ICS 65.020.30 CCS B 43 53 云 南 省 地 方 标 准 DB53/T 1052.2—2021 云上黑山羊养殖规范 第 2 部分：人工授精 2021 - 05 - 25 发布 云南省市场监督管理局 2021 - 08 - 25 实施 发 布 DB53/T 1052.2—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是DB53/T 1052《云上黑山羊养殖规范》的第2部分。DB53/T 1052分为以下8部分： ——第1部分：品种； ——第2部分：人工授精； ——第3部分：胚胎移植； ——第4部分：营养需要； ——第5部分：粗饲料； ——第6部分：饲养管理； ——第7部分：疫病防治； ——第8部分：羊舍及辅助设施。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南省农业农村厅提出。 本文件由云南省农业标准化专业技术委员会（YNTC07）归口。 本文件起草单位：云南省畜牧兽医科学院、弥勒市畜牧技术推广站。 本文件主要起草人：权国波、邵庆勇、吕春荣、李卫娟、罗俊。 I DB53/T 1052.2—2021 引 言 种、料、管、防及养殖设施设备是畜牧产业的重要环节和基础。DB53/T 1052-2021《云上黑山羊养 殖规范》是以2019年4月国家审定新品种“云上黑山羊”为载体制定综合养殖标准，旨在从品种、繁殖、 营养、饲料、管理、疫病、设施等环节指导和规范云上黑山羊养殖，带动云上黑山羊规范化、标准化、 产业化发展的同时，可提高养殖场（户）养殖水平和养殖效益，促进云南肉羊产业高质量发展。 DB53/T 1052-2021由八个部分构成。 ——第 1 部分：品种。目的在于确立云上黑山羊特征和特性、生产性能和等级评定，适用于云上黑 山羊品种鉴定和种羊等级评定。 ——第 2 部分：人工授精。目的在于确立开展云上黑山羊人工授精采精用种公羊选择、采精、精液 检查、精液保存、冻精质量评价、母羊发情鉴定和输精等技术要求。 ——第 3 部分：胚胎移植。目的在于确立开展云上黑山羊快速扩繁时供体羊的选择与饲养管理、超 数排卵与配种、胚胎回收、胚胎质量鉴定、胚胎冷冻保存与解冻、胚胎移植等技术要求。 ——第 4 部分：营养需要。目的在于确立云上黑山羊养殖过程中各生长和生理阶段羊营养需要量。 ——第 5 部分：粗饲料。目的在于确立云上黑山羊养殖过程中主要青绿饲料、青干草、秸秆和全株 玉米青贮要求。 ——第 6 部分：饲养管理。目的在于确立云上黑山羊饲养管理的基本要求、配种、各类羊只的饲养 管理、一般管理技术等内容。 ——第 7 部分：疫病防治。目的在于确立云上黑山羊饲养场的卫生要求、引种、传染病防控、寄生 虫病防治与无害化处理等要求。 ——第 8 部分：羊舍及辅助设施。目的在于确立云上黑山羊养殖场建设的选址、规划与布局原则， 羊舍和饲养密度，羊舍和辅助设施建设等内容。 规范养殖过程中，从关键的生产环节开始。DB53/T 1052-2021 包含的八部分内容均是符合生产实 际需要，相互对接，涵盖了生产环节中的品种、繁殖、营养、饲料、管理、疫病防治，同时结合了科学 合理的饲养设施。该标准可规范养殖过程，充分发挥云上黑山羊生产性能，提高养殖水平，节本增效， 促进规模化标准化养殖的构建。 II DB53/T 1052.2—2021 云上黑山羊养殖规范 第 2 部分：人工授精 1 范围 本文件确立了云上黑山羊种公羊的采精、精液检查、精液保存、冻精质量评价、母羊发情鉴定和输 精等技术要求。 本文件适用于云上黑山羊的人工授精操作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 DB53/T 760.2 云南半细毛羊养殖 第2部分：人工授精 DB53/T 860 山羊细管冻精制作规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 采精 4.1 采精器具、试剂及地点 4.1.1 器具 假阴道、电刺激采精仪、集精杯、15 mL锥形离心管、移液器、注射器、水浴锅、160℃～200℃的 干燥箱、煮沸消毒器、显微镜、载玻片、温度计、保温杯。 4.1.2 试剂 凡士林、75%酒精、生理盐水。 4.1.3 地点 符合DB53/T 860的要求。 4.2 操作 按DB53/T 760.2的要求执行。 5 5.1 精液检查 检查 3 DB53/T 1052.2—2021 正常的公羊精液应符合以下要求： a) 呈乳白色，浓厚不透明； b) 用肉眼能观察到快速的云雾状运动； c) 射精量 0.5 mL～2.0 mL。 5.2 活力评定 精子活力采用0～1.0的10 级评分标准。