(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210594470.X (22)申请日 2022.05.27 (71)申请人 西安交通大 学 地址 710049 陕西省西安市咸宁西路28号 (72)发明人 闫瑾　尤伟名　 (74)专利代理 机构 西安鼎迈知识产权代理事务 所(普通合伙) 6126 3 专利代理师 刘喜保 (51)Int.Cl. C07K 14/47(2006.01) C07K 1/107(2006.01) A61K 38/17(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 47/52(2017.01) A61K 9/51(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种包含GdOF的多肽杂化物及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种包含GdOF的多肽杂化物 及其制备方法， 属于生物工程技术领域。 该多肽 杂化物的制备方法包括： 将多肽加入到NH2‑PEG‑ SH的乙醇溶液中， 待所述多肽完全溶解后加入 HEPES和HAuCl4加热搅拌制得多肽 ‑金聚合物纳 米壳； 将HEPES、 GdOF和HAuCl4混合搅拌， 与所述 多肽‑金聚合物纳米壳加热搅拌形成制得所述包 含GdOF的多肽杂化物。 本发明提供了一种简单有 效的多肽杂化物制备方法， 制备了基于钆 ‑金的 核壳纳米杂化物， 克服了多肽在免疫治疗中增敏 癌症的药理学障碍 。 权利要求书1页 说明书7页 附图6页 CN 114751972 A 2022.07.15 CN 114751972 A 1.一种包含GdOF的多肽杂化物的制备方法， 其特征在于， 包括： 将多肽加 入到NH2‑PEG‑ SH的乙醇溶液中， 待所述多肽完全溶解后加入HEPES和HAuCl4加热搅拌制得多肽 ‑金聚合物 纳米壳； 将HEPES、 GdOF和HAuCl4混合搅拌， 与所述多肽 ‑金聚合物纳米壳加热搅拌形 成制得所述 包含GdOF的多肽杂化物。 2.根据权利要求1所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法， 其特征在于， 所述多肽包 括Bcl9肽。 3.根据权利要求2所述的包含G dOF的多肽杂化物的制备方法， 其特征在于， 每0.1～4mg 所述Bcl9肽配合0.45～ 2.25mg所述GdOF制得 所述包含GdOF的多肽杂化物。 4.根据权利要求1所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法， 其特征在于， 所述加热搅 拌制得多肽 ‑金聚合物纳米壳为30～80℃， 200～800rpm下混合5～30min； 所述加热搅拌形 成制得所述包含GdOF的多肽杂化物为3 0～80℃， 20 0～800rpm下混合5～3 0min。 5.根据权利要求1所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法， 其特征在于， 以质量比 计， 所述多肽与所述 NH2‑PEG‑SH的配比为1:1。 6.根据权利要求5所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法， 其特征在于， 所述NH2‑ PEG‑SH的分子量 为2K。 7.根据权利要求1～6任一项所述的包含GdOF的多肽杂化物的制备方法， 其特征在于， 包括： 每0.1～4mg所述Bcl9肽添加到2.25mL含有2mg所述NH2‑PEG‑SH的水溶液中； 待所述Bcl9 肽完全溶解后， 加入2.25mL  50mM pH6.5～8.0的HEPES溶液和500 μL  10mM的HAuCl4水溶液， 30～80℃， 200～800rpm下混合5～30min， 制得所述多肽 ‑金聚合物纳米壳； 每2.25mL  50mM  pH6.5～8.0所述HEPES水溶液与2.25mL  0.2～1mg/mL所述GdOF溶液和500 μL  10mM HAuCl4 水溶液混合； 搅拌5～30分钟后与所述多肽 ‑金聚合物纳米壳在30～80℃、 200～800rpm下混 合5～30分钟， 制得所述包含GdOF的多肽杂化物； 所述GdOF溶液为所述GdOF分散在20％乙腈 和80％标准PBS中。 