(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210579362.5 (22)申请日 2022.05.25 (71)申请人 温州医科 大学 地址 325000 浙江省温州市瓯海区茶山高 教园区 (72)发明人 杨新宇　金佳怡　王建光　金胜威　 (74)专利代理 机构 温州名创知识产权代理有限 公司 33258 专利代理师 朱海晓 (51)Int.Cl. C07K 16/18(2006.01) C12N 15/13(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 33/543(2006.01) A61K 39/395(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 19/02(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) (54)发明名称 一种以信号素5A为靶点的全人源拮抗抗体 及其应用 (57)摘要 本发明属于基因工程和蛋白质工程技术领 域， 具体涉及一种以信号素5A为靶点的全人源拮 抗抗体及其应用。 本发明通过噬菌体展示技术， 成功从健康人的scFv噬菌体抗体库中筛选以信 号素5A （SEMA 5A） 为靶点的全人源拮抗抗体， 并测 定其核苷 酸序列以及确定其氨基酸序列， 通过该 种方法所得全人源拮抗抗体具有靶向SEMA5A 的 特异性， 且其与SEMA5A结合后可抑制蛋白活性， 可作为SE MA5A拮抗剂使用。 权利要求书1页 说明书8页 序列表9页 附图3页 CN 115043941 A 2022.09.13 CN 115043941 A 1. 一种以信号素5A为靶点的全人源拮抗抗体， 其包含由linker连接的重链和轻链， 其 特征在于： 所述抗体为单链抗体， 其氨基酸序列包括如SEQ  ID NO.1、 SEQ  ID NO.2、 SEQ  ID  NO.3或SEQ  ID NO.4所示的序列。 2.一种多 核苷酸序列， 其特 征在于： 所述多核苷酸序列用于编码如权利要求1所述的以信号素5A为靶点的全人源拮抗抗 体； 用于编码包括如SEQ  ID NO.1所示 的序列的多核苷酸序列包含如SEQ  ID NO.9所示 的 编码重链可变区的核苷酸序列为以及如SEQ  ID NO.13所示的编码轻链可变区的核苷酸序 列； 用于编码包括如SEQ  ID NO.2所示的序列的多核苷酸序列包含如SEQ  ID NO.10所示的 编码重链可变区的核苷酸序列为以及如SEQ  ID NO.14所示的编码轻链可变区的核苷酸序 列； 用于编码包括如SEQ  ID NO.3所示的序列的多核苷酸序列包含如SEQ  ID NO.11所示的 编码重链可变区的核苷酸序列为以及如SEQ  ID NO.15所示的编码轻链可变区的核苷酸序 列； 用于编码包括如SEQ  ID NO.4所示的序列的多核苷酸序列包含如SEQ  ID NO.12所示的 编码重链可变区的核苷酸序列为以及如SEQ  ID NO.16所示的编码轻链可变区的核苷酸序 列。 3.根据权利要求2所述的多 核苷酸序列， 其特 征在于： 用于编码包括如SEQ  ID NO.1所示 的序列的多核苷酸序列包含如SEQ  ID NO.5所示 的 序列； 用于编码包括如SEQ  ID NO.2所示 的序列的多核苷酸序列包含如SEQ  ID NO.6所示 的 序列； 用于编码包括如SEQ  ID NO.3所示 的序列的多核苷酸序列包含如SEQ  ID NO.7所示 的 序列； 用于编码包括如SEQ  ID NO.4所示 的序列的多核苷酸序列包含如SEQ  ID NO.8所示 的 序列。 4.根据权利要求2所述的多核苷酸序列， 其特征在于： 所述多核苷酸序列包括信号肽编 码序列。 5.一种含有如权利要求2 ‑4任一项所述的多 核苷酸序列的表达载体。 6.一种含有如权利要求5所述的表达载体的重组细胞。 7.如权利要求1所述的以信号素5A为靶点的全人源拮抗抗体在制备信号素5A靶向产品 的应用。 8.