ICS 67.220.10 CCS B 36 DB 42 湖 北 省 地 方 标 准 DB42/T 1645—2021 生姜脱毒原原种繁育技术规程 Code of practice for virus free seed ginger pre-elite breeding 2021 - 03 - 01 发布 湖北省市场监督管理局 2021 - 05 - 01 实施 发 布 DB42/T 1645—2021 目 次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 温室、网室要求 ..................................................................... 1 环境要求 ....................................................................... 1 基础设施要求 ................................................................... 1 消毒方法 ....................................................................... 2 5 脱毒组培苗快繁 ..................................................................... 2 脱毒组培苗的培育 ............................................................... 2 病毒检测 ....................................................................... 2 脱毒苗快繁 ..................................................................... 2 6 组培苗驯化栽培 ..................................................................... 3 炼苗 ........................................................................... 洗苗 ........................................................................... 苗床准备 ....................................................................... 定植 ........................................................................... 浇定根水 ....................................................................... 驯苗期田间管理 ................................................................. 3 3 3 3 3 3 7 原原种生产 ......................................................................... 3 整地施肥 ....................................................................... 定植 ........................................................................... 田间管理 ....................................................................... 收获与贮存 ..................................................................... I 4 4 4 4 DB42/T 1645—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖北省农业科学院提出。 本文件由湖北省农业农村厅归口。 本文件起草单位：湖北省农业科学院经济作物研究所、来凤县农业技术推广中心、咸宁市农业科学 院、鄂州市同源种养殖专业合作社。 本文件主要起草人：吴金平、郭凤领、周洁、矫振彪、覃竹山、符家平、陈磊夫、徐绳武、肖颖、 邱正明、唐纯、温亮、徐志超、明长春、杨硕。 本 文 件 实 施 应 用 中 的 疑问 ， 可 咨 询 湖 北 省 农 业农 村 厅 ， 联 系 电 话 ： 027-87665821 ， 邮 箱： [email protected]；本文件的有关修改意见建议请反馈至湖北省农业科学院经济作物研究所，联系电话： 027-87380817，邮箱：[email protected]。 II DB42/T 1645—2021 生姜脱毒原原种繁育技术规程 1 范围 本文件规定了生姜（Zingiber officinale Roscoe）脱毒苗术语与定义，温室、网室要求，脱毒组 培苗快繁，组培苗驯化栽培及原原种生产等基本要求。 本文件适用于湖北省生姜脱毒原原种繁育，其它地区可参考。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB 15618 土壤环境质量 农用地土壤污染风险管控标准（试行） GB/Z 26584 生姜生产技术规范 NY/T 404 脱毒生姜种姜（苗）病毒检测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 脱毒 in vitro virus-free 在无菌操作的条件下，经过茎尖剥离脱去危害生姜的病毒。 脱毒组培苗 in vitro virus-free plantlet 简称脱毒苗，指通过植物组织培养技术获得的，经检测确认不带烟草花叶病毒（TMV），黄瓜花叶 病毒（CMV）的种苗。 4 温室、网室要求 环境要求 宜选择气候凉爽、天然隔离条件好的区域，没有其他姜科植物或易引诱蚜虫的作物。 所处地势有利于灌溉和排水。土壤质量应符合GB 15618要求，水源充足，能满足生产灌溉要求，水 质符合GB 5084要求。 基础设施要求 温室、网室要具有控温、控湿、控光和良好的通风条件，有防雨和防虫设施。温、网室的门窗和通 风口要装60目的防虫网纱。温室、网室进门处修建一个可随时消毒的缓冲间。 1 DB42/T 1645—2021 消毒方法 温室、网室及其内部设施应定期消毒。可用硫磺熏蒸、50%多菌灵可湿性粉剂800倍液喷洒或0.1%高 锰酸钾等消毒。 5 脱毒组培苗快繁 脱毒组培苗的培育 5.1.1 选材 选取鲜黄、有光泽、芽多且无伤痕、饱满健壮的姜块，自来水冲洗干净后，埋于洗净的沙床中，在 20 ℃～25 ℃条件下催芽，当嫩芽长到1 cm～2 cm长时用刀片切取备用。 5.1.2 钝化病毒 嫩芽置于恒温箱中，50 ℃下处理5 min完成脱毒。 5.1.3 制备培养基 MS+KT（1.0 mg/L～1.5 mg/L）+NAA（0.5 mg/L～0.6 mg/L）+琼脂（4000 mg/L～6000 mg/L）+白糖（20000 2 mg/L～30000 mg/L），pH调到5.8，分装入管（瓶）。在0.15 Mpa/cm 压力下高压灭菌锅灭菌15 min～20 min，冷却备用。 5.1.4 接种 将入选材料放入纱布袋，用自来水冲洗1 h后，在无菌条件下，放入75%酒精中浸10 s～30 s，再用 0.1%升汞液消毒8 min～10 min，取出用无菌水冲洗3次～5次置于吸湿纸上，在体视解剖镜下用手术刀等 工具剥掉幼叶层，切取分生组织0.1 mm～0.3 mm生长点，迅速接入配置好培养基的试管或培养瓶中，每 瓶接种1个生长点，注明品种、编号和接种日期。 5.1.5 培养条件 温度25 ℃～28 ℃，每天光照时数10 h～16 h，1500 lx～3000 lx光照强度条件下培养30 d～60 d，诱 导丛芽。 病毒检测 组培苗的病毒检测按照NY/T 404的有关规定执行。 脱毒苗快繁 5.3.1 脱毒组培苗来源 经病毒检测（见5.2），脱除了TMV、CMV病毒的组培苗。 5.3.2 继代培养 将脱毒丛芽块切割成0.4 cm～0.6 cm小块，留取丛芽基部0.5 cm～1 cm，并去掉所有根，转入培养基 （见5.1.3），进行丛芽的继代增殖培养（见5.1.5），以后每隔25 d～35 d继代1次；反复继代培养繁殖。 5.3.3 生根培养 2 DB42/T 1645—2021 2 cm～3 cm高的小苗转入1/2 MS培养基进行生根培养（见5.1.5）。 5.3.4 组培苗出瓶 生根组培苗株高5 cm～8 cm，茎粗≥0.2 cm，生根数≥4条时出瓶。 6 组培苗驯化栽培 炼苗 在炼苗间内，打开生根苗瓶口，自然环境条件下放置2 d～3 d。 洗苗 将炼苗处理的试管苗取出，用清水小心洗净根上的培养基。用NAA30 mg/L～50 mg/L溶液浸苗根基部 10 min～15 min，转入800倍的百菌清药液浸苗根基部不超过15 min，取出后定植。 苗床准备 6.3.1 整地 选择土壤肥沃