(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210577364.0 (22)申请日 2022.05.25 (71)申请人 武汉大学 地址 430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山 街道八一路2 99号 (72)发明人 张先正　曾思敏　李瑞琳　郑迪威　 曾旋　 (74)专利代理 机构 武汉科皓知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 42222 专利代理师 江慧 (51)Int.Cl. C12N 5/00(2006.01) C12N 5/04(2006.01) C12N 1/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01)C12N 1/14(2006.01) C12N 1/12(2006.01) G01N 21/64(2006.01) A61K 47/69(2017.01) A61K 41/00(2020.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种带壁细胞表 面修饰高分子的方法、 被修 饰后的细胞及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种带壁细胞表面修饰高分 子的方法、 被修饰后的细胞及其应用， 所述方法 包括： 将培养或提取的带壁细胞置于含有高分子 的高渗透溶液中孵育， 获得第一混合液； 将所述 第一混合液离心以除去所述含有高分子的高渗 透溶液， 获得第一细胞沉淀物； 将所述第一细胞 沉淀物置于含有高分子的低渗透溶液中孵育， 获 得第二混合液； 后离心以除去含有高分子的低渗 透溶液， 获得第二细胞沉淀物； 将所述细胞沉淀 物置于磷酸盐缓冲溶液或生理盐水中， 获得被修 饰后的细胞。 该方法利用带壁细胞在高渗溶液和 低渗溶液中发生的质壁分离和复原的现象， 使高 分子在渗透压的作用下与细胞壁网络发生缠结， 实现对带壁细胞的修饰。 该方法具有经济、 便捷、 高效、 多元的特点。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 114958712 A 2022.08.30 CN 114958712 A 1.一种带壁细胞表面 修饰高分子的方法， 其特 征在于， 所述方法包括： 将培养或提取的带壁细胞置 于含有高分子的高渗透溶 液中孵育， 获得第一混合液； 将所述第一混合液离心以除去所述含有高分子的高渗透溶 液， 获得第一细胞沉淀物； 将所述第一细胞沉淀物置 于含有高分子的低渗透溶 液中孵育， 获得第二混合液； 将所述第二混合液离心以除去所述含有高分子的低渗透溶 液， 获得第二细胞沉淀物； 将所述细胞沉淀物置 于磷酸盐缓冲溶 液或生理盐水中， 获得被修饰后的细胞。 2.根据权利要求1所述的一种带壁细胞表面修饰高分子的方法， 其特征在于， 所述含有 高分子的高渗透溶液的配方为： 质量分数为20～40％的氯化钠或蔗糖或葡萄糖， 质量分数 为1～10％的高分子材 料， 用磷酸盐缓冲溶 液或生理盐水 溶解。 3.根据权利要求1所述的一种带壁细胞表面修饰高分子的方法， 其特征在于， 所述含有 高分子的低渗透溶液的配方为： 质量分数为0～30％的氯化钠或蔗糖或葡萄糖， 质量分数为 1～10％的高分子材 料， 用磷酸盐缓冲溶 液或生理盐水 溶解。 4.根据权利要求2或3所述的一种带壁细胞表面修饰高分子的方法， 其特征在于， 所述 高分子材 料包括聚合物， 所述高分子包括 荧光高分子、 光敏剂修饰的高分子中的一种。 5.根据权利要求2或3所述的一种带壁细胞表面修饰高分子的方法， 其特征在于， 所述 带壁细胞包括细菌、 真菌、 藻类和植物细胞中的一种。 6.根据权利要求1所述的一种带壁细胞表面修饰高分子的方法， 其特征在于， 所述孵育 的时间均为5～ 20min。 7.一种采用权利要求1 ‑6任一项所述方法获得的被修饰后的细胞。 8.权利要求7 所述的被修饰后的细胞在生物医药 领域中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958712 A 2一种带壁细胞表面修饰高分子的方 法、 被修饰后的细胞及其 应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 特别涉及一种带壁细胞表面修饰高分子的方法、 被修饰后的细胞及其应用。 背景技术 [0002]近年来， 活细胞在生物医药领域的应用受到了广泛的关注， 它们有的能改变生理 环境， 有的对特定生理环境具有靶向能力， 能够响应刺激， 并且可以在温和环 境下产生生理 活性物质， 相比传统非生物材料具有独特的优势。 然而， 天然细胞所发挥的功能有限， 因此， 用材料对细胞进行功能修饰成为 一种增强细胞功能的有效选择。 [0003]利用高分子材料对细胞进行修饰是一种广泛的修饰方法。 高分子材料大多具有特 殊的结构和良好的生物相容性， 且通过接枝小分子可以形成多种功能化材料， 同时可修饰 的细胞种类较为广泛。 根据已有研究发现， 常见的高分子修饰细胞的方法有以下几种： (1) 点击化学反应； (2)生物偶联反应； (3)物理吸附； (4)基因编辑。 其中， 点击化学反应， 如： 无 铜催化的二苯并环辛炔 ‑叠氮反应所需试剂的较为昂贵， 操作步骤较多， 有铜催化的炔 ‑叠 氮反应对细胞本身具有一定的毒性； 生物偶联反应， 如： EDC/NHS反应只能作用于羧基与氨 基的连接， 且对细胞的接枝率不高； 静电吸附法所需的操作较为繁琐， 同时会对细胞活力造 成损伤； 通过基因编辑制造高分子材料的修饰位点， 需要花费较长的时间并且成本较高， 不 具备灵活性。 [0004]因此需要开发一种操作简便、 成本低、 对带壁细胞活性影响较小并且稳定 的修饰 方法。 发明内容 [0005]本发明目的是提供一种带壁细胞表面修饰高分子的方法， 该方法利用带壁细胞在 高渗溶液和低渗溶液中发生的质壁分离和复原的现象， 使高分子在渗透压的作用下与细胞 壁网络发生缠结， 实现对带壁细胞的修饰。 该方法具有经济、 便捷、 高效、 多元的特点， 为利 用带壁细胞基材料进 行疾病诊断和治疗带来了新的福音， 在生物医药领域有良好的应用前 景。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0007]在本发明的第一方面， 提供了一种带壁细胞表面修饰高分子 的方法， 所述方法包 括： [0008]将培养或提取的带壁细胞置于含有高分子的高渗透溶液中孵育， 获得第一混合 液； [0009]将所述第一混合液离心以除去所述含有高分子的高渗透溶液， 获得第一细胞沉淀 物； [0010]将所述第一细胞沉淀物置 于含有高分子的低渗透溶 液中孵育， 获得第二混合液；说　明　书 1/6 页 3 CN 114958712 A 3