如权利要求1所述的以信号素5A为靶点的全人源拮抗抗体在信号素5A靶向拮抗剂的 应用。 9.一种信号素5A靶向拮抗剂， 其特征在于： 其包含如权利要求1所述的以信号素5A为靶 点的全人源拮抗 抗体。 10.一种用于诊断、 治疗或预后判断信号素5A表达相关疾病的产品， 其特征在于： 其包 含如权利要求1所述的以信号素5A为靶点的全人源拮抗 抗体。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115043941 A 2一种以信号素5A为靶点的全人源拮抗 抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明属于基因工程和蛋白质工程技术领域， 具体涉及一种以信号素5A为靶点的 全人源拮抗 抗体及其应用。 背景技术 [0002]信号素是一大类分泌型或跨膜型糖蛋白分子， 参与机体多项重要生理过程的调 节， 包括调控神经系统的轴突发育， 血管形成,  骨分化,参与免疫功能调节等。 信号素家族 有30多个成员， 8个亚家族， 它们的N段都有一个共同的sema结构域。 信号素5A(SEMA5A)又称 SEMAF是第五类Sema家族中的一员， 基因定位于5p15.2， 基因全长1074bp， 蛋白分子量 120kDa。 SEMA5A是一种既可以跨膜又可以分泌的蛋白， 有报道称， 在胰腺癌细胞的上清液和 类风湿性关节炎患者的血清中可以检测到S EMA5A的可溶性形式， 在Hela细胞中金属蛋白酶 ADAM‑17可以裂解细胞表面的SEMA5A， 使其转化成可溶性形式。 SEMA5A  相较其他sema家族 成员的独特之处在于它含有七个与血小板反应蛋白 Ⅰ型重复序列 （TSP1） 高度相 似的序列。 而血小板反应蛋白重复序列能够促进各种细胞与细胞外基质的粘附， 还能促进细胞生长。 也正因此， SE MA5A含有这样一个 独特的结构域， 也 就表明SE MA5A可能可以促进细胞生长 。 [0003]据报道， 在高分化、 高致瘤和转移性的胰腺癌细胞中能够 检测到SEMA5A的表达， 而 且SEMA5A表达调控着肿瘤的发生， 促进肿瘤生长、 增强肿瘤细胞侵袭和转移。 血管生 成在正 常发育以及 包括癌症在内的多种病理条件中起着关键作用。 其机制之一是从现有 血管发芽 和重塑新生血管形成一个复杂的网络。 血管生成的过程是通过血管通透性、 内皮细胞粘附 性减弱和内皮周围基质降解来破坏现有成熟血管的稳定。 来自不稳定成熟血管的内皮细胞 先增殖， 然后形成管腔， 迁移到新血管形成区域， 细胞衰减并融合到原有血管。 而内皮细胞 在SEMA5A刺激后， 可以通过激活Akt途径促进细胞增殖， 诱导抗凋亡基因抑制细胞凋亡， 通 过激活Met酪氨酸激酶增加细胞迁移， 通过基质金属蛋白酶9促进细胞外基质降解， 从而达 到促血管生成的作用。 [0004]可溶性SEMA5A还可以增加T细胞和NK细胞增殖， 促进Th1细胞的分化， 并诱导Th1/ Th17促炎细胞因子的分泌， 从而参与免疫反应。 在类风湿关节炎的患者血清中能够检测到 显著升高的SEMA5A， 且在RA生物标记物抗环瓜氨酸肽阳性的RA患者中最高， 并与类风湿因 子水平相关。 值得一提的是SEMA5A能够诱导了RA血管翳的生成， 其中TSP1结构域有着重要 作用。 不仅如此， SEMA5A在系统性红斑狼疮患者的血清 中也存在高表达， 还与SLE的相关病 症呈正相关。 [0005]信号素5A(SEMA5A)在疾病中异常高表达并与疾病的病症成正相关， 因此对于 SEMA5A靶向拮抗剂的开发尤为重要， 该拮抗剂可用于治疗SEMA5A引起的病症。 但目前针对 SEMA5A且疗效好的拮抗剂较少， 大多都是针对SEMA5A下游蛋白， 例如Akt； 或是SEMA5A功能 性受体Plexin ‑B3； 又或是通过抑制可以切割膜表面SEMA5A使其转化为可溶性SEMA5A的 ADAM‑17。 而这些拮抗剂都不是靶向SEMA5A从而起到拮抗作用的。 目前有机小分子拮抗剂、 肽类拮抗剂应用较多， 但其在体内易被水解或发生构象变化， 从而产生毒副作用。说　明　书 1/8 页 3 CN 115043941 A 3