ICS 11.220 B 41 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3406—2019 鸭场鸭病毒性肝炎防控技术规程 Technical regulations on prevention and control of duck viral hepatitis in duck farm 文稿版次选择 2019 - 11 - 04 发布 安徽省市场监督管理局 2019 - 12 - 04 实施 发 布 DB34/T 3406—2019 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安徽省动物疫病预防与控制中心、霍邱县动 物卫生监督所、安徽农业大学动物科技学院、广德县畜牧兽医水产局、合肥市动物疫病预防与控制中心、 含山县畜牧局、宿松县春润食品有限公司、怀宁县平山镇农业站。 本标准主要起草人：潘孝成、赵瑞宏、沈学怀、洪功飞、王杨龙、涂健、张丹俊、戴银、胡晓苗、 侯宏艳、周学利、陈曦、陈福军、钱昌银、胡业和、冯江华、程志清。 I DB34/T 3406—2019 鸭场鸭病毒性肝炎防控技术规程 1 范围 本标准规定了鸭场鸭病毒性肝炎的诊断、疫情报告、预防和控制措施。 本标准适用于鸭场鸭病毒性肝炎的预防和控制。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 36195 畜禽粪便无害化处理技术规范 NY/T 554 鸭病毒性肝炎诊断技术 病死及病害动物无害化处理技术规范 农医发〔2017〕25号 3 诊断 3.1 流行病学 3.1.1 鸭病毒性肝炎（duck viral hepatitis，DVH）是由鸭肝炎病毒（duck hepatitis virus，DHV） 引起的高致病性、急性传染病，DHV 有 3 个血清型，分别引起 I 型、II 型和 III 型 DVH，且三个血 清型对应的病毒之间没有抗原相关性。 3.1.2 临床致病的主要是 DHV-I 型和 DHV-III 型，二者的临床症状非常相似，仅凭剖检病变无法区 分，该病主要发生于 1～3 周龄鸭，10 日龄以内雏鸭的死亡率可达 95％，4 周龄～5 周龄雏鸭发病率 和病死率均较低，中成年鸭一般不发病。 3.2 临床症状 发病初期病鸭精神委顿，食欲减退或废绝，眼半闭呈昏睡状，以头触地，12～24 h 后出现神经症 状，运动失调，身体倒向一侧，两脚痉挛，死前头向背部扭曲，呈角弓反张状的“背脖”姿势，两腿伸 直向后张开呈特殊姿势。最急性病鸭常未见任何异常，而突然抽搐痉挛死亡。 3.3 病理变化 病死鸭肝脏显著肿大，出血，脆弱，黄褐或暗红色，表面有斑点状出血；胆囊肿胀呈长卵圆形，内 充满胆汁，胆汁呈褐色、淡茶色或淡绿色；脾有时肿大呈斑驳状；肾脏肿大，淤血，尿酸盐沉积，其他 脏器无明显眼观变化。 3.4 实验室诊断 3.4.1 雏鸭保护实验 应按 NY/T 554 的规定进行。 1 DB34/T 3406—2019 3.4.2 鸭(鸡)胚中和试验 应按 NY/T 554 的规定进行。 3.4.3 病原 PCR 鉴定 取病鸭病变肝组织、接种疑似病料的鸭胚尿囊液或细胞培养物，经处理后为模板，设计三针对 DHV-I 型、DHV-II 型和 DHV-III 的型特异性引物，用多重 RT-PCR 方法对 3 种亚型的鸭肝炎病毒核酸进行 扩增。 见附录A。 3.5 结果判定 3.5.1 疑似判定 符合 3.1、3.2 和 3.3，判定为疑似鸭病毒性肝炎。 3.5.2 确诊判定 符合 3.1、3.2 和 3.3，且符合 3.4.1、3.4.2 或 3.4.3 时，判定被检鸭群发生鸭病毒性肝炎。 4 疫情报告 任何单位和个人发现患有本病或疑似本病的鸭，都应当立即向兽医主管部门、动物卫生监督机构或 者动物疫病预防控制机构报告。 5 预防和控制 5.1 饲养管理 对雏鸭采取严格的隔离饲养，供给适量的维生素和矿物质。严格执行清洁和消毒程序，饲养用具要 定期清洗、消毒，育雏室门前设置消毒池，严禁场外人员和车辆等不经消毒进场。 5.2 引种 异地引入种鸭和种蛋时，应取得原产地动物防疫监督机构的检疫合格证明，到达引入地后，种鸭和 种蛋孵化的雏鸭必须隔离饲养 15 天以上， 确认健康无疫后，方可混群饲养。 5.3 疫苗免疫 根据当地流行病史，使用经国务院兽医主管部门批准的鸭病毒肝炎疫苗，按疫苗说明书要求进行免 疫。 5.4 疫情处理 一旦发生本病，立即限制鸭群移动，扑杀发病鸭及同群鸭，并对扑杀鸭和病死鸭只按照农医发〔2017〕 25 号进行无害化处理；对粪便及其它可能被污染的物品，按 GB/T 36195 的规定进行无害化处理；对 处理疫情的全过程必须做好完整的详细记录，以备检查。 2 DB34/T 3406—2019 AA 附 录 A （规范性附录） 鸭病毒性肝炎的 RT-PCR 检测 A.1 引物 P1（5’-3’）：GGTGATTCTAACCAGTTGGGG；P2（5’-3’）：TTCAATTTCCAGATTGAGTTCAAA； P3（5’-3’）：ATGGCCCAGAGCGGTGAAAA； P4（5’-3’）：GCCAGGTGTCAACAATCATGC P5（5’-3’）：TTTTGATGCGAGTTGGTA； P6（5’-3’）：TGTGAGTGAATAGGGTGTT A.2 RNA 提取及 cDNA 合成 取疑似病例鸭病变肝组织、接种疑似 DHV 感染病料的鸭胚尿囊液或细胞培养液，按照市售 RNA 提 取试剂盒操作说明书提取 RNA，并按市售 cDNA 合成试剂盒操作说明书反转录合成  cDNA，-20℃保存 备用。 A.3 PCR 的体系及条件 反应体系（50 µL）：10×PCR buffer (含 MgCl2) 5µL，dNTPs( 2.5 mmol/L)4.0 µL， Taq DNA 聚 合酶( 5U /µL) 0.5 µL，引物 P1、P2、P3、P4、P5、P6 各 0.5 µL（25 pmol/µL），模板 3 µL（制 备并在 -20℃保存备用的模板），ddH2O 34.5 µL。 反应条件：94℃预变性 5 min，94℃变性 1 min，55℃退火 50 s，72℃延伸 2 min，共 35 个循 环，最后 72℃ 10 min。 A.4 结果判定 PCR 产物经 1％的琼脂糖凝胶电泳，样品的 PCR 产物出现 720 bp、890 bp 或 950 bp 的条带， 判定为 DHV 的 I、II 或 III 型核检测阳性；而无相关条带出现的判为 DHV 核酸检测阴性。 _________________________________ 3