ICS 65.020 B 16 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 3192—2020 西瓜细菌性果斑病诊断及防治技术规程 Code of practice for diagnosis and integerated control bacterial fruit blotch disease of watermelon 2020 - 11 - 23 发布 吉林省市场监督管理厅 2020 - 12 - 30 实施 发 布 DB22/T 3192—2020 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：吉林农业大学、中国农业科学院植物保护研究所、大安市农业技术推广中心、双 辽县园艺特产局、长岭县园艺特产站。 本文件主要起草人：白庆荣、杨玉文、赵廷昌、王雪、高洁、杨丽娜、李红艳、付国、许景光、陈 悦、孙东晗、孙于淼、吴佳鸿、常哈拿。 I DB22/T 3192—2020 西瓜细菌性果斑病诊断及防治技术规程 1 范围 本文件规定了西瓜细菌性果斑病的症状观察、田间快速检测、病原菌分离培养检测、PCR检测及病 害综合防治。 本文件适用于西瓜噬酸菌引起的西瓜细菌性果斑病的诊断及防治。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 1276 农药安全使用规范 总则 NY/T 2919-2016 瓜类果斑病防控技术规程 3 术语及定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 西瓜细菌性果斑病 bacterial fruit blotch of watermelon 由西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli）侵染西瓜引起的一种细菌性病害，病菌在西瓜整个生育期 内均可侵染，主要为害子叶、真叶、茎蔓和果实。 4 病害诊断 4.1 病原和病害症状 病害典型症状及病原相关信息见附录A。 4.2 4.2.1 症状观察 幼苗期 幼苗期子叶发病，初期出现水浸状褪绿斑，后渐变为暗棕色，常沿主脉逐渐发展为不规则的暗绿色 至褐色、黑褐色坏死病斑。高温高湿情况下，病斑处有菌脓溢出，干后形成白色发亮的菌膜。 4.2.2 成株期 1 DB22/T 3192—2020 真叶发病，初期形成水渍状暗棕色小斑点，病斑较小，周围有黄色晕圈，病斑通常沿叶脉发展，叶 片正面形成褐色多角形、条形或不规则形病斑。在高湿的环境下，叶片背面病斑处可溢出菌脓，干后呈 白色膜状。此病亦危及叶柄和茎蔓，病叶很少脱落。 4.2.3 果实 4.2.3.1 果实发病初期为水渍状斑点，病斑迅速扩展，边缘不规则，颜色加深呈暗橄榄绿色，并向果 肉腐烂蔓延；湿度大时病斑上产生透明黏稠状物，干燥后呈白色膜状或粉状物。 4.2.3.2 早期形成的病斑老化后表皮龟裂，常溢出黏稠、透明的琥珀色菌脓，果实很快腐烂。 4.3 田间快速检测 对疑似果斑病症状的幼苗、叶片、果实等发病部位可直接利用商品化胶体金试纸条进行快速检测， 按照说明书进行操作及结果判定。结果为阳性则初步判定为西瓜细菌性果斑病。 4.4 病原菌实验室检测 4.4.1 显微镜检测 在显微镜下观察新鲜病害样品病健交界处组织有无喷菌现象，若有喷菌现象，则认定为细菌病害。 4.4.2 病菌分离培养 选取具有喷菌现象的病健交界处组织，切成 3 mm×3 mm 左右的小块，用 75% 的乙醇表面消毒40 s ～ 60 s，用无菌水清洗 3 次，然后将其移至装有 1 mL无菌水的灭菌培养皿，用灭菌剪刀将其剪碎， 制成细菌悬浮液。用灭菌接种环蘸取细菌悬浮液在含有 50 µg/mL氨苄青霉素的营养琼脂培养基（NA） 半选择平板培养基上划线分离，28 ℃恒温培养 48 h，长出的菌落初步认定为西瓜噬酸菌。 4.5 PCR 检测 4.5.1 DNA 模板制备 5 将 4.3.2 中分离培养的细菌菌株用无菌水稀释成≥10 cfu/mL 的菌悬液做模板。 4.5.2 4.5.2.1 PCR 凝胶电泳检测 特异性 PCR 引物 WFB1/WFB2 (5’-GACCAGCCACACTGGGAC-3’/5’-CTGCCGTACTCCAGCGAT-3’)。 4.5.2.2 PCR 反应体系 10×PCR 缓冲液 2.5 µL，dNTP 2.0 µL，上游引物 1.0 µL，下游引物 1.0 µL，Taq DNA聚合酶0.4 µL，细菌悬浮液 1.0 µL，重蒸水 17.1 µL。 4.5.2.3 PCR 反应循环参数 94 ℃预变性 5 min；94 ℃变性 30 s、55 ℃退火 30 s、72 ℃延伸 30 s，35 个循环；72 ℃延 伸 7 min；4 ℃保存。不同仪器可根据仪器要求将反应参数做适当调整。 4.5.3 2 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳检测 DB22/T 3192—2020 PCR产物用 1.5% 的琼脂糖凝胶进行电泳，凝胶成像系统观察、拍照。