8.一种包含GdOF的多肽杂化物， 其特征在于， 采用权利要求1～7中任一项所述的方法 制备。 9.权利要求8所述的包 含GdOF的多肽杂化物在肿瘤抑制类药物制备中的应用。 10.权利要求8所述的包 含GdOF的多肽杂化物 协同抗PD1抗体类药物制备中的应用。 11.权利要求1～7中任一项所述的方法在多肽类药物制备中的应用。 12.权利要求1～7中任一项所述的方法在肿瘤抑制类药物制备中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114751972 A 2一种包含GdOF的多肽杂化物及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技 术领域， 涉及一种包 含GdOF的多肽杂化物及其制备 方法。 背景技术 [0002]免疫检查点抑制剂(ICI)， 如抗PD1、 抗CTLA4， 在癌症临床治疗中得到了广泛的应 用。 由于癌症患者对ICI的免疫反应， 正成为免疫治疗的主要障碍， 这使得只有少数患者可 以从免疫检查点阻断(ICB)治疗中受益。 相关机制研究表明， 这种低敏感性与免疫抑制肿瘤 微环境密切相关， 它会减弱T细胞(Teff)的浸润能力和活性以及 治疗性树突状细胞(DCs)的 聚集， 从而导 致免疫逃避。 因此， 迫切需要开发一种可以增强肿瘤对ICI敏感的药物。 [0003]现有研究表明， Wnt/β ‑catenin蛋白通路的激活与癌症中出现的免疫逃避呈正相 关。 例如， 在CRC的免疫组织化学分析中， β ‑catenin在癌症中的过表达会显著降低CD8+T细 胞(抗肿瘤免疫中的关键效应免疫细胞)对肿瘤浸润。 此外， TCGA分析研究表明， β ‑catenin 在非T细胞炎症肿 瘤中高表达。 在转移性黑色素瘤模型中， 肿瘤内异常激活的β ‑catenin可 以引起T细胞排斥和抵抗ICI治疗。 这些发现为开发靶向β ‑catenin途径的生物活性抑制剂 联合免疫检查 点阻断剂提供了强有力的理论基础， 以克服耐ICI药性并增强免疫 治疗。 [0004]β‑catenin抑制剂难以直接结合β ‑catenin干预癌症治疗， 其上游通路的相关靶点 抑制剂会导致正常细胞的发育障碍， 并引起大量副作用。 据报道， bcl9(B ‑cell/Lymphoma ‑ 9)是细胞核β ‑catenin在下游通路中的共激活剂， 可将β ‑catenin转运至TCF并促进Wnt相关 转录基因的表达， 其中许多与肿瘤发生和恶性进展密切相关。 此外， Bcl9在癌症细胞中也过 表达， 它的缺 失可以有效抑制β ‑catenin依赖性癌症模 型中的肿瘤发生和侵袭。 bcl9仅采用 α‑螺旋的方式与β ‑catenin的第一个Arm结合， 对其他蛋白与β ‑catenin的相互作用几乎没 有影响。 [0005]基于上述机制， 目前已开发出大量可用于癌症治疗中阻断β ‑catenin/Bcl9相互作 用的生物活性肽， 例如hsBCL9CT ‑2424、 磺基 ‑γ‑AA25、 ECRV26。 但由于细胞膜通透性差， 易 被蛋白酶降解， 导致该类药物难以用于临床。 纳米医学为开发一个安全有效的平台从而将 多肽递送至胞内相关靶点提供了一些有力工具。 尽管已经在几种纳米制剂中取得了一些成 功， 但由于合成过程复杂、 构建单元多样且成本高， 在临床转化应用方面仍不容乐观。 因此， 开发出一种简便、 易于规模化且与药物相容的纳米制剂， 能为免疫治疗中的联合用药提供 一种新参考。 发明内容 [0006]本发明目的在于解决由于多肽的细胞膜通透性差， 易被蛋白酶降解， 导致癌症治 疗中阻断β ‑catenin/Bcl9相互作用的生物活性肽实际应用效果 不佳的问题。 [0007]基于上述目的， 本发明提供了一种包含GdOF的多肽杂化物及其制备方法来解决本 领域内的这种需要。 [0008]一方面， 本发明涉及一种包含GdOF的多肽杂化物的制备方法， 其特征在于， 包括：说　明　书 1/7 页 3 CN 114751972 A 3