(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210586671.5 (22)申请日 2022.05.27 (71)申请人 南开大学 地址 300071 天津市南 开区卫津路94 号 (72)发明人 王硕　胡耀中　王艺　 (74)专利代理 机构 天津合正知识产权代理有限 公司 12229 专利代理师 邢月　张艳梅 (51)Int.Cl. C07K 16/30(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 47/68(2017.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) A61K 49/00(2006.01)A61K 51/10(2006.01) (54)发明名称 一种TROP-2特异性纳米抗体及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种TROP ‑2特异性纳米抗体 及其应用， 所述的特异性纳米抗体为纳米抗体 60、 纳米抗体Nb65或纳米抗体Nb108中的至少一 种。 本发明所述的TROP ‑2特异性纳米抗体 可用于 多种肿瘤靶向治疗的临床开发， 还 可工程改造成 双特异性纳米抗体， 具有更强的特异性、 靶向性 和更低的脱靶毒性的靶向治疗药物， 可以有效避 免全长单克隆抗体治疗免疫逃逸和抗体耐药的 缺陷。 权利要求书1页 说明书5页 序列表7页 附图7页 CN 115232212 A 2022.10.25 CN 115232212 A 1.一种TROP ‑2特异性纳米抗体， 其特征在于： 所述的特异性纳米抗体为纳米抗体60、 纳 米抗体Nb6 5或纳米抗体Nb108中的至少一种； 所述的特异性纳米抗体包括3个互补决定区CDR 1、 CDR2、 CDR3； 对于纳米抗体Nb60： 所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述的CDR2的氨基 酸序列如SEQ  ID NO.2所示， 所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 对于纳米抗体Nb65： 所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO.4所示， 所述的CDR2的氨基 酸序列如SEQ  ID NO.5所示， 所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO.6所示； 对于纳米抗体Nb108： 所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO.7所示， 所述的CDR2的氨 基酸序列如SEQ  ID NO.8所示， 所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO.9所示。 2.根据权利 要求1所述的TROP ‑2特异性纳米抗体， 其特征在于： 所述的特异性纳米抗体 包括4个框架区FR 1、 FR2、 FR3、 FR4； 对于纳米抗体Nb60： FR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO.10所示， 所述的FR2的氨基酸序列 如SEQ ID NO.11所示， 所述的FR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO.12所示， 所述的FR4的氨基酸 序列如SEQ  ID NO.13所示； 对于纳米抗体Nb65： FR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO.14所示， 所述的FR2的氨基酸序列 如SEQ ID NO.15所示， 所述的FR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO.16所示， 所述的FR4的氨基酸 序列如SEQ  ID NO.17所示； 对于纳米抗体Nb108： FR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO.18所示， 所述的FR2的氨基酸序列 如SEQ ID NO.19所示， 所述的FR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO.20所示， 所述的FR4的氨基酸 序列如SEQ  ID NO.21所示。 3.根据权利要求2所述的TROP ‑2特异性纳米抗体， 其特征在于： 所述的纳米抗体Nb60的 氨基酸序列如SEQ  ID NO.22所示； 所述的纳米抗体Nb6 5的氨基酸序列如SEQ  ID NO.23所示； 所述的纳米抗体Nb108的氨基酸序列如SEQ  ID NO.24所示。 4.