(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210601512.8 (22)申请日 2022.05.30 (71)申请人 北京大学第三医院 （北京大 学第三 临床医学院） 地址 100191 北京市海淀区花园北路49号 (72)发明人 孙彦　崔立刚　梁晓龙　王淑敏　 (74)专利代理 机构 北京维澳专利代理有限公司 11252 专利代理师 段媛媛 (51)Int.Cl. A61K 49/22(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61K 47/61(2017.01) A61K 47/69(2017.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 前哨淋巴结双靶向造影剂、 制备方法、 应用 方法及用途 (57)摘要 本发明公开了一种前哨淋巴结双靶向造影 剂、 制备方法、 应用方法及用途， 前哨淋巴结双靶 向造影剂 包括： 外层、 中间层和内层； 外层的材料 包括壳聚糖、 纳米碳和透明质酸， 中间层的材料 包括磷脂酰丝氨酸， 内层的材料包括惰性气体。 本发明的前哨淋巴结双靶向造影剂、 制备方法、 应用方法及用途， 通过淋巴管途径， 利用造影剂 的亲巨噬细胞特性， 靶向SLB并肉眼可视及超声 增强， 通过血池途径， 利用透明质酸的亲肿瘤细 胞特性靶向肿瘤， 并利用纳米碳为光热治疗提供 靶点； 通过淋巴途径持续靶向前哨淋巴结， 保证 术后切除SLB与术前定位匹配； 通过淋巴途径与 血池途径， 匹配 淋巴途径的造影剂缺失及血池途 径的造影剂聚集情况 可诊断淋巴结转移情况。 权利要求书2页 说明书8页 附图1页 CN 114668863 A 2022.06.28 CN 114668863 A 1.一种前哨淋巴结双靶向造影剂， 其特 征在于， 包括： 外层、 中间层和内层； 所述外层的材料包括壳聚糖、 纳米碳和透明质酸， 所述中间层的 材料包括磷脂酰丝氨酸， 所述内层的材 料包括惰性气体。 2.根据权利要求1所述的前哨淋巴结双靶向造影剂， 其特征在于， 所述外层中， 所述壳 聚糖为条形结构， 所述纳米碳为 实心球形结构， 所述透明质酸为锥形结构， 所述壳聚糖和所 述纳米碳相互吸 附， 所述透明质酸通过羧基偶联在壳聚糖的氨基上， 所述透明质酸和所述 纳米碳均设置在所述壳聚糖外侧； 所述中间层中， 所述磷脂酰丝氨酸 为空心球形 结构。 3.根据权利要求1所述的前哨淋巴结双靶向造影剂， 其特征在于， 所述惰性气体包括 C3F8。 4.一种权利要求1 ‑3任一项所述的前哨淋巴结双靶向造影剂的制备方法， 其特征在于， 包括制备造影剂微泡、 在微泡表面组装纳米碳和在 装载纳米碳的微泡表面修饰透明质酸的 步骤。 5.根据权利要求4所述的前哨 淋巴结双靶向造影剂的制备方法， 其特征在于， 所述制备 造影剂微 泡包括： 制备表面活性剂包裹C3F8气体的ST68微泡超声造影剂， 具体包括： 将磷脂酰丝氨酸、 Span60和NaCl置于研钵中研磨， 分散于PBS中， 再加入Tween  80， 搅拌， 得到混合均匀的混悬 液； 对混合均匀的混悬 液进行高温高压处 理， 然后连续搅拌 冷却至室温； 向冷却后的混悬液中通入C3F8气体， 进行超声处理， 得到均匀的乳白色悬液， 将乳白色 悬液静置分层； 收集中间层微 泡， 并用PBS缓冲溶 液反复漂洗直至下层溶 液澄清； 收集ST68微 泡， 与PBS缓冲溶 液等体积混合后充入C3F8气体， 密封， 置 于4℃冰箱中保存。 6.