ICS 65.020.20 B 05 黑 DB23 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 2605—2020 化学诱导玉米单倍体技术规程 2020-01-23 发布 黑龙江省市场监督管理局 2020-02-22 实施 发 布 DB23/T 2605-2020 前言 本标准依据GB/T 1.1-2009编写规则起草。 本标准由黑龙江省农业农村厅提出。 本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：黑龙江省农业科学院耕作栽培研究所、黑龙江荣玉农业科技有限公司。 本标准主要起草人：宫秀杰、来永才、钱春荣、于洋、马宝新、马延华、李梁、郝玉波、李昕、王俊强、 王秋菊、姜辉、何长安、姜宇博、吕国依、葛选良、杨忠良、马军韬、赵杨、王阳、童淑媛、杜振宇、 孙丹、侯国强、孟凡迪。 I DB23/T 2605-2020 化学诱导玉米单倍体技术规程 1 范围 本标准规定了化学诱导玉米单倍体技术的术语和定义、材料和备品、诱导处理、诱导后代种植和田 间调查、诱导率统计及注意事项。 本标准适用于化学诱导玉米单倍体技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB23/T 017 玉米生产技术规程 DB62/T 1060 农作物种子生产技术规程玉米自交系 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 Pa1 代 化学诱导孤雌生殖获得的籽粒及其生长植株（不包括后代籽粒）。 3.2 Pa2 代 Pa1经自交结实后的籽粒及生长植株（不包含后代籽粒）。 4 材料和备品 4.1 实验材料和备品准备 500ml烧杯、玻璃棒、100ml容量瓶、25ml量筒、封口瓶、废液缸、试剂匙、移液管、0.001g天平、 猴头喷雾器、蒸馏水、无水乙醇（EA）。 剪刀、胶皮手套、一次性口罩、眼罩、白大褂、硫酸纸、小硫酸纸袋、大硫酸纸袋大头针、标签、 记号笔、棉花、镊子、网袋。 4.2 诱导材料准备 4.2.1 诱导材料选择 符合育种目标的玉米优良杂合种质或遗传背景广泛的群体材料。 4.2.2 化学试剂 诱导试剂包括：二甲基亚砜 (DMSO) 、马来酰肼 (MH) 、秋水仙碱 (Col) 、甲醇（MT）。 1 DB23/T 2605-2020 配制方法：取70mgMH加入烧杯，再加入70mlMT，充分搅拌。待MH完全溶解后，加入0.1mlDMSO、 1.0gCol和500ml蒸馏水，搅拌，转移入1000ml容量瓶中，定容至1000ml。放置安全处待用。 4.2.3 诱导材料种植及田间管理 选择地势平坦、肥水一致、排灌方便地块，每份被诱导材料种植不少于100株。田间管理参照DB23/T 017执行。 5 诱导处理 5.1 诱导时期和诱导方法 5.1.1 诱导时期 诱导材料雌穗吐丝3cm～5cm时。 5.1.2 诱导方法 诱导材料雌穗吐丝前，用硫酸纸袋将雌穗罩上，去除雌穗。诱导处理时间选择在清晨4:00-7:30，操 作人员须用75%乙醇将手和剪刀消毒，用剪刀将被诱导材料雌穗顶端剪平，然后用手再修出一个凹槽， 用猴头喷雾器喷施化学药剂，每穗喷施化学药剂2ml，喷施后迅速罩上硫酸纸袋，然后再罩上一个大硫 酸纸袋，用大头针固定，挂标签，标记喷施药剂日期。间隔3天后再喷施一次，喷施方法同上。记录化 学药剂处理的果穗数量。 5.2 诱导材料的收获 籽粒成熟及时收获，单穗分装编号，待干燥后，脱粒。记录每个果穗雌穗小花数和结实数。 6 诱导后代种植和田间调查 6.1 Pa1 种植和田间调查 6.1.1 Pa1 种植 选择地势平坦、肥水均一、病虫害发生低、排灌方便地块种植。收获的Pa1种子全部播种，人工单 粒播种，播深3cm～5cm，播后镇压，单株插牌标记。 6.1.2 Pa1 田间管理 采用人工除草，禁止使用化学药剂除草。其它田间管理方法参照DB23/T 017执行。 6.1.3 Pa1 田间调查 6.1.3.1 Pa1 苗期调查 调查未出苗、白化苗和早夭幼苗数量。 6.1.3.2 Pa1 花期调查 调查雄穗育性、雌穗育性和雌雄开花间隔时间。 6.1.4 Pa1 自交授粉 2 DB23/T 2605-2020 雌穗吐丝前用硫酸纸袋将雌穗罩上，对雌雄穗外观正常、花期相遇的植株进行自交授粉。授粉方法 参照DB62/T 1060执行。 6.1.5 Pa1 收获 单穗收获并编号。 6.2 Pa2 种植及田间调查 6.2.1 Pa2 种植 按穗行种植。穗行插牌标记，种植方式同6.1.1。 6.2.2 Pa2 田间管理 田间管理方法参照DB23/T 017执行。 6.2.3 Pa2 田间调查 6.2.3.1 Pa2 苗期调查 调查幼苗色、茎色泽及叶色，进行一致性调查。 6.2.3.2 Pa2 花期调查 调查株型、雄穗分枝、雌穗花丝颜色、株高、穗位、抽穗期、吐丝期。 6.2.4 Pa2 自交授粉 田间所有植株均进行自交授粉，授粉方法参照DB62/T 1060执行。 6.2.5 Pa2 收获 记录成熟期，同一穗行植株表现整齐一致，所有性状无分离，即认为是纯合二倍体。同一穗行性状 有分离的，则淘汰。按穗行收获，并编号。 7 诱导率统计 式中： M1为诱导材料结实率； Gi为Pa1结实粒数； Ei为处理雌穗小花数； 式中： M2为诱导材料诱导率； Ri为Pa2纯合穗行数； Ei为处理雌穗小花数； 8 拘拘 拘拘 注意事项 3 DB23/T 2605-2020 本技术规程中化学试剂DMSO和Col具有一定的毒性作用，在配制溶液和使用化学试剂的过程中， 必须带胶皮手套，带一次性口罩，穿白大褂，并将药品放置安全地方。如不慎将DMSO沾到皮肤上后， 迅速用大量的水以及稀氨水清洗。 4