ICS 65.100.20 CCS B 50 21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3451—2021 渔业水体中扑草净残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of prometryn residue in fisheries water— Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2021 - 06 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2021 - 07 - 30 实施 发 布 DB21/T 3451—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由辽宁省农业农村厅提出。 本文件由辽宁省农业农村厅归口。 本文件起草单位：大连市现代农业生产发展服务中心、大连市检验检测认证技术服务中心。 本文件主要起草人：许炳雯、王骏、许岩、丁勇、刘彤、孙程鹏、宋晓阳、尚宏鑫、陈颖、马琳、 杨婷婷、田斌。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅 农产品质量安全监管局（沈阳市和平区太原北街2号综 合楼A座），联系人：马京京，联系电话：024-23447862；13840306249，电子邮箱：[email protected]。 文件起草单位通讯地址：大连市现代农业生产发展服务中心（大连市沙河口区中山路678号），联 系电话：0411-82480504。 I DB21/T 3451—2021 渔业水体中扑草净残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本文件规定了液相色谱-串联质谱法测定渔业水体中扑草净残留量的原理、试剂和材料、仪器和设 备、测定步骤、空白试验、定量限、准确度和精密度。 本文件适用于渔业水体中扑草净残留量的测定。 本文件的定量限为5.0 ng/L。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 HJ 493 水质样品的保存和管理技术规定 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 水样中的扑草净用固相萃取柱富集、净化、洗脱，用液相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量。 5 试剂和材料 除非另作说明，本方法所用试剂均为分析纯，试验用水为符合GB/T 6682规定的一级水。 5.1 乙腈：色谱纯。 5.2 甲醇：色谱纯。 5.3 水-乙腈混合溶液：水+乙腈（95+5，体积比）。 5.4 微孔滤膜：孔径 0.22 μm，水系。 5.5 扑草净标准品(Prometryn,C10H19N5S,CAS 号,7287-19-6)：纯度≥98%。 5.6 氘代扑草净(d6-扑草净）内标标准溶液：浓度 100 μg/mL。 1 DB21/T 3451—2021 5.7 扑草净标准储备液（100 μg/mL）：准确称取 10 mg（精确至 0.1 mg）扑草净标准品（5.5），用甲 醇（5.2）溶解并定容至 100 mL，配置成 100 μg/mL 的扑草净标准储备液，-18 ℃避光保存，有效期 6 个月。 5.8 标准中间液 5.8.1 扑草净标准中间液（1.0 μg/mL）：准确量取 1.0 mL 室温下的扑草净标准储备液（5.7）于 100 mL 容量瓶中，用甲醇（5.2）定容至刻度，配制成 1.0 μg/mL 的扑草净标准中间液，4 ℃避光保存，有效 期 3 周。 5.8.2 氘代扑草净(d6-扑草净）标准中间液（1.0 μg/mL）：准确量取 1.0 mL 室温下的氘代扑草净标 准储备液（5.6）于 100 mL 容量瓶中，用甲醇（5.2）定容至刻度，配制成 1.0 μg/mL 的氘代扑草净(d6扑草净）标准中间液，4 ℃避光保存，有效期 3 周。 5.9 标准工作液 5.9.1 扑草净标准工作液（0.05 μg/mL）：准确量取 0.5 mL 室温下的扑草净标准中间液（5.8.1）于 10 mL 容量瓶中，用水-乙腈混合液（5.3）定容至刻度，配制成 0.05 μg/mL 的扑草净标准工作液，现配 现用。 5.9.2 氘代扑草净(d6-扑草净）标准工作液（0.05 μg/mL）：准确量取 0.5 mL 室温下的氘代扑草净(d6扑草净）标准中间液（5.8.2）于 10 mL 容量瓶中，用水-乙腈混合液（5.3）定容至刻度，配制成 0.05 μg/mL 的氘代扑草净(d6-扑草净）标准工作液，现配现用。 5.10 固相萃取柱：HLB，3 mL/60 mg，或相当的净化柱。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 6.2 电子天平：感量 0.01 mg。 6.3 氮气吹干仪：可控温。 6.4 高速冷冻离心机：最高转速不低于 12000 r/min。 6.5 固相萃取装置。 6.6 漩涡振荡器。 6.7 超声波清洗器。 7 测定步骤 7.1 试样的采集与保存 将现场采集水样装入洁净的棕色具塞玻璃瓶中，按HJ 493规定条件保存。 7.2 样品前处理 2 DB21/T 3451—2021 先后用5 mL甲醇和5 mL一级水对HLB固相萃取柱进行活化，流速均为6 mL/min。