ICS 11.020 C 62 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB 32/T 3762.6—2020 新型冠状病毒检测技术规范 第 6 部分：血清 IgM 和 IgG 抗体胶体金免疫 层析检测程序 Technical specifications for SARS-CoV-2 detection Part 6: Colloidal gold immunochromatograohic assay test procedure for serum IgM and IgG 2020 - 03 - 02 发布 江苏省市场监督管理局 2020 - 03 - 03 实施 发 布 DB32/T 3762.6—2020 前 言 DB32/T 3762《新型冠状病毒检测技术规范》目前分为以下部分： ——第1部分：生物样本采集、运输和保存； ——第2部分：病毒分离与鉴定； ——第3部分：核酸荧光PCR检测程序； ——第4部分：重组酶介导等温扩增程序； ——第5部分：血清IgM和IgG抗体酶联免疫吸附检测程序； ——第6部分：血清IgM和IgG抗体胶体金免疫层析检测程序； ——第7部分：空气样本检测与评估； ——第8部分：物体表面检测与评估； ——第9部分：医务人员职业暴露检测与评估。 本部分为DB32/T 3762 的第6部分。 本部分按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本部分由江苏省卫生健康委员会提出。 本部分由江苏省卫生标准化技术委员会归口。 本部分主要起草单位：江苏省疾病预防控制中心、南京医科大学、苏州第五人民医院、苏州大学附 二院、昆山市疾病预防控制中心。 本部分主要起草人：黄超、朱宝立、温恬、吴斌、程军平、徐佳南、钱志远、罗晓明、沈欢喜。 I DB32/T 3762.6—2020 新型冠状病毒检测技术规范 第 6 部分：血清 IgM 和 IgG 抗体胶体金免疫层析检测程序 1 范围 本部分规定了新型冠状病毒 IgM 和 IgG 抗体的胶体金免疫层析检测的环境与设施、设备与耗材、 试剂与材料、血清样本采集、胶体金免疫层析检测步骤和结果判定。 本部分适用于新型冠状病毒肺炎流行期间被检测者血清中的 IgM 和 IgG 抗体的胶体金免疫层析检 测方法。其它呼吸道病毒血清样本中的 IgM 和 IgG 抗体检测程序可参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 Doc9284-AN/905 危险品航空安全运输技术细则 DB32/T 3762.1-2020新型冠状病毒检测技术规范 第1部分：生物样本采集、运输和保存 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 胶体金 colloidal gold nanoparticles 由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小 的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。 3.2 免疫层析法 immunochromatography 将特异的抗原或抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样本（如 血清）后，由于毛细管作用，样本将沿着该膜向前移动，当移动至特定区域时，样本中相应的抗体或抗 原即与该区域的对应抗原或抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的 颜色，从而实现特异性的免疫诊断。 4 环境与设施 在BSL-2级实验室内进行实验。 5 设备与耗材 1 DB32/T 3762.6—2020 5.1 设备：生物安全柜、洗板机、酶标仪（含有 450nm 波长滤光片）、高压锅、生物安全运输箱、水 浴锅 5.2 耗材：个人防护装备：N95 及以上防护口罩、护目镜、一次性防护面罩、医用无纺布帽、连体防 护服、一次性手术衣、乳胶手套、 防水靴套、真空釆血管、无菌螺旋口塑料管。 6 试剂与材料 新型冠状病毒人IgM抗体胶体金检测试剂盒、新型冠状病毒人IgG抗体胶体金检测试剂盒。 7 样本采集 用真空负压采血管采集血液样本5mL，室温静置30分钟，1500rpm～2000rpm离心10分钟，收集血 清于无菌螺口塑料管中。 8 样本运输 按照DB32/T 3762.1-2020中6.1和6.2的要求。 9 胶体金免疫层析检测步骤 9.1 将待测样本及所需试剂从储存条件下取出，平衡至室温。融化后，在测试前将样本充分混匀。 9.2 准备检测时，从撕口处打开铝箔袋，将检测卡取出，平放于生安柜台面上。 9.3 在检测卡上标注样本号。 9.4 用移液枪或者一次性滴管吸取待测血清样本 20μL 于检测卡上样本孔内，立即在样本孔内滴加 2～ 3 滴（约 70μL～100μL）样本稀释液，并确保操作过程中没有气泡产生。 9.5 10 分钟后判读结果。 10 结果判定 10.1 阴性结果 仅出现质控线C，检测线G和M都不显色，说明没有检测到新型冠状病毒抗体，结果为阴性。 10.2 阳性结果 10.2.1 质控线 C 和检测线 M 都出现，说明检测到新型冠状病毒 IgM 抗体，结果为 IgM 抗体阳性。 10.2.2 质控线 C 和检测线 G 都出现，说明检测到新型冠状病毒 IgG 抗体，结果为 IgG 抗体阳性。 10.2.3 质控线 C、检测线 M 和检测线 G 都出现，说明检测到新型冠状病毒 IgM 和 IgG 抗体，结果为 IgM 和 IgG 抗体阳性。 10.3 无效结果 质控线Ｃ未出现，无论检测线是否出现，均为无效结果。 _________________________________ 2