(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210596968.X (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 安徽中医药大学 地址 230012 安徽省合肥市新站区前江路1 号 （少荃湖校区） (72)发明人 程志非　桂双英　王琪　冯乙巳　 (74)专利代理 机构 北京知联天下知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11594 专利代理师 韩艺珠 (51)Int.Cl. A61K 47/64(2017.01) A61K 31/4745(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种可变形态的喜树碱多肽纳米制剂及其 制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种可变形态的喜树碱多肽 纳米制剂及其制备方法和应用， 所述喜树碱纳米 制剂包括两亲性多肽和喜树碱衍生物； 所述喜树 碱衍生物 通过二硫键共价连接到两亲性多肽上。 所述喜树碱多肽纳米制剂具有酸响应性和形态 转变性。 在正常生理条件下维持纳米颗粒结构， 保障其在肿瘤部位的渗透性； 在肿瘤微环境微酸 条件下， 该制剂形态由纳米颗粒转变为长度不小 于200nm的纳米纤维， 可以提高喜树碱的滞留能 力， 增加其在肿瘤部位的浓度， 以降低给药浓度， 实现高效杀伤癌细胞； 所述喜树碱多肽纳米制剂 具有特异性， 癌细胞过表达的GSH还原二硫键释 放喜树碱原药， 可以降低喜树碱在血液循环中对 正常细胞的毒副作用， 实现特异性杀伤癌细胞。 权利要求书2页 说明书11页 序列表4页 附图12页 CN 115252810 A 2022.11.01 CN 115252810 A 1.一种可变形态的喜树碱多肽纳米制剂， 其特征在于， 所述喜树碱纳米制剂包括两亲 性多肽和喜树碱衍 生物； 所述喜树碱衍 生物通过二硫键共价连接 到两亲性多肽上。 2.根据权利要求1所述的喜树碱多肽纳米制 剂， 其特征在于， 所述两亲性多肽的氨基酸 序列中包括交替连接的亲 水性氨基酸、 疏 水性氨基酸和中间的半胱氨酸； 其中， 亲水性氨基酸和疏 水性氨基酸数量相同， 均小于等于六个。 3.根据权利要求2所述的喜树碱多肽纳米制 剂， 其特征在于， 所述亲水性氨基酸包括侧 链基团带正电荷和负电荷的氨基酸， 且带正电荷的亲水性氨基酸个数和带负电荷的亲水性 氨基酸个数相等， 均小于等于三个。 4.根据权利要求3所述的喜树碱多肽 纳米制剂， 其特 征在于， 所述侧链基团带正电荷的氨基酸包括精氨酸、 赖氨酸或组氨酸中的任意一种， 所述侧 链基团带负电荷的氨基酸包括谷氨酸或天 冬氨酸中的任意 一种； 所述疏水性氨基酸包括色氨酸、 苯丙氨酸、 缬氨酸、 亮氨酸、 异亮氨酸、 丙氨酸、 脯氨酸 或甲硫氨酸中的任意 一种。 5.根据权利要求1或2所述的喜树碱多肽纳米制剂， 其特征在于， 所述两亲性多肽包括 如SEQ ID NO 1～18任一项所述的氨基酸序列。 6.根据权利要求1或2所述的喜树碱多肽纳米制剂， 其特征在于， 所述两亲性多肽的氨 基酸序列如SEQ  ID NO 14所示。 7.根据权利要求6所述的喜树碱多肽纳米制 剂， 其特征在于， 所述喜树碱纳米制 剂包括 如下结构式所示的化 合物： 8.根据权利要求6所述的喜树碱多肽纳米制 剂， 其特征在于， 所述可变形态的喜树碱多 肽纳米制剂的形态在肿瘤微环境 微酸条件下由纳米颗粒转变为纳米纤维； 其中， 微酸条件为pH为6.1～6.9的水 溶液； 所述纳米颗粒的直径为3 0～100nm； 所述纳米纤维的长度大于等于 500nm； 所述纳米纤维的宽度为10～6 0nm； 所述纳米纤维的构象包括α －螺 旋、 β －折叠或β －发夹中的任意 一种或两种的组合。 9.一种可变形态的喜树碱多肽 纳米制剂的制备 方法， 其特 征在于， 所述制备 方法包括： 合成喜树碱衍 生物和亲 疏水交替的两亲性多肽； 将喜树碱衍 生物与两亲性多肽进行偶联， 得到 喜树碱多肽；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115252810 A 2在中性条件下将所述喜树碱多肽进行自组装， 得到可变形态的喜树碱多肽 纳米制剂。 10.根据权利要求9所述的喜树碱多肽 纳米制剂的制备 方法， 其特 征在于， 两亲性多肽分子采用固相合成技 术合成； 喜树碱衍生物以喜树碱为基础反应物， 在有机碱存在下与三光气反应生成酰氯中间 体， 酰氯中间体再与2－[2－(吡啶基)连硫基]乙醇反应得到 喜树碱衍 生物。 11.根据权利要求9所述的喜树碱多肽 纳米制剂的制备 方法， 其特 征在于， 采用巯基－二巯基交换反应技术将喜树碱衍生物与两亲性多肽分子进行偶联， 具体包 括以下步骤： 以无水DMSO为溶剂， 在氮气氛围下喜树碱衍生物与两亲性多肽混合， 室温搅拌反应， 反 应完全后过 滤除去固体杂质， 再加入冷乙醚 沉析出产物， 洗涤并干燥， 得到 喜树碱多肽。 12.根据权利要求9所述的喜树碱多肽 纳米制剂的制备 方法， 其特 征在于， 喜树碱多肽进行自组装的非共价键相互作用力包括氢键、 疏水相互作用、 π－π相互作 用或范德华力中的任意一种或至少两种的组合， 将所述喜树碱多肽进 行自组装通过在中性 条件下对喜树碱多肽进行 退火、 自然降温至室温和静置后得到； 其中， 中性条件的pH为7.3～7.6的水 溶液； 退火温度为75～85℃， 退火时间为25～3 5min； 静置时间为10～15 h。 13.一种如权利要求1－8任一项所述的喜树碱多肽纳米制剂或者采用权利要求9－12 任一项所述的制备 方法制备的喜树碱多肽 纳米制剂在制备抗癌细胞 药物上的应用； 所述喜树碱多肽纳米制 剂的给药方式包括尾静脉给药、 皮下给药或腹腔给药中的任意 一种。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115252810 A 3