(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210590458.1 (22)申请日 2022.05.27 (66)本国优先权数据 202110593226.7 2021.0 5.28 CN (71)申请人 百奥赛图 （北京） 医药 科技股份有限 公司 地址 102600 北京市大兴区中关村科技园 区大兴生物医药产业基地宝 参南街12 号院 (72)发明人 刘畅　尚诚彰　李惠琳　 (74)专利代理 机构 北京领科知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 11690 专利代理师 徐丹丹　张丹 (51)Int.Cl. C07K 14/705(2006.01)C12N 15/12(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A01K 67/027(2006.01) C12Q 1/02(2006.01) G01N 33/574(2006.01) G01N 33/68(2006.01) A61K 49/00(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 CD36基因人源化非人动物的构建方法及应 用 (57)摘要 本发明提供了一种人源化CD36蛋白、 一种人 源化CD36基因、 一种CD36基因的靶向载体、 一种 CD36基因人源化的非人动物及其构建方法和其 在生物医药领域的应用， 利用同源重组的方式将 编码人CD36蛋白的核苷酸序列导入非人动物基 因组中， 该动物 体内能正 常表达人或人源化CD36 蛋白， 可以作为人CD36信号机理研究、 肿瘤及自 身免疫性疾病药物筛选的动物模 型， 对免疫靶点 的新药研发具有重要的应用价 值。 权利要求书3页 说明书22页 序列表27页 附图7页 CN 114835798 A 2022.08.02 CN 114835798 A 1.一种人源化CD36蛋白， 其特征在于， 所述的人源化CD36蛋白包含人CD36蛋白的全部 或部分。 2.根据权利 要求1所述的人源化CD36蛋白， 其特征在于， 所述的人源化CD36蛋白包含人 CD36蛋白的胞外区、 跨膜区和/或胞质区的全部或部分， 优选的， 所述的人源化CD36蛋白包 含人CD36蛋白的胞外区的全部或部分， 进一步优选的， 包含人CD36蛋白的胞外区至少50个 连续氨基酸， 更优选包含SEQ  ID NO： 2第30 ‑439位所示氨基酸序列； 或者， 包含与SEQ  ID  NO： 2第30 ‑439位所示氨基酸序列同一性至少为90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％或至少99％； 或者， 包含与SEQ  ID NO： 2第30 ‑439位所示氨基酸序列差异不超过 10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2或不超过1个氨 基酸； 或者， 包含与SEQ  ID NO： 2第30‑439位所示的， 包 括取代、 缺失和 /或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列， 优选的， 所述的人源化CD36 蛋白还包含非人动物CD3 6蛋白的跨膜区和/或胞质区的全部或部分。 3.根据权利要求1或2所述的人源化CD36蛋白， 其特征在于， 所述的人源化CD36蛋白的 氨基酸序列包 含下列组中的任一种： A)SEQ ID NO： 11所示氨基酸序列； B)与SEQ ID NO： 11所示氨基酸序列同一性至少为85％、 90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％或至少9 9％； C)与SEQ ID NO： 11所示氨基酸序列 差异不超过10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2或不超过1个氨基 酸； 或 D)与SEQ ID NO： 11所示的， 包括取代、 缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸 序列。 4.一种编码权利要求1 ‑3任一项所述人源化CD3 6蛋白的核酸。 5.一种人源化CD3 6基因， 其特 征在于， 所述的人源化CD3 6基因包含人CD36基因的部分。 6.根据权利 要求5所述的人源化CD36基因， 其特征在于， 所述的人源化CD36基因包含人 CD36基因的1号至14号外显子的全部或部分， 优选的， 包含3号至14号外显子的全部或部分， 进一步优选的， 包含3号外显子的部分、 4号外显子至13号外显子的全部和14号外显子的部 分， 其中， 3号外显子的部分至少包含10bp的核苷酸序列， 14号外显子的部分至少包含30bp 的核苷酸序列。 7.