(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210591084.5 (22)申请日 2022.05.27 (71)申请人 重庆医科 大学 地址 400016 重庆市渝中区医学院路1号 申请人 冯玉林 (72)发明人 金艾顺　韩晓建　申美莹　王君凡　 张静　王易　 (74)专利代理 机构 重庆西南 华渝专利代理有限 公司 50270 专利代理师 郭桂林 (51)Int.Cl. C07K 14/725(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01)A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) G01N 33/574(2006.01) (54)发明名称 TCR或其抗原结合片段及其应用 (57)摘要 本发明属于T细胞免疫治疗药物技术领域， 具体涉及一种T细胞受体(TCR)或其抗原结合片 段及其应用， 该TCR包含由如SEQIDNO:15所示序 列编码得到的片段。 该TCR对K RAS‑G12D突变 具有 很强的特异性， 而且能介导T细胞分泌大量的 IFN‑γ细胞因子并杀死发生K RAS‑G12D基因突变 的肿瘤细胞。 权利要求书1页 说明书9页 序列表5页 附图2页 CN 114920824 A 2022.08.19 CN 114920824 A 1.TCR， 其特征在于， 包含α链可变区和β 链可变区； α链可变区包含如SEQ  ID NO:3所示 序列编码的α 链CDR3， β 链可变区包 含如SEQ ID NO:6所示序列编码的β 链CDR3 。 2.根据权利要求1所述的TCR， 其特征在于， α 链可变区还包含： 如SEQ  ID NO:1所示序列 编码的α 链CDR1和/或如SEQ  ID NO:2所示序列编码的α 链CDR2； β 链可变区还包含： 如SEQ  ID  NO:4所示序列编码的β 链CDR 1和/或如SEQ  ID NO:5所示序列编码的β 链CDR2。 3.根据权利要求1或2所述的TCR， 其特征在于， α链可变区还包含： 如SEQ  ID NO:7所示 序列编码的α 链FR1、 如SEQ  ID NO:8所示序列编码的α 链FR2、 如SEQ  ID NO:9所示序列编码 的α链FR3和如SEQ  ID NO:10所示序列编码的α链FR4中一种或多种； β链可变区还包含： 如 SEQ ID NO:11所示序列编码的β 链FR1、 如SEQ  ID NO:12所示序列编码的β 链FR2、 如SEQ  ID  NO:13所示序列编码的β 链FR3和如SEQ  ID NO:14所示序列编码的β 链FR4中一种或多种。 4.TCR， 其特 征在于， 包 含由如SEQ  ID NO:15所示序列编码得到的片段。 5.抗原结合片段， 其特 征在于， 包 含权利要求1至4中任一权利要求所述的TCR。 6.多核苷酸， 其特 征在于， 包 含如SEQ ID NO:3和SEQ  ID NO:6所示序列。 7.根据权利要求6所述的多核苷酸， 其特征在于， 还包含如SEQ  ID NO:1所示序列、 如 SEQ ID NO:2所示序列、 如SEQ  ID NO:4所示序列、 如SEQ  ID NO:5所示序列、 如SEQ  ID NO:7 所示序列、 如SEQ  ID NO:8所示序列、 如SEQ  ID NO:9所示序列、 如SEQ  ID NO:10所示序列、 如SEQ ID NO:11所示序列、 如SEQ  ID NO:12所示序列、 如SEQ  ID NO:13所示序列和如SEQ   ID NO:14所示序列中一种或多种。 8.多核苷酸， 其特 征在于， 包 含如SEQ ID NO:15所示序列。 9.表达载体， 其特 征在于， 包 含权利要求6 至8任一权利要求所述的多 核苷酸。 10.工程细胞， 其特 征在于， 包 含权利要求9所述的表达载体。 11.药物组合物， 其特征在于， 包含权利要求1至4中任一权利要求所述的TCR或权利要 求5所述的抗原结合片段或权利要求6至8中任一权利要求所述的多核苷酸或权利要求9所 述的表达载体或权利要求10所述的工程细胞， 和药 学上可接受的载体和/或稀释剂。 12.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的TCR或权利要求5所述的抗原结合片段或 权利要求6至8中任一权利要求所述的多核苷 酸或权利要求9所述的表达载体或权利要求 10 所述的工程细胞在制备用于提高T细胞分泌IFN ‑γ和/或Gr anzyme‑B细胞因子水平药物 中 的应用。 