在显微镜视野里，100%的精子做活跃的直线前进运动评为 1.0 分，80%做直线前进运动评为0.8 分，以此类推。 5.3 密度评定 精子密度评定分为“密”、“中”、“稀”、“无”，具体要求如下： a) 精子密度很大，精子与精子间的距离小于一个精子的长度为“密”； b) 精子间有明显的空隙，两精子间的距离相当于 1 个～2 个精子长度为“中”； c) 精子数量少，精子之间超过两个精子的长度为“稀”； d) 若观察不到精子则记为“无”。 6 精液保存 6.1 常温保存 6.1.1 器具 15 mL或50 mL锥形塑料离心管、0.22 μm一次性滤器，0.45 μm一次性滤器，水浴锅。 6.1.2 试剂 三羧甲基氨基甲烷（Tris）、柠檬酸、葡萄糖、大豆卵磷脂、青霉素、链霉素、蛋黄、脱脂奶粉、 0.9%生理盐水。 6.1.3 稀释液 精液常温制作保存稀释液配方见附录A。 6.1.4 稀释 精液按照以下步骤进行稀释： a) 将稀释液于水浴锅（37℃）中平衡 30 min，至稀释液温度与精液相同； b) 精液稀释时，稀释液沿管壁缓缓加入，切忌速度过快； c) 轻轻晃动使精液和稀释液混匀，不应用力摇晃或搅拌。 6.1.5 常温保存原则 常温保存应遵循以下原则： a) 避免强烈光线的照射及高温； b) 精液应恒温保存，降温或升温应缓慢进行； c) 宜减少精液与空气的接触。 6.2 4 冷冻保存 DB53/T 1052.2—2021 按DB53/T 860的规定执行。 7 冻精质量评价 输精冻精精液质量应满足以下要求： a) 解冻后精子活力不低于 0.35，精子畸形率低于 15%； b) 质膜完整率不低于 40%，顶体完整率不低于 50%； c) 运动速度在 100 μm/s 以上，每剂细管冻精解冻后有效精子数不低于 1000 万个； d) 鲜精活力不低于 0.75，精子密度“中”以上。 8 母羊发情鉴定 按DB53/T 760.2的要求执行。 9 输精 9.1 输精时间 母羊发情后12 h～24 h第1 次输精，间隔8 h～12 h第2 次输精，若还持续发情的，可在第2 次输精后 8 h～12 h进行第3 次输精。 9.2 输精 输精按以下步骤进行： a) 输精前将母羊外阴部用 0.1%新洁尔灭擦洗消毒，再用生理盐水冲洗干净； b) 将用生理盐水温润过的开膣器闭合按母羊阴门的形状慢慢插入后轻轻转动 90 度， 打开开膣器， 用额灯或手电筒光源寻找子宫颈口； c) 将输精枪慢慢插入子宫颈口内 1.0 cm～2.0 cm，将精液注入子宫颈口内； d) 输精完毕使母羊继续倒立 2 min，轻拍母羊背部，防止精液倒流出。 9.3 记录 人工授精记录见表1。 表1 母羊 号  人工授精记录表 第一次输精  第二次输精  第三次输精  公羊 公羊 公羊 发情 时间  输精 时间  输精 时间 号  时间 量  号  量  妊娠 产羔 产羔 情况  日期  数  备注 输精 号  量                                                                                            5 DB53/T 1052.2—2021 附 录 A （资料性） 精液常温保存稀释液配方 精液常温保存稀释液各配方如下： a) 配方一，脱脂奶粉 10 g、葡萄糖 0.2 g 溶于 100 mL 蒸馏水，95℃加热处理 8 min。冷却至室温 后加入 0.5 g 青霉素和 0.5 g 链霉素。然后于 8000 g×30 min 离心取上清，用 0.45 μm 滤器过 滤备用； b) 配方二，取 Tris3.6 g、葡糖糖 0.5 g、柠檬酸 2 g、青霉素 0.006 g、链霉素 0.1 g 溶于 90 mL 蒸 馏水中，0.22 μm 滤器过滤除菌后于 4℃保存。使用前加入 1.5 mL 蛋黄，并定容至 100 ml， 用 0.45 μm 滤器过滤备用； c) 配方三，取 Tris 2.71 g、葡萄糖 1.0 g、柠檬酸 1.4 g、青霉素 0.0627 g、链霉素 0.1335 g 溶于 90 mL 蒸馏水中，0.22 μm 滤器过滤除菌后于 4℃保存。使用前加入 1.5 mL 蛋黄，并定容至 100 mL，用 0.45 μm 滤器过滤备用； d) 配方四：取 Tris3.1 g、柠檬酸 1.7 g、葡萄糖 1.3 g、青霉素 0.0627 g、链霉素 0.1335 g、1 g 大 豆卵磷脂用蒸馏水定容至 100 mL，于 4℃保存备用； e) 配方五，用 0.9%注射生理盐水作稀释液，这种稀释液精液保存时间短，只能进行现场操作， 而且精液稀释倍数不宜过高； f) 合格商品精液稀释液。 _________________________________ 6 DB53/T 1052.2－2021