(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210571306.7 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 青岛大学 地址 266000 山东省青岛市宁 夏路308号 (72)发明人 胡明　王斌　李环廷　钱冬萌　 邓文帅　马俊伟　张丙旭　李佳文　 (74)专利代理 机构 北京维正专利代理有限公司 11508 专利代理师 张惠敏 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) A61K 31/713(2006.01) A61P 31/22(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 抑制人巨细胞病毒即刻早期基因的siRNA及 其应用 (57)摘要 本发明涉及一种生物医药技术领域， 具体涉 及一种抑制人巨细胞病毒即刻早期基因的siRNA 及其应用。 本发明所述的siRNA分子包括核苷酸 序列正义链和反义链， 其中正义链的序列如序列 表SEQ ID NO： 1所示， 反义链的序列如序列表SEQ   ID NO： 2所示； 将本发明所述的siRNA分子转入人 脑胶质瘤细胞后能明显抑制人巨细胞病毒即刻 早期基因及蛋白的表达， 并且能够有效抑制ATF5 表达， 从而抑制胶质瘤细胞增殖能力。 权利要求书1页 说明书9页 序列表1页 附图2页 CN 114990116 A 2022.09.02 CN 114990116 A 1.一种双链siRNA分子， 其特 征在于： 所述的siRNA分子由正 义链和反义链组成； 所述siRNA的正义链为5 ’ ‑GAACUUAGGAGAAAGAUGAUG ‑3’  (SEQ ID NO： 1)， 其中， 5 ’端第 14位碱基为2 ’ ‑甲氧基修饰碱基； 所述siRNA的反义链为5 ’ ‑UCAUCUUUCUCCUAAGUUCAU ‑3’  (SEQ ID NO： 2)， 其中， 5 ’端第9 位碱基为2 ’ ‑甲氧基修饰碱基。 2.一种双链siRNA分子组合物， 其特征在于： 所述的组合物包括权利要求1所述的 siRNA， 还 包括siRNA 2； 所述的siRNA 2由正义链和反义链组成； 所述siRNA2的正义链为5 ’ ‑GCUAAAAAGGAU GAACUUAGG ‑3’  (SEQ ID NO： 3)， 其中， 5 ’第16 位碱基为2 ’ ‑甲氧基修饰碱基； 所述siRNA2的反义链为5 ’ ‑UAAGUUCAUCCUUUUUAGCAC ‑3’  (SEQ ID NO： 4)， 其中， 5 ’第7 位碱基为2 ’ ‑甲氧基修饰碱基。 3.权利要求1所述的siRNA分子、 权利 要求2所述的siRNA分子组合物在制备降低胶质瘤 细胞中人巨细胞病毒即刻早期基因表达试剂中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： 所述的人巨细胞病毒即刻早期基因是 UL122。 5.一种试剂盒， 该试剂盒包含权利要求1所述的双链siRNA分子或权利要求2所述的双 链siRNA分子组合物。 6.权利要求1所述的siRNA分子、 权利要求2所述的siRNA分子组合物和权利要求3所述 的试剂盒在制备 预防和/或治疗病毒感染的产品中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述的病毒感染是 人巨细胞病毒感染。 8.权利要求1所述的siRNA分子、 权利要求2所述的siRNA分子组合物和权利要求5所述 的试剂盒在制备 预防和/或治疗人脑胶质瘤的产品中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114990116 A 2抑制人巨细胞病毒即刻早期基因的siRNA及其应用 [0001] 技术领域 [0002]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及抑制人巨细胞病毒即刻早期基因的 siRNA及其应用。 背景技术 [0003]RNA干扰(RNAi)是一种强大的基因沉默技术， 是通过导入与内源性mRNA同源的双 链RNA(double ‑stranded  RNA， dsRNA)， 来诱发同源靶mRNA高效、 特异性地降解， 从而 导致靶 基因沉默的现象。 siRNA是RNA干扰的中间产物， 通常是长度为19 ‑25个核苷酸的双链RNA， 在 每条链的3 ’端都有两个悬挂碱基。 siRNA能够抑制靶基因的表达， 属于转录水平后调控。 siRNA作为一种有效的基因研究工具， 它的广泛应用加快了功能基因组学的研究步伐， 同时 也推动了基因治疗等相关领域的研究。 [0004]人巨细胞病毒(human  cytomegalovirus， HCMV)属β 疱疹病毒亚科， 为双链线状DNA 病毒， 是疱疹病毒 科中最大的DNA病毒。 有研究资料证实HCMV感染与肿瘤的发生 发展有密切 关系。 比如， Cobbs等人研 究发现在恶性胶质瘤中HCMV即刻早期蛋白阳性率达60％(参考文 献1)。 再如， Scheurer等人明确提出了通过使用优化后的免疫组化方法， 在 石蜡包埋的恶性 胶质瘤组织中检测 到即刻早期蛋白的表达率为100％， 在低度胶质瘤中为82％； 同时， 他们 在上述胶质瘤组织中使用原位杂交的方法检测 到HCMV特异性的寡核苷酸链(参考文献2)。 即刻早期基因(immediate  early， ie)是人巨细胞病毒原发感染或复发激活感染后最先表 达的基因。 UL122(ie2)为最主要的ie基因， 它编码分子量为86kDa(又称IE86或IE2)的即刻 早期蛋白， 这种蛋白在HCMV基因表达的后续调控过程中起着主导作用。 其中， 有资料显示， 在胶质瘤细胞系U87MG中， IE86与转录激活因子5(activating  transcription  factor 5， ATF5)共定位于细胞核； 此外， IE86在细胞内能与ATF5相互作用， 提高ATF5的乙酰化水平， 进 而可能在已有癌变基础上进一步促进胶质瘤细胞增殖和侵袭(参考文献3)。 因此， 抑制 UL122基因表达不仅可以深入研究HCMV感染与恶性神经胶质瘤发生发展的分子机制， 更有 望为HCMV感染甚至是恶性胶质瘤疾病提供新的治疗手段。 [0005]RNA干扰(siRNA)是机体内广 泛存在的一种双链RNA介导的序列特异性基因沉默现 象， 它可与蛋白质结合形 成RNA诱导沉 默复合物(RNA ‑induced silencing  complex， RISC)， 该复合物能够结合到同源的mRNA上并诱导其降解。 目前， 已有报道关于抑制UL122基因的 siRNA。 比如， 文献4提供了一组抑制UL122 基因的siRNA， 该siRNA在人胚肾AD293细胞系中对 UL122基因的沉默效率较高， 但是对IE86蛋白的抑制率远达不到要求。 [0006]因此， 亟需一种特异性强、 沉默效率高的靶向H CMV UL122基因的siRNA。 [0007]参考文献： 1.Cobbs C S,Harkins  L Samanta M,et al.Human  cytomegalovirus  infection   and expression  in human malignant  glioma[J].Cancer  research,2002,62(12):3347 ‑说　明　书 1/9 页 3 CN 114990116 A 3