13.根据权利要求12所述的应用， 其特征在于， 用于提高T细胞分泌IFN ‑γ和/或 Granzyme ‑B细胞因子水平药物的包括蛋白类药物、 ADC药物或TCR与抗原组合药物。 14.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的TCR或权利要求5所述的抗原结合片段或 权利要求6至8中任一权利要求所述的多核苷 酸或权利要求9所述的表达载体或权利要求 10 所述的工程细胞在制备用于检测表达KRAS ‑G12D突变的肿瘤 细胞试剂或试剂盒中的应用。 15.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的TCR或权利要求5所述的抗原结合片段或 权利要求6至8中任一权利要求所述的多核苷 酸或权利要求9所述的表达载体或权利要求 10 所述的工程细胞在制备用于治疗携带 KRAS‑G12D突变导 致的疾病的药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114920824 A 2TCR或其抗原结 合片段及其应用 技术领域 [0001]本发明属于T细胞 免疫治疗药物技术领域， 具体涉及一种TC R或其抗原结合片段及 其应用。 背景技术 [0002]随着生物医药领域研究的进展， 靶向恶性实体瘤的T细胞免疫治疗的靶点选择在 不断演变， 从最初的谱系抗原变成了病毒抗原， 而随着近年来高通量测序技术的出现， 靶向 肿瘤个体突变成为了新 一代T细胞治疗聚焦的靶点。 [0003]T细胞治疗目前主要包括TCR ‑T和CAR‑T治疗手段。 目前CAR ‑T技术治疗在白血病、 淋巴病瘤等血液瘤的治疗中起到显著效果， 大大提高了患者生存率和生存质量， 但是针对 实体瘤， CAR ‑T治疗手段由于目前的特异性靶点有限， 大大限制了其应用前景。 TCR ‑T技术不 同于CAR‑T细胞技术， TCR是所有T细胞表面的特征性标志， 以非共价键与CD3结合， 形成TCR ‑ CD3复合物。 外周血中， 90％ ‑95％的T细胞表达TCR， 经过基因改造的TCR 的T细胞， 可以对肿 瘤细胞表面上的抗原分子进行特异 性识别， 进而针对肿瘤细胞产生免疫反应。 目前， 在人类 癌症中， KRAS基因为肿瘤学领域最著名的致癌基因之一， KRAS基因突变(KRAS ‑G12C突变、 KRAS‑G12D突变、 KRAS ‑G12V突变等)出现在接近90％的胰腺癌中， 30％ ‑40％的结肠癌中， 17％的子宫内膜癌中， 15％ ‑20％的肺癌包括小 叶性肺癌中， 以及胆管癌、 宫颈癌、 膀胱癌 等。 [0004]通过以上所述情况， 现需一种可以与KRAS突变多肽特异性结合， 并能介导T细胞对 KRAS突变的肿瘤 细胞进行 杀灭的TCR。 发明内容 [0005]本发明目的之一在于提供一种TCR， 可以靶向特异性识别KRAS ‑G12D突变位点， 与 KRAS‑G12D突变的多肽与HLA的复合体特异性结合， 从而刺激T细胞活化， 介导T细胞分泌 IFN‑γ等细胞因子， 进而杀伤表达KRAS ‑G12D突变基因的肿瘤细胞。 该TCR或其抗原结合片 段对KRAS ‑G12D突变的多肽特异性强， 而且能介导T细胞分泌大量的IFN ‑γ细胞因子， 杀灭 KRAS‑G12D突变的肿瘤 细胞。 [0006]本发明一方面 提供了一种TCR， 可以从以下两种TCR进行选择： [0007]第一种： TCR的α链可变区可以包含如SEQIDNO:3所示序列编码的α链CDR3， TCR的β 链可变区包 含如SEQIDNO:6所示序列编码的β 链CDR3 。 [0008]第二种： TCR可以包 含由如SEQ IDNO:15所示序列编码得到的片段。 [0009]本发明另一方面 提供了一种抗原结合片段， 可以包 含上述两种TCR中的任意 一种。 [0010]本发明再一方面 提供了一种多 核苷酸， 可以从以下两种多 核苷酸进行选择： [0011]第一种： 可以包 含如SEQIDNO:3和SEQ IDNO:6所示序列。 [0012]第二种： 可以包 含如SEQIDNO:15所示序列。 [0013]本发明再一方面 提供了一种表达载体， 可以包 含上述两种多 核苷酸中任意 一种。说　明　书 1/9 页 3 CN 114920824 A 3