权利要求1 ‑3中任一项所述的TROP ‑2特异性纳米抗体的应用， 其特征在于： 所述的特 异性纳米抗体在制备用于肿瘤诊断的药物中的应用； 所述的药物通过荧光示踪或放射性标 记偶联的方法制成。 5.权利要求1 ‑3中任一项所述的TROP ‑2特异性纳米抗体的应用， 其特征在于： 所述的特 异性纳米抗体在制备AD C药物中的应用； 所述的ADC药物 通过由所述的特异 性纳米抗体与小 分子抗癌药物的偶联制得。 6.权利要求1 ‑3中任一项所述的TROP ‑2特异性纳米抗体的应用， 其特征在于： 所述的特 异性纳米抗体在制备用于肿瘤的靶向免疫治疗的药物中的应用； 所述的药物通过由所述的 特异性纳米抗体与肿瘤免疫检查 点抑制剂的偶联制得。 7.权利要求1 ‑3中任一项所述的TROP ‑2特异性纳米抗体的应用， 其特征在于： 所述的特 异性纳米抗体在制备用于血 液中肿瘤靶标的检测试剂中的应用。 8.权利要求1 ‑3中任一项所述的TROP ‑2特异性纳米抗体的应用， 其特征在于： 所述的特 异性纳米抗体在制备用于抗肿瘤的药物中的应用。 9.根据权利 要求8所述的TROP ‑2特异性纳米抗体的应用， 其特征在于： 所述的肿瘤为实 体瘤和/或转移瘤； 所述的实体瘤为 肝癌、 胃癌、 结直肠癌、 肺癌或胰腺癌中的至少一种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232212 A 2一种TROP ‑2特异性纳米抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药 领域， 尤其是 涉及一种TROP ‑2特异性纳米抗体及其应用。 背景技术 [0002]研究报道， 肿瘤相关钙信号转导蛋白2(TROP ‑2)在许多肿瘤组织的表达水平显著 高于正常组织， 其过表达与乳腺癌、 胰腺癌、 卵巢癌和前列腺癌等恶性肿瘤的预后不良、 患 者生存期缩短等密切相关。 目前靶向TROP ‑2抗肿瘤的研究大多基于单克隆抗体药物， 但由 于其高成本和生产过程的复杂性以及相对较大的尺寸阻止mAb渗透到实体瘤组织中， 并导 致全身积累等， 所以单克隆抗体的应用受到了一定的限制 。 在驼源动物外周血液中天然存 在一种重链抗体(H eavy Chain only  Antibodies,HCAbs)， 与传统单克隆抗体相比， 重链抗 体天然缺失轻链及重链第一恒定区(CH1)， 克隆并表达重链抗体的重链可变区得到重链抗 体的抗原识别和结合域， 称为纳米抗体(Nanobody,  Nb)， 作为最小的天然抗体(12 ‑15kDa)， 纳米抗体具有适合诊疗开 发的独特特性。 首先小分子尺寸使纳米抗体相对容易渗透到组织 中， 穿过血脑屏障； 其次在保持对抗原的高结合亲和力的同时， 纳米抗体长而灵活的CDR3区 允许与靶抗原的裂缝和空腔结合， 因此， 纳米抗体可以识别其他抗体难以识别的 隐藏表位； 此外， 纳米抗体可以更方便地设计成多个功能域以产生多价/多 特异性纳米抗体， 从而获得 更多的治疗应用功能； 除以上所述， 纳米抗体还具有可溶性极高， 不易发生聚集沉淀， 具有 很高的稳定性， 能够在高温、 强酸、 强碱等致变性条件下保持抗原结合活性， 适合于原核及 真核表达系统等优势， 因此， 纳米抗体更适 合开发临床诊疗体系。 发明内容 [0003]有鉴于此， 本 发明旨在克服现有技术中的缺陷， 提出一种TROP ‑2 特异性纳米抗体 及其应用。 [0004]为达到上述目的， 本发明的技 术方案是这样实现的： [0005]一种TROP ‑2特异性纳米抗体， 所述的特异性纳米抗体为纳米抗体60、 纳米抗体 Nb65或纳米抗体Nb108中的至少一种； [0006]所述的特异性纳米抗体包括3个互补决定区CDR 1、 CDR2、 CDR3； [0007]对于纳米抗体Nb60： 所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO.1 所示， 所述的CDR2 的氨基酸序列如SEQ  ID NO.2所示， 所述的CDR3  的氨基酸序列如SEQ  ID NO.3所示； [0008]对于纳米抗体Nb65： 所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO.4 所示， 所述的CDR2 的氨基酸序列如SEQ  ID NO.5所示， 所述的CDR3  的氨基酸序列如SEQ  ID NO.6所示； [0009]对于纳米抗体Nb108： 所述的CDR1的氨基酸序列如S EQ ID NO.7 所示， 所述的CDR2 的氨基酸序列如SEQ  ID NO.8所示， 所述的CDR3  的氨基酸序列如SEQ  ID NO.9所示。 [0010]进一步， 所述的特异性纳米抗体包括 4个框架区FR 1、 FR2、 FR3、  FR4； [0011]对于纳米抗体Nb60： FR1的氨基酸序列如SEQ  ID NO.10所示， 所述的FR2的氨基酸 序列如SEQ  ID NO.11所示， 所述的FR3的氨基酸序列如SEQ  ID NO.12所示， 所述的FR4的氨说　明　书 1/5 页 3 CN 115232212 A 3