根据权利要求5所述的前哨 淋巴结双靶向造影剂的制备方法， 其特征在于， 所述在微 泡表面组装纳米碳， 具体包括： 采用静电吸引层自组装的方法在ST68微 泡表面组装纳米碳， 具体包括： 取ST68微泡悬液于下端有开口的离心管中， 注入C3F8气体， 密封， 于4℃冰箱中静置分 层； 待微泡完全漂浮至液面上层后， 弃下层清液， 向微泡中加入带正电荷的壳聚糖溶液， 吸 附； 注入C3F8气体置于4℃冰箱中静置分层， 弃 下层清液； 向ST68微 泡悬液中加入PBS缓冲溶 液， 反复洗涤， 除去过量的壳聚糖； 向ST68微 泡悬液中加入带负电荷的纳米碳水 溶液， 吸附； 用PBS缓冲溶 液洗涤， 得到纳米碳包覆的ST68微 泡； 将所制得的纳米碳包覆的ST68微 泡重新分散 到PBS中， 充气密封， 置 于4℃冰箱中保存。 7.根据权利要求6所述的前哨 淋巴结双靶向造影剂的制备方法， 其特征在于， 所述在装 载纳米碳的微 泡表面修饰透明质酸， 具体包括： 采用化学连接法将透 明质酸上的羧基与ST68微泡上的壳聚糖的氨基进行偶联， 具体包 括： 利用EDC和NHS对透明质酸溶 液进行活化处 理；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114668863 A 2将装载纳米碳的ST68微 泡加入活化后的透明质酸溶 液中， 搅拌后充气孵 育； 用PBS缓冲溶液洗涤， 将所得纳米碳包覆的微泡重新分散到PBS中， 充气密封， 置于4℃ 冰箱中保存。 8.一种权利要求1 ‑3任一项所述的前哨淋巴结双靶向造影剂的应用方法， 其特征在于， 包括： 通过造影剂的双途径成像方式诊断前哨 淋巴结， 所述双途径成像方式包括淋巴途径和 血池途径， 利用磷脂酰丝氨酸可被前哨淋巴结内的巨噬细胞吞噬的作用， 通过淋巴途径靶 向定位定量前哨淋巴结， 并利用透明质酸的亲肿瘤特性， 通过血池途径靶向前哨淋巴结内 的肿瘤细胞； 对手术患者， 根据纳米碳的肉眼示踪能力确定前哨淋巴结的位置并切除； 对非手术患 者， 利用纳米碳的光热效应， 根据造影剂双途径双靶向的定位结果， 对前哨 淋巴结内的肿瘤 细胞进行靶向光热治疗。 9.根据权利要求8所述的前哨 淋巴结双靶向造影剂的应用方法， 其特征在于， 所述通过 淋巴途径靶向定位定量前哨淋巴结 具体包括： 在皮下/皮内或者肿瘤周围注射造影剂， 在术前、 和/或术中、 和/或术后通过淋巴途径 持续靶向前哨淋巴结显影， 以使术后切除的前哨淋巴结与术前定位的前哨淋巴结相匹配； 所述通过血池途径靶向前哨淋巴结内的肿瘤 细胞， 具体包括： 静脉注射造影剂， 透 明质酸靶向肿瘤细胞， 造影剂通过血液回流途径进入淋巴结内， 造 影剂在转移淋巴结/淋巴结内的转移部分聚集， 显示 为高增强； 对手术患者， 所述根据纳米碳的肉眼示踪能力确定前哨淋巴结的位置并切除， 具体包 括： 在术中， 外科切开病变组织后， 根据纳米碳的肉眼示踪能力确定前哨淋巴结的位置并 切除； 在术后， 确定切除的淋巴结与术前定位的淋巴结是否匹配， 在手术室确定切除的淋巴 结是否为超声造影剂的增强显影， 若 是， 则切除的淋巴结就是术前定位的前哨淋巴结， 若不 是， 则继续寻找前哨淋巴结， 在 对超声探头进行无菌处理后， 通过手术视野再次定位前哨淋 巴结， 直至切除的淋巴结和 术前定位的前哨淋巴结完全匹配， 同时增强的淋巴结都是染色 的淋巴结。 10.一种权利要求1 ‑3任一项所述的前哨淋巴结双靶向造影剂的用途， 其特征在于， 将 所述前哨淋巴结双靶向造影剂应用在超声/肉眼可视双模态成像、 双靶向诊断和治疗中。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114668863 A 3