若在 360 bp处出现特异性条 带则表明病样中含有西瓜噬酸菌，该病害为西瓜细菌性果斑病。 5 病害综合防治 5.1 地块选择 应选择地势高燥、排水良好的地块，避免雨后积水。 5.2 轮作倒茬 与非葫芦科作物轮作，轮作间隔期至少5年。 5.3 种子处理 5.3.1 播种前将西瓜种子（直播或用于嫁接育苗的砧木和接穗的种子），可选用下列方法之一进行种 子处理： a) 播种前，可将种子浸入 50 ℃ ～ 55 ℃的温水中 15 分钟 ～ 30 分钟，边浸泡边搅拌，用清 水洗净后晾干待催芽或播种； b) 40% 的甲醛 200 倍液浸种 60 分钟； c) 2% 盐酸浸种 5 分钟； d) 0.3% ～ 0.5%次氯酸钠浸种 15 分钟； e) 40% 过氧乙酸（Tsunami 100）80 倍液浸泡 30 分钟。 5.3.2 浸种期间需搅拌 2 次 ～ 3 次，保证所有种子均匀着药，浸种后用清水充分冲洗 3 次 ～ 4 次，每次洗 10 分钟，待催芽或播种。 5.4 苗期防病 5.4.1 苗情观察及病苗处理 在出苗后子叶展开时观察子叶是否发病，继而观察真叶是否受到侵染。苗床中一旦出现与西瓜细菌 性果斑病相似的症状，应及时拔除并进行无害化处理，并对幼苗喷药保护，控制病害的传播。 5.4.2 选苗移栽 选用健康西瓜苗进行移栽。 5.5 农事操作 5.5.1 工具消毒 嫁接、移栽、理蔓、选瓜等农事操作过程中对手和工具等进行消毒处理。可选用 75% 酒精、40% 甲醛 50 倍液浸泡工具 5 分钟 ～ 15 分钟。 5.5.2 病残体处理 及时清除田间染病植株、果实，将其集中带到田外进行无害化处理。 5.5.3 5.5.3.1 注意事项 避免在叶片露水未干的感染田块中工作。 3 DB22/T 3192—2020 5.5.3.2 5.5.3.3 5.6 避免将发病田中用过的工具带到无病田中使用。 在嫁接、移栽、理蔓及选瓜等农事操作前后可喷施 5.7.1 中药剂进行预防。 肥水管理 5.6.1 施肥 氮、磷、钾配合施用，增施有机肥及生物菌肥，避免过量施用氮肥。 5.6.2 灌水 在水分能够满足作物需求的情况下尽量不浇水或少浇水，避免大水漫灌。 5.7 药剂防治 5.7.1 药剂种类 病害防治可选用 53.8%氢氧化铜水分散粒剂、47%春雷·王铜可湿性粉剂。使用方法见表1. 表1 西瓜细菌性果斑病防治药剂种类及使用方法 药剂名称 使用时期 用药量（制剂量/亩） 施用方法 47%春雷·王铜可湿性粉剂 成株期 95 g ～ 100 g 常规喷雾 3 46%氢氧化铜水分散粒剂 成株期 40 g ～ 60 g 常规喷雾 3 注：本表中药剂种类来自NY/T 2919-2016,用药量及使用方法来自中国农药信息网。 5.7.2 5.7.2.1 5.7.2.2 5.7.2.3 5.7.2.4 5.7.2.5 4 注意事项 药剂的使用应按照 GB/T 8321（所有部分）和 NY/T 1276 的规定执行。 农药投入品管理按附录 B 的要求执行。 施药应均匀、周到、细致。 不同药剂应轮换使用。 注意雨后要及时喷药预防。 最多使用次数 DB22/T 3192—2020 AA 附 录 A （资料性附录） 西瓜细菌性果斑病典型症状及病原相关信息 A.1 病原菌名称 中文名称：西瓜细菌性果斑病菌、西瓜细菌性果腐病菌、瓜类果斑病菌、西瓜噬酸菌 英文名称：Bacterial Fruit Blotch 学名：Acidovorax citrulli（Schaad et al.）Shaad et al.,2009 异名：Acidovorax avenae subsp. citrulli(Schaad et al.,1978)Willenms et al.,1992 Pseudomonas avenae subsp. citrulli(Schaad et al.,1978)Hu et al., 1991 Pseudomonas pseudoalcaligenes subsp. citrulli Schaad et al.,1978 A.2 病害传播途径 主要通过带菌种子远距离传播。在田间通过雨水、农事操作、昆虫等传播。 A.3 病害典型症状 西瓜细菌性果斑病苗期症状见图A.1。 图A.1 西瓜细菌性果斑病苗期症状 西瓜细菌性果斑病成株期症状见图A.2。 5 DB22/T 3192—2020 图A.2 西瓜细菌性果斑病成株期症状 西瓜细菌性果斑病果实症状见图A.3。 图A.3 A.4 西瓜细菌性果斑病果实症状 病原菌培养性状 西瓜细菌性果斑病菌革兰氏染色反应阴性，菌体短杆状，大小（0.2 µm ～ 0.8 µm）×（1.0 µm ～ 5.0 µm）。在NA培养基上形成不透明、圆形、光滑、略有扇形扩展的边缘和突起的菌落，28℃培养2 d～ 3 d菌落直径可达1.0 mm ～ 2.0 mm。 西瓜噬酸菌在NA培养基上的菌落形态见图A.4。 图A.4 6 西瓜噬酸菌在 NA 培养基上的菌落形态 DB22/T 3192—2020 BB 附 录 B （规范性附录） 农药投入品管理 B.1 采购 不应采购国家禁止使用的农药。应从正规渠道采