC) 评价， 具体包括以下步骤： S2.1， 药物的配置， 包 括乙醇提取物水部位、 乙醇提取物乙酸乙酯部位 和乙醇提取物正丁醇部位药物 的配置； S2.2， 药 物的检测。 本发明采取检测方法稳定， 具有测定 结果可靠、 检测数据重复性较高等优点， 测定的 结果能较好地反映睡莲根茎提取物的抗氧化和 清除自由基的生物活性， 并且在对睡莲根茎提取 物的生物制品的活性跟踪 方面具有广泛用途， 应 用前景广阔。 权利要求书2页 说明书7页 CN 115524299 A 2022.12.27 CN 115524299 A 1.基于睡莲 根茎提取物的药物抗氧化 性研究方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤1： DPPH自由基清除率的评价， 具体包括以下步骤： S1.1， 药物的配置， 包括乙醇提取物水部位、 乙醇提取物乙酸乙酯部位和乙醇提取物正 丁醇部位药物的配置； S1.2， 药物的检测， 对D PPH自由基清除能力进行检测， 具体包括以下步骤： 1)待测样品溶液准备： 将待测的药物样品配成10、 25、 50、 75、 100、 125μg/mL的样品溶 液， 用分析 纯级的甲醇将将DPPH溶解成0.1mM的D PPH自由基溶 液； 2)六个离心管分别标号， 加入等体积470 μl的DPPH自由基溶液， 然后分别依次加入上述 不同浓度的药物溶液， 室温下反应5min后于517nm处测定其吸光度， 其值分别为空白对照A0 和样品A1； 3)计算清除羟自由基活性： 按下式计算D PPH自由基清除率； 其中DPPH自由基清除率(％)＝(1 ‑(A测定‑A对照)/A空白)*10 0％； 步骤2： 总抗氧化能力(T ‑AOC)评价， 具体包括以下步骤： S2.1， 药物的配置， 包括乙醇提取物水部位、 乙醇提取物乙酸乙酯部位和乙醇提取物正 丁醇部位药物的配置； S2.2， 药物的检测， 采用ABTS法对药物进行加样检测， 具体包括以下步骤： 1)样品检测： ①将10mM Trolox标准溶液稀释成0、 0.05、 0.1、 0.2、 0.4、 0.6、 0.8和1.0mM； 用双蒸水把 待测药物配制成1mg/mL溶 液； ②取200 μl ABTS工作液(ABTS与氧化剂K2S2O8按7mM： 28mM终浓度配制)， 空白对照为10 μ l双蒸水或PBS， 标准曲线检测分别加入10 μl各个浓度的Trolox 标准溶液， 样品检测加入10 μ l药物溶液， 轻轻混匀， 室温孵 育2‑6分钟后测定A73 5； ③根据测定的空白对照和标准溶液的A735值， 绘制出横坐标为溶液浓度、 纵坐标为 A735值的标准曲线， 根据标准曲线和样品的A735值计算样品与Tr olox标准溶液的等摩尔浓 度， 进而用下述方法计算出样品的总抗氧化活性； 2)计算样品总的抗氧化活性： 总抗氧化活性的表示方式： 在采用Trolox作为标准品进 行抗氧化能力检测时， 样品的抗氧化能力用Trolox ‑Equivalent  Antioxidant  Capacity (Trolox等效的抗氧化能力， TEAC)来表示， 计算公式为TEAC＝Trolox等效摩尔浓度/样品浓 度(mol/g)， TEAC值即为总的抗氧化活性。 2.根据权利要求1所述的基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究方法， 其特征在于， 所述S1.1中乙醇提取物水部位药物的配置包括以下步骤： 药物呈浸膏状， 直接称取浸膏 17.4㎎， 加2ml 80％甲醇70℃超声溶解30min， 11000r/min， 4℃， 离心10min， 取上清液作为 母液， 梯度稀释测定 。 3.根据权利要求1所述的基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究方法， 其特征在于， 所述S1.1中乙醇提取物乙酸乙酯部位药物的配置包括以下步骤： 将药物研磨粉碎， 称取粉 末15.3㎎， 加2ml 80％甲醇70℃超声溶解30min， 11000r/min， 4℃， 离心10min， 取上清液作 为母液， 梯度稀释测定 。 4.根据权利要求1所述的基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究方法， 其特征在于， 所述S1.1中乙醇提取物正丁醇部位药物的配置包括以下步骤： 将药物研磨粉碎， 称取粉末权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115524299 A 216.1㎎， 加2ml 80％甲醇70℃超声溶解30min， 11000r/min， 4℃， 离心10min， 取上清液作为 母液， 梯度稀释测定 。 5.根据权利要求1所述的基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究方法， 其特征在于， 所述S1.2中采用南京建成试剂盒检测(货号： A15 3‑1‑1)， 按照试剂盒操作方法加样检测。 6.根据权利要求1所述的基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究方法， 其特征在于， 所述S2.1中乙醇提取物水部位药物的配置包括以下步骤： 药物呈浸膏状， 直接称取浸膏 32.7㎎， 加三蒸水超声溶解30min， 11000r/min， 4℃， 离心10min， 取上清液作为母液， 梯度稀 释测定。 7.根据权利要求1所述的基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究方法， 其特征在于， 所述S2.1中乙醇提取物 乙酸乙酯部位药物的配置： 将药物研磨粉碎， 称取粉末19.2 ㎎， 加 2ml三蒸水超声溶解30min， 11000r/min， 4℃， 离心10min， 取上清液作为母液， 梯度稀释测 定。 8.根据权利要求1所述的基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究方法， 其特征在于， 所述S2.1中乙醇提取物正丁醇部位药物的配置： 将药物研磨粉碎， 称取粉末17.5 ㎎， 加2ml 三蒸水超声溶解3 0min， 11000r/min， 4℃， 离心10mi n， 取上清液作为母液， 梯度稀释测定 。 9.根据权利要求1所述的基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究方法， 其特征在于， 所述S2.2中采用南京建成试剂盒检测(货号： A0 5‑2‑1)， 按照试剂盒操作方法加样检测。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115524299 A 3