根据权利要求5或6所述的人源化CD36基因， 其特征在于， 所述的人源化CD36基因包 含SEQ ID NO： 5所示的核苷酸序列； 或者， 包含与SEQ  ID NO： 5所示的核苷酸序列的同一性 至少为90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％或至少99％； 或者， 包含与SEQ   ID NO： 5所示的核苷酸序列差异不超过10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2或不超过1个核苷酸； 或者， 包 含具有SEQ  ID NO： 5所示的核苷酸序列所示的， 包括取代、 缺失和/或插入一个或多个核苷 酸的核苷酸序列。 8.根据权利要求5 ‑7任一项所述的人源化CD36基因， 其特征在于， 所述的人源化CD36基 因还包含非人动物CD36基因部 分， 优选包含非人动物CD 36基因的1 ‑3号和/或16号外显子的 全部或部分， 进一 步优选还 包含4号外显子的部分和/或15号外 显子的部分核苷酸序列。 9.根据权利要求5 ‑8任一项所述的人源化CD36基因， 其特征在于， 所述的人源化CD36基 因的核苷酸序列包 含下列组中的任一种： A)转录的mRNA为SEQ  ID NO： 10所示核苷酸序列；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114835798 A 2B)转录的mRNA与SEQ  ID NO： 10所示核苷酸序列的同一性至少为85％、 90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％或至少9 9％； C)转录的mRNA与SEQ  ID NO： 10所示核苷酸序列差异不超过10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2或不 超过1个核苷酸； D)转录的mRNA具有SEQ  ID NO： 10所示核苷酸序列的， 包括取代、 缺失和/或插入一个或 多个核苷酸的核苷酸序列； 或， E)包含SEQ ID NO： 6和/或7 所示的核苷酸序列。 10.一种靶向载体， 其特 征在于， 所述的靶向载体包 含下列组中的一种： A)编码人或人源化CD3 6蛋白的核苷酸序列； B)编码人CD36蛋白的胞外区、 跨膜区、 胞质区和/或信号肽的核苷酸序列的全部或部 分， 优选编码人CD3 6蛋白的胞外区的核苷酸序列的全部或部分； C)人或人源化CD3 6基因的核苷酸序列； 或， D)人CD36基因的1号至14号外显子的全部或部分， 优选的， 人CD36基因的3号至14号外 显子的全部或部分， 进一步优选的， 人CD 36基因的3号外显子的部分、 4号外显子至13号外显 子的全部和14号外显子的部分， 其中， 3号外显子的部分至少包含10bp的核苷酸序列， 14号 外显子的部分至少包含30bp的核苷 酸序列， 进一步优选包含SEQ  ID NO： 5所示核苷 酸序列； 或者， 包含与SEQ  ID NO： 5所示的核苷酸序列的同一性至少为90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％或至少99％； 或者， 包含与SEQ  ID NO： 5所示的核苷酸序列差异不超 过10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2或不超过1个核苷酸； 或者， 包含具有SEQ  ID NO： 5所示的核苷酸序 列所示的， 包括取代、 缺失和/或插 入一个或多个核苷酸的核苷酸序列。 11.根据权利要求10所述的靶向载体， 其特征在于， 所述的靶向载体还包含5 ’臂和/或 3’臂， 优选的， 所述的5 ’臂与NCBI登录号为NC_000071.7至少具有90％同源性的核苷酸， 进 一步优选的， 所述5 ’臂序列如SEQ  ID NO： 3所示； 优选的， 所述的3 ’臂与NCBI登录号为NC_ 000071.7至少具有90％同源性的核苷酸； 进一步优选的， 所述3 ’臂序列如SEQ  ID NO： 4所 示。 12.一种CD36基因人源化的非人动物的构建方法， 其特征在于， 所述的非人动物体 内表 达人或人源化CD3 6蛋白。 13.根据权利 要求12所述的构 建方法， 其特征在于， 所述人源化CD36蛋白为权利要求1 ‑ 3任一项所述的人源化CD3 6蛋白。 14.根据权利要求12所述的构建方法， 其特征在于， 所述的非人动物的基因组中包含权 利要求4所述的核酸或权利要求5 ‑9任一项所述的人源化CD3 6基因。 15.根据权利要求12 ‑14任一所述的构建方法， 其特征在于， 所述的构建方法包括将供 体核苷酸序列导入非人动物CD36基因座上， 优选的， 所述的供体核苷酸序列包含下列组中 的一种： A)编码人或人源化CD3 6蛋白的核苷酸序列； B)编码人CD36蛋白的胞外区、 跨膜区、 胞质区和/或信号肽的核苷酸序列的全部或部 分， 优选编码人CD3 6蛋白的胞外区的