(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210578625.0 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 南京鼓楼医院 地址 210008 江苏省南京市 鼓楼区中山路 321号 (72)发明人 张舒　朱运　赵晶　邹晓平　王雷　 吕瑛　 (74)专利代理 机构 南京钟山专利代理有限公司 32252 专利代理师 戴朝荣 (51)Int.Cl. A61K 47/46(2006.01) A61K 31/4418(2006.01) A61P 1/18(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/04(2006.01) C12N 5/071(2010.01) C12N 5/09(2010.01) (54)发明名称 一种靶向肝星状细胞并抑制其激活的载药 外泌体及其制备和应用 (57)摘要 本发明提供一种靶向肝星状细胞并抑制其 激活的载药外泌体， 所述载药外泌体由用于抑制 肝星状细胞活化的抗纤维化药物导入到具有肝 星状细胞靶向性的外泌体中获得， 所述具有肝星 状细胞靶向性的外泌体来源于胰腺癌细胞系。 本 发明提供的肝星状细胞靶向载药外泌体对肿瘤 和肝星状细胞的体外增殖实验得到了预期安全 的治疗效果， 对肝星状细胞干预后的Western   blot实验亦表明其可以抑制肝星状细胞活化。 利 用本发明的肝星状细胞靶向载药外泌体干预纤 维化转移前生态位的形成， 为抑制胰腺癌的肝转 移提供可能， 亦为其他肿瘤转移的治疗提供了启 示。 权利要求书1页 说明书4页 附图3页 CN 115475250 A 2022.12.16 CN 115475250 A 1.一种靶向肝星状细胞并抑制其激活的载药外泌体， 其特征在于， 所述载药外泌体由 用于抑制肝星状细胞活化的抗纤维化药物导入到具有肝星状细胞靶向性的外泌体中获得， 所述具有肝星状细胞靶向性的外泌体来源于胰腺癌细胞系。 2.根据权利要求1所述的一种靶向肝星状细胞并抑制其激活的载药外泌体， 其特征在 于， 所述胰腺癌细胞系的来源包括但 不限于人体胰腺癌细胞系MIA ‑Paca2、 小鼠胰腺癌细胞 系mT7。 3.根据权利要求1所述的一种靶向肝星状细胞并抑制其激活的载药外泌体， 其特征在 于， 所述用于抑制肝星状细胞活化的抗纤维化药物包括但不限于吡非尼酮。 4.根据权利要求1所述的一种靶向肝星状细胞并抑制其激活的载药外泌体， 其特征在 于， 通过以下 方法制备： S1、 培养胰腺癌细胞， 收取条件培养基， 经过差速离心、 超滤浓缩、 超离或加入外泌体提 取试剂孵育， 离心后获取胰腺癌细胞来源外泌体； S2、 PBS重悬外泌体沉淀后， 加入吡非尼酮溶液， 经过循环冻融、 探头超声、 水浴平衡、 超 滤多余游离药物后获得目的产物。 5.如权利要求1 ‑4任一项所述的靶向肝星状细胞并抑制其激活 的载药外泌体在制备治 疗胰腺癌肝 转移药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115475250 A 2一种靶向肝星状细胞并抑制其激活的载药外泌体及其制备和 应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医药技术领域， 具体涉及 一种靶向肝星状细胞并抑制其激活的载 药外泌体及其制备和应用。 背景技术 [0002]胰腺导管腺癌(PDAC)是公认最具侵袭性 的癌症之一， 在所有恶性肿瘤 中5年生存 率最低， 仅仅只有约10％， 其恶性程度极高与一系 列因素有关， 最突出的原因可能在于它的 高转移潜能。 在所有容易发生远处转移的器官中， 最常见的远处转移部位是肝脏(76 ‑ 80％)。 肿瘤转移的 “种子和土壤 ”学说中， 癌细胞和远处微环 境之间的相互作用优化了循环 肿瘤细胞定植的可能。 原发肿瘤中的癌细胞在扩散之前， 提前在次级器官诱导形成有利于 其转移侵袭的微环境， 即转移前生态位。 [0003]原发肿瘤来源的细胞外囊泡(EV， 包括外泌体Exosome)和转移器官的局部间质微 环境极大程度上决定了转移的发生。 外泌体大小约为40～160nm， 起源于内泌体， 参与体内 的多种生理和包括肿瘤转移在内的病理过程。 例如， 外泌体内EGFR从胃癌细胞到肝星状细 胞的转运， 通过增强肝脏中的HGF(肝细胞生长因子)信号通路， 促进了肝脏特异性的转移。 微环境纤维化的发生具有隐蔽性， 循环中的肿瘤细胞黏附在这个微环境上可以被激活， 从 而促进增殖。 因此， 急需一种靶向肝星状细胞并抑制其激活的载 药外泌体。 发明内容 [0004]研究证明， 来源于胰腺原发肿瘤的外泌体可以被肝星状细胞(HSCs)摄取， 上调 HSCs中α‑SMA和纤维连接蛋白的产生， 从而在肝脏形成纤维化的微环 境， 这揭示了胰腺癌原 发肿瘤来源外泌体可以克服微环境纤维化发生的 隐蔽性， 具有精准靶向到达肝星状细胞的 潜力。 本发明的目的是提供一种靶向肝星状细胞并抑制其激活的载药外泌体及其制备和应 用， 以干预主要由肝星状细胞活化引起的纤维化微环境的发生， 从而对胰腺癌肝转移起到 抑制作用， 以解决上述背景中提出的问题。 [0005]为实现上述目的， 本发明采用以下技 术方案： [0006]一种靶向肝星状细胞 并抑制其激活的载药外泌体， 所述载药外泌体由用于抑制肝 星状细胞活化的抗纤维化药物导入到具有肝星状细胞靶向性的外泌体中获得， 所述具有肝 星状细胞靶向性的外泌体来源于胰腺癌细胞系。 [0007]为优化上述 技术方案， 采取的具体措施还 包括： [0008]进一步地， 所述胰腺癌细胞系的来源包括但不限于人体胰腺癌细胞系MIA ‑Paca2、 小鼠胰腺癌细胞系mT7。 [0009]进一步地， 所述用于抑制肝星状细胞活化的抗纤维化药物包括但不限于吡非尼 酮。 [0010]进一步地， 所述靶向肝星状细胞并抑制其激活的载 药外泌体通过以下 方法制备：说　明　书 1/4 页 3 CN 115475250 A 3