取200 mL水样，加入 40 μL氘代扑草净(d6-扑草净）标准工作液（5.9.2），摇匀，微孔滤膜抽滤备用。准确吸取100 mL上述 水样，以6 mL/min的流速通过活化好的HLB固相萃取柱，弃去流出液，用5 mL一级水以6 mL/min的流速润 洗固相萃取柱，再以25 mL/min的流速注入20 mL空气对固相萃取柱进行干燥。干燥后用8 mL甲醇以6 mL/min的流速洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，用水-乙腈混合液（5.3）定容至1.0 mL，经高速冷冻离心 机以12000 r/min的速度离心15分钟后，取上清液过微孔滤膜待测。 7.3 测定条件 7.3.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下： a) 色谱柱：C18 柱，50 mm×2.1 mm，1.7 μm，或其他等效柱。 b) 柱温：40 ℃。 c) 进样量：0.5 μL。 梯度洗脱流动相参见表 1。 表1 梯度洗脱流动相 时间（min） 水（%） 乙腈（%） 流速（mL/min） 0.00 95.0 5.0 0.40 0.10 95.0 5.0 0.40 1.40 5.0 95.0 0.40 2.40 5.0 95.0 0.40 2.50 95.0 5.0 0.40 3.50 95.0 5.0 0.40 7.3.2 质谱条件 质谱条件如下： a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）。 b) 扫描方式：正离子模式。 c) 检测方式：多反应监测（MRM）。 d) 离子源温度：150 ℃。 e) 脱溶剂气温度：550 ℃。 f) 脱溶剂气流量：1000 L/Hr。 g) 碰撞气（氩气）流量：0.15 mL/min。 h) 毛细管电压：1.00 kV。 监测离子对及碰撞能量见表 2。 表2 监测离子对及碰撞能量 名称 扑草净 氘代扑草净（d6-扑草净） 定性离子对（m/z） 242/200 242/158 248/206 定量离子对（m/z） 242/158 248/206 碰撞能量/V 18 22 18 3 DB21/T 3451—2021 7.4 定性测定 样品中扑草净和氘代扑草净（d6-扑草净）的保留时间之比，与标准溶液中对应的时间之比，偏差 在±2.5%之内；且样品中定性离子和定量离子的相对丰度比，与浓度接近的标准溶液相比，若偏差不超 过表3规定的范围，则可判定为样品中存在扑草净。 表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50% ＞20%至50% ＞10%至20% ≤10% 允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.5 定量测定 在仪器正常工作条件下，对标准工作溶液进样，以标准溶液中扑草净峰面积和氘代扑草净（d6-扑 草净）峰面积的比值为纵坐标，标准溶液中扑草净浓度与氘代扑草净（d6-扑草净）浓度的比值为横坐 标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中扑草净的响应值均应在仪器测定 的线性范围内（0.25 ng/mL～10 ng/mL）。内标法定量。扑草净和氘代扑草净（d6-扑草净）的标准物质 的多反应监测（MRM）色谱图参见附录A。 7.6 结果计算 样品中扑草净的含量按式（1）计算，结果需扣除空白值。 X cs  ci  A  Asi  V2 ······························································ (1) csi  As  Ai  V1 式中： X——样品中扑草净的含量，单位为纳克每升（ng/L）； cs——标准上机液中扑草净质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； ci——水样中氘代扑草净质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； csi——标准上机液中氘代扑草净质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； A——水样中扑草净峰面积； Asi——标准上机液中氘代扑草净峰面积； As——标准上机液中扑草净峰面积； Ai——水样中氘代扑草净峰面积； V2——最终定容体积，单位为毫升（mL）； V1——过柱水样体积，单位为升（L）。 7.7 结果表示 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留两位有效数字。 8 空白试验 除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。 9 定量限、准确度和精密度 4 DB21/T 3451—2021 9.1 定量限 水样中扑草净的定量限为5.0 ng/L。 9.2 准确度 水样中扑草净的添加浓度为5.0 ng/L ～50 ng/L时，加标回收率为70 %～120 %。 9.3 精密度 本方法的批内相对标准偏差小于10 %，批间相对标准偏差小于15 %。 5 DB21/T 3451—2021 A A 附 录 A （资料性） 扑草净和氘代扑草净（d6-扑草净）的标准物质的多反应监测（MRM）色谱图 扑草净和氘代扑草净（d6-扑草净）的标准物质的多反应监测（MRM）色谱图，见图A.1。 图A.1 扑草净和氘代扑草净（d6-扑草净）的