(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210590641.1 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 华中科技大 学同济医学院附属协和 医院 地址 430022 湖北省武汉市江汉区解 放大 道1277号协和医院 (72)发明人 金阳　陈文娟　谭淇　邓晶晶　 (74)专利代理 机构 武汉泰山北斗专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 42250 专利代理师 程千慧 (51)Int.Cl. A61K 9/50(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 31/405(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 包载代谢抑制剂的肿瘤微颗粒制备方法和 应用 (57)摘要 本发明涉及一种包载代谢抑制剂的肿瘤微 颗粒制备方法和应用， 所述制备方法包括以下步 骤： 1、 培养肿瘤细胞,生长稳定后， 向培养基中加 入他汀类药物； 2、 紫外线照射肿瘤细胞， 之后将 肿瘤细胞放入细胞培养箱孵育22 ‑26小时； 3、 孵 育完毕后， 收集细胞上清， 经梯度离心得到包载 代谢抑制剂的肿瘤微颗粒。 本发 明将肿瘤来源的 细胞外颗粒(TMPs)作为载药平台， 制备过程简 易， 保留生物安全性、 生物兼容性、 靶向性、 细胞 间通讯等功能； 本发明发现他汀类药物新用途， 实现以极低剂量的药物抑制肿瘤生长， 并调节肿 瘤代谢及改善肿瘤微环境， 具有增强化疗疗效， 延缓化疗耐药的潜能。 权利要求书1页 说明书5页 附图6页 CN 115068439 A 2022.09.20 CN 115068439 A 1.包载代谢抑制剂的肿瘤微颗粒制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤1、 培 养肿瘤细胞,生长稳定后， 向培 养基中加入他汀类药物； 步骤2、 紫外线照射肿瘤 细胞， 之后将肿瘤 细胞放入细胞培 养箱孵育22‑26小时； 步骤3、 孵 育完毕后， 收集细胞 上清， 经梯度离心得到包载代谢抑制剂的肿瘤微颗粒。 2.根据权利要求1所述的包载代谢抑制 剂的肿瘤微颗粒制备方法， 其特征在于， 所述步 骤1中， 每108个肿瘤细胞加入0.2m mol/L氟伐他汀。 3.根据权利要求1所述的包载代谢抑制 剂的肿瘤微颗粒制备方法， 其特征在于， 所述步 骤2中紫外线照射时间为20分钟。 4.根据权利要求1所述的包载代谢抑制 剂的肿瘤微颗粒制备方法， 其特征在于， 所述步 骤2中的孵 育时间为24小时。 5.包载代谢抑制剂的肿瘤微颗粒， 其特征在于， 由上述权利要求1 ‑4中任一种方法制备 得到。 6.权利要求5中的包载代谢抑制剂的肿瘤微颗粒在治疗癌症的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115068439 A 2包载代谢抑制剂的肿瘤微颗粒制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医药领域， 具体讲的是一种包载代谢抑制剂的肿瘤微颗粒制备方 法和应用。 背景技术 [0002]细胞外囊泡(EVs)是由细胞释放到细胞外空间的膜源性囊泡， 在细胞间通讯中扮 演重要角色， 以调节生理或病理过程。 细胞出芽脱落的EVs又称为细胞外颗粒(MPs)， 其大小 范围为15 0‑1000nm。 [0003]肿瘤细胞来源的MPs(TMPs)通过细胞间通讯加速肿瘤生长和促进转移， 并介导生 成免疫抑制型肿瘤微环境(TME)。 另外TMPs可作为生物靶向递送载体， 运输小分子化合物、 脂质、 蛋白质或核酸等。 TMPs的治疗优点有如下几点： 1)低免疫源性； 2)相较于合成的纳米 颗粒， 自体TMPs毒副作用降低； 3)靶向细胞递送货物； 4)良好的细胞膜融合性。 正因TMPs有 如上的优势， 如今许多学术团队和公司正 致力于研发基于TMPs治疗癌症的方法。 [0004]早在2019年， 我们团队研发自体肿瘤来源微颗粒包裹甲氨蝶呤(TMP ‑MTX)用于治 疗晚期肺癌伴恶性胸腔积液的患者， 取得一定成效， 相关成果已发表于Science   Translational  Medicine。 目前， TMPs装载治疗性货物到的方法有： 1)提取自分泌TMPs前， 细胞过表达货物， 如目标蛋白、 miRNA等； 2)使用物理方法， 如电穿孔增加膜通透性； 3)经化 学处理， 如共孵 育， 使得TMPs装载siRNA、 小分子化 合物等货物。 [0005]此外， 我们团队研究良、 恶性胸腔积液中EVs代谢组学， 发现在葡萄糖代谢、 氨基酸 代谢及脂质代谢均有差异， 相关成果发表在Journal  of Extracellular Vesicles。 不少研 究以肿瘤代谢为突破口， 探索新的治疗策略。 众所周知， 癌细胞的葡萄糖代谢活跃， 特别是 有氧糖酵解， 即 “Warburg效应 ”。 葡萄糖的代谢产物： 乳酸在肿瘤细胞代谢过程中不断产生。 过量的乳酸积累使细胞内环境酸化， 并对细胞活力造成损害。 此外， 肿瘤细胞微环境酸化， 促进了免疫细胞的侵袭和转移， 也削弱了免疫细胞 的抗肿瘤功 能。 因此抑制 乳酸转运是治 疗癌种策略之一， 引起癌细胞酸化死亡的同时， 调节肿瘤免疫微环 境。 单羧酸转运体(MCTs) 作为主要的乳酸运输蛋白持续运作， 以平衡细胞内外乳酸环 境。 在MCTs家族中， MCT4在 多个 癌种中高表达， 主要将乳酸从糖酵解细胞运输到细胞外间隙。 MCT4还与肝癌、 前列腺癌、 肺 癌等癌症患者的不良预后相关。 长期以来， MCT4一直是肿瘤治疗领域的研究目标， 在肿瘤中 敲除MCT4的表达具有令人满意的抗肿瘤作用。 近两年来， 有研究者制备负载siMCT4(一种抑 制MCT4表达的小干扰RNA)的纳米材 料， 在动物水平应用于 乳腺癌等癌症治疗。 [0006]他汀类药物作为著名的脂代谢抑制剂， 是心血管系统的常用药， 可预防心梗等不 良心血管事件。 据报道， 他汀类药物治疗可引起0.5 ‑1.0％患者出现有症状的不良反应， 如 肌肉疼痛或肌无力。 多项临床研究探讨他汀类药物得出结论： 使用他汀类药物在抗癌方面 具有正面作用， 例如降低癌症发生率、 延长癌症患者生存期 。 但是他汀类代谢抑制剂并未纳 入癌症预防及治疗指南， 提 示单独使用他汀类药物抑制肿瘤生长的效果是有限的。 [0007]抑制MCT4蛋白可以通过使用si RNA、 VB124、 CB ‑2M、 CHC或其他小分子的各种药物干说　明　书 1/5 页 3 CN 115068439 A 3